Xác định tổng hàm lượng phenolic trong dịch chiết nấm lớn

TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH KHOA HOÁ HỌC - TÀO THỊ TÂM XÁC ĐỊNH TỔNG HÀM LƢỢNG PHENOLIC TRONG DỊCH CHIẾT NẤM LỚN ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM VINH – 2012 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Tào Thị Tâm Số hiệu sinh viên: 0852040419 Khóa: 49 Ngành: Cơng nghệ hóa thực phẩm Tên đề tài: „„Xác định tổng hàm lượng phenolic dịch chiết nấm lớn Nội dung nghiên cứu - Lý thuyết chung nấm - Lý thuyết chung hợp chất phenolic - Xác định tổng hàm lƣơng phenolic dịch chiết nấm Linh chi đen Họ tên cán hƣớng dẫn : Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày tháng năm 2012 Ngày hoàn thành đồ án : Ngày tháng năm 2012 PGS.TS Nguyễn Hoa Du Ngày Chủ nhiệm môn tháng Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) (Ký, ghi rõ họ, tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án tốt nghiệp ngày tháng năm Ngƣời duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) ii năm 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Tào Thị Tâm Số hiệu sinh viên: 0852040419 Khóa: 49 Ngành: Công nghệ thực phẩm Cán hƣớng dẫn: PGS.TS Nguyễn Hoa Du Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Nhận xét cán hƣớng dẫn: ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2012 Cán hƣớng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) iii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐỘC LẬP- TỰ DO- HẠNH PHÚC - BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Tào Thị Tâm Số hiệu sinh viên: 0852040419 Khóa: 49 Ngành: Cơng nghệ thực phẩm Cán hƣớng dẫn: PGS.TS Nguyễn Hoa Du Cán duyệt: Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Nhận xét cán duyệt: ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… Ngày tháng năm 2012 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) iv LỜI CẢM ƠN Đồ án đƣợc hoàn thành phịng Trung tâm phân tích chuyển giao cơng nghệ Thực phẩm -Môi trƣờng, trƣờng ĐH Vinh Đề tài đồ án đƣợc hỗ trợ phần kinh phí từ đề tài Nghị định thƣ hợp tác nghiên cứu nấm lớn Việt nam Đài Loan PGS.TS Trần Đình Thắng làm chủ nhiệm đề tài Để hoàn thành đƣợc đồ án này, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy giáo PGS.TS Nguyễn Hoa Du giao đề tài, hết lòng hƣớng dẫn, bảo, truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu cho em suốt q trình hồn thành đồ án Em xin xin bày tỏ lòng biết ơn: - Các kỹ thuật viên Trung tâm, cô Ngô Thị Thủy Hà cô Chu Thị Thanh Lâm giúp đỡ tạo điều kiện sử dụng máy móc thiết bị nghiên cứu - Thầy giáo PGS.TS Trần Đình Thắng, giáo - Th.S Đào Thị Thanh Xuân, thầy giáo - Th.S Hồng Văn Trung, thầy giáo bạn hết lòng tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành đồ án Tuy nhiên, đồ án chắn cịn nhiều thiếu sót nên em mong q thầy bạn góp ý để em hồn thiện đồ án học hỏi, rút kinh nghiệm cho công tác nghiên cứu sau Cuối cùng, lần em xin gửi đến tất ngƣời quan tâm, giúp đỡ em hoàn thành đồ án lời cảm ơn chân thành ! Vinh, tháng 12 năm 2012 Sinh viên Tào Thị Tâm v TÓM TẮT Mẫu nấm Linh chi đen đƣợc lấy rừng quốc gia Pù Mát huyện Con Cuông, tỉnh Nghệ An Hàm lƣợng phenolic tổng đƣợc khảo nghiệm loại dịch chiết đƣợc chiết xuất lần lƣợt loại dung mơi có độ phân cực tăng dần là: Ete dầu hỏa, etyl acetate, methanol nƣớc, đƣợc xác định theo phƣơng pháp mô tả tiêu chuẩn Tổ chức quốc tế (ISO) 14.502-1:2005 [33], sử dụng thuốc thử Folin – Ciocalteu dựa ngun tắc mơi trƣờng kiềm phenolic khử Mo+6 W+6 Mo+5, W+5 Mo+4và W+4 tạo thành dung dịch màu xanh dƣơng có hấp thụ cực đại λ = 765 nm, đƣợc xác định phƣơng pháp quang phổ Kết xác định đƣợc hàm lƣợng hợp chất phenolic chiết xuất nƣớc cao (4,064 - 4,793) mg/ml, chiết xuất etyl acetate (1,524 - 1,801) mg/ml chiết xuất methanol (0,643 - 1,057) mg/ml; Còn chiết xuất ete dầu hỏa có hàm lƣợng phenolic tƣơng đối nhỏ (0,0852 - 0,1022) mg/ml So sánh tổng hàm lƣợng phenolic dịch chiết nấm Linh chi đen đƣợc lấy rừng quốc gia Pù Mát với tổng hàm lƣợng phenolic loại nấm mẫu thực vật đƣợc nghiên cứu trƣớc ta thấy: „„Khả hòa tan hợp chất phenolic loại dung môi khác khác nhau, tùy thuộc vào chất hợp chất phenolic đó‟‟ vi MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN v MỞ ĐẦU 1.1 Lý chọn đề tài Nhiệm vụ nghiên cứu Đối tƣợng nghiên cứu CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Nấm Linh chi 1.1.1 Khái quát chung nấm Linh chi 1.1.2 Vị trí phân loại 1.1.3 Phân loại 1.1.4 Đặc điểm hình thái nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) 1.1.5 Thành phần hóa học hoạt chất sinh học nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) 1.1.6 Tác dụng chữa bệnh nấm Linh chi 1.2 Nấm linh chi đen 10 1.2.1 Mô tả 10 1.2.2 Thành phần hoá học 11 1.2.3 Sử dụng hoạt tính 11 1.3 Tổng quan phenolic 12 1.3.1 Giới thiệu hợp chất phenolic thực vật 12 1.3.2 Phân loại hợp chất phenolic 13 1.3.3 Một số hợp chất phenolic điển hình 14 1.3.4 Các hợp chất phenolic nấm 21 1.3.5 Hoạt tính sinh học phenolic 22 1.4 Phƣơng pháp trắc quang xác định hàm lƣợng hợp chất phenolic 24 1.5 Đánh giá kết phân tích 24 1.5.1 Phƣơng pháp xử lý kết phân tích 24 1.5.2 Phƣơng pháp thống kê xử lý đƣờng chuẩn 26 1.6 Một số loại dung môi phổ biến thƣờng sử dụng chiết nấm 26 Chƣơng II KỸ THUẬT THỰC NGHIỆM 28 2.1 Dụng cụ, thiết bị, hóa chất 28 2.1.1 Dụng cụ, thiết bị 28 2.1.2 Hóa chất 28 vii 2.1.3 Pha chế dung dịch 29 2.1.4 Xử lý mẫu 31 Chƣơng III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Xác định tổng phenolic dịch chiết nấm Linh chi đen 39 3.1.1 Xây dựng phƣơng trình đƣờng chuẩn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ axit gallic 39 3.1.2 Kết xác định hàm lƣợng phenolic trong dịch chiết nấm Linh chi đen phƣơng pháp trắc quang 44 3.1.3 Nhận xét kết 53 3.1.4 Khả hịa tan nhóm hợp chất phenolic loại dung môi khác 53 KẾT LUẬN 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 viii DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1 loại nấm Linh chi phân loại theo màu sắc Hình 1.2 Nấm linh chi Hình 1.3 Ảnh nấm Linh chi đen lấy rừng quốc gia Pù Mát 11 Hình 1.4 Các Flavonoid tự nhiên 15 Hình 1.5 Các acid phenolic tự nhiên 16 Hình 1.6: Đơn vị cấu trúc lignin 19 Hình 1.7 Một số hợp chất phenolic nấm 22 Hình 3.1 Phổ UV -ViS mẫu chuẩn axit gallic methanol nồng độ (mg/ml): (1): 0,01; (2): 0,035; (3): 0,04; (4): 0,045; (5): 0.07; (6): 0,08 λ= 765 nm 39 Hình 3.2 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ axit gallic methanol (l = 1,0cm, λ = 765 nm) 40 Hình 3.3 Phổ UV -ViS mẫu chuẩn axit gallic nƣớc nồng độ (mg/ml): (1): 0,01; (2): 0,02; (3): 0,03; (4): 0,04; (5): 0.07; (6): 0,08 λ= 765 nm 42 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ axit gallic nƣớc (l = 1,0cm, λ = 765 nm) Ta hịa tan lại nƣớc cất nóng nồng độ 0,6 mg/ml tức hòa tan lại 0,24 g cao 400 ml nƣớc cất nóng Sau đem phân tích đƣợc lƣu trữ 0C trƣớc sử dụng Phép đo: Tiến hành tƣơng tự nhƣ mô tả Tiến hành làm đồng thời mẫu đối chứng cách thay 1ml mẫu 1ml nƣớc cất, ta thu đƣợc kết sau: 50 Hình 3.8 Phổ UV -ViS dịch chiết nấm nước λ= 765 nm Từ phƣơng trình đƣờng chuẩn tuân theo định luật Beer: ∆Ai = 10,12 Ci + 0,0416 Và kết thực nghiệm, tiến hành xử lý ta thu đƣợc kết nhƣ sau: Bảng 3.6 Kết tính nồng độ phenolic dịch chiết nấm nước theo phương trình đường chuẩn Lần đo Thể tích dung dịch phân tích (ml) ∆Ai Ci 1 0,48854 0,044164032 0,48844 0,04415415 0,48807 0,044117589 Để đánh giá độ xác phƣơng pháp, chúng tơi sử dụng hàm phân bố Student để đánh giá kết thu đƣợc xác định hàm lƣợng phenolic mẫu thật Chọn C = 0,04415415 ; C ≈ X ; yi = xi -C n Ta có: Giá trị trung bình: X  C   i 1 - Phƣơng sai: S X  X n 1 i  yi = 0,044145257 n = 5,98549E-10 - Độ lệch chuẩn trung bình: S X  S2 = 1,4125E-05 n 51 ... tài: „? ?Xác định tổng hàm lượng phenolic dịch chiết nấm lớn Nội dung nghiên cứu - Lý thuyết chung nấm - Lý thuyết chung hợp chất phenolic - Xác định tổng hàm lƣơng phenolic dịch chiết nấm Linh... 3) Hàm lượng phenolic tổng (mg GAEs/g nấm khô) thu chiết dung môi khác nhau: Ete dầu hỏa, etyl acetate, methanol nước loại nấm. [37] 55 Từ Bảng 3.9 (Table 3) ta thấy: Tổng hàm lƣợng phenolic chiết. .. thấy tổng hàm lƣợng phenolic chiết xuất etyl acetate cao so với chiết xuất dung môi khác Đứng thứ hai chiết xuất chiết methanol, thứ ba chiết xuất chiết chloroform cuối thấp nhexan Từ kết tổng hàm