Khảo sát mức độ nhạy cảm của một số chủng candida spp. phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư với một số thuốc kháng nấm.pdf

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH ĐINH QUANG LONG KHẢO SÁT MỨC Độ NHẠY CẢM CỦA MỘT SÓ CHỦNG CANDIDA SPP PHÂN LẠP TÙ MIỆNG BỆNH NHÂN UNG THU VỚI MỌT SÓ THUÓC KHÁNG NÁM KHÓA LUẬN TỔT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC TP HCM-2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH ĐINH QUANG LONG KHẢO SÁT MỨC Độ NHẠY CẢM CỦA MỘT SÓ CHỦNG CANDIDA SPP PHÂN LẠP TÙ MIỆNG BỆNH NHÂN UNG THU VỚI MỌT SÓ THUÓC KHÁNG NÁM Chuyên ngành: Quản lý cung ứng thuốc KHÓA LUẬN TỔT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC Hướng dẫn khoa học: DS Phạm Ben Chí TP HCM-2019 LỜI CẢM ƠN Trong suốt q trình hồn thành khóa luận này, em nhận hướng dần nhiệt tình, giúp đờ quý báu thầy cô bạn Với lịng kính trọng biết ơn sâu sắc, em xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới: Ban Giám Hiệu, Khoa Dược - Trường Đại học Nguyền Tất Thành, Bộ môn Vi sinh - Ký sinh trùng tạo điều kiện để em hồn thành tốt khóa luận Thầy DS Phạm Bền Chí ThS Lê Quang Hạnh Thư, người thầy kính mến tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, ân cần giúp đờ bảo đe em hồn thành tốt khóa luận tốt nghiệp Cô ThS Nguyễn Thị Ngọc Yen, cô ThS Nguyễn Thanh To Nhi, cô Nguyễn Hữu Phương Thảo chị Võ Thị Nhàn ln nhiệt tình giải đáp khó khăn, thắc mắc em suốt thời gian dài thực đề tài Các bạn Phạm Thúy Hường, Đinh Thị Lan Linh, Tô Lý Cường, Trần Thị Hiền Lương, Nguyễn Lê Bảo Ngọc đong hành hồ trợ Long trình nghiên cứu Xin trân trọng cảm ơn! Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng năm 2019 Đinh Quang Long LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu kết nêu khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác SINH VIÊN sv ĐINH QUANG LONG MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC Sơ ĐỒ VÀ HÌNH V DANH MỤC BẢNG vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan vi nấm Candida 1.1.1 Phân loại Candida 1.1.2 Hình thể chung 1.1.3 Khả gây bệnh Candida 1.1.4 Đường lây truyền Candida 1.2 Tổng quan bệnh Candida miệng 1.3 Tổng quan số thuốc kháng nấm 1.3.1 Azole 1.3.2 Polyene 10 1.3.3 Echinocandin 11 1.3.4 Allylamine 11 1.3.5 Pyrimidine 11 1.3.6 Tình trạng đề kháng thuốc điều trị Candida miệng bệnh nhân ung thư 11 1.4 Tổng quan phương pháp định danh .14 1.4.1 Định danh dựa vào đặc điểm hình thái 14 1.4.2 Định danh thử nghiệm sinh hóa 15 1.4.3 Định danh kỳ thuật sinh học 17 1.5 Phương pháp thử tính nhạy cảm Candida với thuốc kháng nấm 17 1.5.1 Phương pháp khuếch tán đĩa [ 11, 20] 17 1.5.2 Phương pháp pha loãng 17 CHƯƠNG ĐÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúu 19 2.1 Đối tượng 19 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2 Thuốc thử nghiệm 19 2.1.3 Môi trường thử nghiệm 19 2.1.4 Hóa chất, dung mơi 20 2.1.5 Trang thiết bị, dụng cụ 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Khảo sát hình thái khn lạc mơi trường CHROMagar Candida 22 2.2.2 Thử nghiệm sinh ống mầm [5] 23 2.2.3 Thử nghiệm sinh bào tử bao dày 24 2.2.4 Khảo sát mức độ nhạy cảm Candida spp với số thuốc kháng nấm 25 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN .28 3.1 Định danh sơ .28 3.1.1 Khảo sát hình thái khuân lạc môi trường CHROMagar Candida 28 3.1.2 Thử nghiệm sinh ống mầm 29 3.1.3 Thử nghiệm sinh bào tử bao dày 31 3.1.4 Ket luận định danh sơ 33 3.2 Kết nhạy cảm Candida spp với số thuốc kháng nấm 37 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44 4.1 Kết luận 44 4.2 Đề nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1: Khuẩn lạc Candida spp môi trường CHROMagar Candida PL-1 ii PHỤ LỤC 2: Ket thử nghiệm sinh ống mầm Candida spp môi trường huyết PL-2 PHỤ LỤC 3: Ket thử nghiệm sinh bào tử bao dày Candida spp môi trường bột ngô PL-3 PHỤ LỤC 4: Ket khảo sát mức độ nhạy cảm Candida spp với số thuốc kháng nấm môi trường MH A GMB PL-4 111 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid desoxyribonucleic AMB Amphotericin B CFU Colony Forming Units (Đon vị khuan lạc) CLSI Clinical & Laboratory Standards Institute (Viện tiêu chuan phịng thí nghiệm lâm sàng) CLT Clotrimazole CMA Com Meal Agar FDA Food and Drug Administration (Cục quản lý Thực phâm Duọc phẩm Hoa Kỳ) FLU Fluconazole HIV Human Immunodeficiency Virus I Intermediate (Nhạy cảm trung gian) MCZ Miconazole MBC Minimum Bactericidal Concentration (Nồng độ diệt khuẩn tối thiểu) MFC Minimum Fungicidal Concentration (Nồng độ diệt nấm tối thiểu) MHA Mueller Hinton Agar MHAGMB Mueller Hinton Agar_Glucose Methylene Blue MIC Minimum Inhibitory Concentration (Nồng độ tối ÚC che toi thieu) NY Nystatin PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại gen) R Resistance (De kháng) s Sensitive (Nhạy cảm) SDA Sabouraud Dextrose Agar TP.HCM Thành phố Hồ Chí Minh iv DANH MỤC Sơ ĐỒ VÀ HÌNH Trang Hình 1.1 Vị trí Candida hệ thống phân loại Hình 1.2 Các dạng hình thể Candida [45] Hình 1.3 Hình thể c.albicans [37, 39] Hình 1.4 Các nhóm thuốc kháng nấm [22] Hình 2.1 Khuấn lạc Candida spp mơi trường CHROMagar Candida [31] 23 Hình 2.2 Ống mầm c.albicans (400x) [9] 24 Hình 2.3 Mơ hình đường cấy thử nghiệm sinh bào tử bao dày 24 Hình 2.4 Phưong pháp khuếch tán đĩa 26 Hình 3.1 Khuẩn lạc cùa số mầu Candida spp CHROMagar Candida 29 Hình 3.2 Hình thể số mầu Candida spp thử nghiệm huyết 31 Hình 3.3 Hình the so Candida spp mơi trường thạch bột ngơ 33 Hình 3.4 Biểu đồ tỉ lệ Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư 35 Hình 3.5 Hình thái C.tropicalis (mầu 69) 37 Hình 3.6 Tỉ lệ mức độ nhạy cảm với thuốc kháng nấm mầu Candida spp 39 Sơ đồ 2.1 Quy trình định danh sơ khảo sát tính nhạy cảm Candida spp với thuốc kháng nấm [9] 22 V DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Hình thể cùa số lồi Candida mơi trường bột ngơ [14] Bảng 1.2 Khả đồng hóa carbohydrate số loài Candida spp [14] 15 Bảng 2.1 Đặc diêm khuân lạc CHROMagar Candida Candida spp [31] 23 Bảng 2.2 Bảng tham chiếu đường kính vịng kháng nấm (theo CLSI thông tin nhà sản xuất) 27 Bảng 3.1 Đặc điểm khuẩn lạc môi trường CHROMagar Candida 28 Bảng 3.2 Đặc diem Candida spp môi trường huyết 30 Bảng 3.3 Đặc diem Candida spp môi trường bột ngô 32 Bảng 3.4 Ket định danh sơ .34 Bảng 3.5 Ket số nghiên cứu nước tỉ lệcác loài Candida spp gây bệnh nấm miệng bệnh nhân ung thư 35 Bảng 3.6 Tỉ lệ mức đáp ứng với số thuốc thử nghiệm Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư 38 Bảng 3.7 Tỉ lệ đáp ứng thuốc lồi/nhóm lồi Candida spp với thuốc kháng nấm thử nghiệm 40 Bảng 3.8 Số lượng tỉ lệ nhạy cảm trung gian đề kháng chủng Candida spp 42 Bảng 3.9 Ket số nghiên cứu mức nhạy cảm Candida spp với thuốc kháng nấm 42 VI ... nghiên cứu khảo sát Candida đối tượng bệnh nhân ung thư Vì vậy, chúng tơi thực đề tài ? ?Khảo sát mức độ nhạy cảm số chủng Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư với số thuốc kháng nấm”... nham khảo sát tỉ lệ loài Candida gây bệnh Candida miệng bệnh nhân ung thư đánh giá mức độ nhạy cảm cùa chủng phân lập với số thuốc kháng nấm Đối tượng phương pháp nghiên cứu Sơ định danh chủng nấm... nước tỉ lệcác loài Candida spp gây bệnh nấm miệng bệnh nhân ung thư 35 Bảng 3.6 Tỉ lệ mức đáp ứng với số thuốc thử nghiệm Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư 38 Bảng