Nghiên cứu được thực hiện nhằm khảo sát và đánh giá hoạt tính kháng nấm của một số tinh dầu trên các chủng Candida phân lập từ bệnh nhận ung thư bị nấm miệng. Hoạt tính tinh dầu Quế (Cinnamomum cassia), dầu Riềng (Alpinia officinarum), tinh dầu Hương nhu trắng (Ocimum gratissimum) được đánh giá sơ bộ trên chủng Candida albicans ATCC 10321 và Candida tropicalis UPCC YS1702 trước khi tiến hành thử nghiệm trên các chủng bệnh phẩm.
KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM CỦA MỘT SỐ TINH DẦU TRÊN CHỦNG CANDIDA PHÂN LẬP TỪ BỆNH NHÂN UNG THƢ Trần Hoàng Thủy Tiên, Trần Bảo Minh Hiền, Phạm Thị Ngọc Trâm, Ngô Huỳnh Phƣơng Uyên, Huỳnh Quốc Đạt Khoa Dược, Trường Đại học Cơng Nghệ TP Hồ Chí Minh (HUTECH) TÓM TẮT Nghiên cứu thực nhằm khảo sát đánh giá hoạt tính kháng nấm số tinh dầu chủng Candida phân lập từ bệnh nhận ung thư bị nấm miệng Hoạt tính tinh dầu Quế (Cinnamomum cassia), dầu Riềng (Alpinia officinarum), tinh dầu Hương nhu trắng (Ocimum gratissimum) đánh giá sơ chủng Candida albicans ATCC 10321 Candida tropicalis UPCC YS1702 trước tiến hành thử nghiệm chủng bệnh phẩm Nồng độ tối thiểu ức chế phát triển vi sinh vật (MIC) xác định phương pháp pha loãng thạch Kết thực nghiệm cho thấy MIC tinh dầu Quế, dầu Riềng tinh dầu Hương nhu trắng chủng Candida khoảng 0,1-0,2 µl/ml, 0,2-3,2 µl/ml 0,25-1 µl/ml Kết thu cung cấp liệu khoa học tiềm phát triển dạng chế phẩm có nguồn gốc từ dược liệu để điều trị bệnh nhiễm nấm miệng bệnh nhân ung thư Từ khóa: Candida, Hương nhu, kháng nấm, Quế, Riềng ĐẶT VẤN ĐỀ Nhiễm nấm Candida miệng bệnh hội phổ biến ngày quan tâm tình trạng đề kháng gia tăng với thuốc sẵn có dẫn đến khó khăn việc điều trị [1], [5] Nguy mắc bệnh xảy cao bệnh nhân suy giảm miễn dịch, HIV/AIDS, bệnh nhân ung thư [4], [2], [3] Các phương pháp điều trị cho bệnh nấm miệng bao gồm sử dụng thuốc chống nấm chỗ toàn thân polyen, azole Tuy nhiên, số lượng thuốc kháng nấm thị trường khơng nhiều Vì vậy, việc phát triển thuốc có nguồn gốc từ dược liệu đặc biệt ý Tinh dầu chiết xuất từ dược liệu với khả ức chế phát triển vi nấm hoạt chất tiềm ngành dược Mục tiêu đề tài thực nhằm khảo sát hoạt tính kháng nấm Candida số loại tinh dầu, cung cấp liệu khoa học phát triển dạng thuốc có nguồn gốc từ dược liệu để điều trị bệnh nhiễm nấm miệng bệnh nhân ung thư VẬT LIỆU – PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 2.1.1 Các chất thử nghiệm – Tinh dầu Quế, dầu Riềng Hương nhu trắng chiết cung cấp môn Vi ký sinh, Đại học Y Dược TP HCM, đạt tiêu chuẩn sở chất lượng 2.1.2 Vi nấm thử nghiệm – Chủng đối chiếu Candida albicans ATCC 10231, Cadida tropicalis UPCC YS1702 516 – Bệnh phẩm Candida miệng phân lập định danh nhóm nghiên cứu khoa Dược - Đại học Y Dược TP HCM 2.1.3 Môi trường – Sabouraud Dextrose Agar (SDA) – Nước muối sinh lý + 0,05% Tween 80 2.1.4 Thiết bị dụng cụ – Tủ cấy LabTech – Lò hấp tiệt trùng Hirayama – Tủ ấm LabTech – Máy vortex Labnet – Cân phân tích Ohaus – Micropipet số dụng cụ thuỷ tinh khác 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Khảo sát hoạt tính kháng nấm số loại tình dầu chủng Candida albicans Candida tropicalis cho kết tinh dầu Quế, Hương nhu trắng dầu Riềng cho hoạt tính kháng nấm tốt Các loại tinh dầu sau thử nghiệm chủng vi nấm Candida phân lập từ bệnh nhân bị Candida miệng Chuẩn bị chất thử: Chất thử hoà tan trực tiếp vào DMSO thành dung dịch mẹ phân tán vào môi trường (nồng độ DMSO môi trường thử nghiệm khơng q 1%) Pha lỗng liên tục ½ môi trường để dãy nồng độ thử nghiệm từ cao đến thấp Dãy nồng độ tinh dầu Quế 0,05 – 0,8 µl/ml, tinh dầu Hương nhu trắng 0,125 – µl/ml dầu Riềng 0,2 – 3,2 µl/ml Đổ mơi trường chứa chất thử đĩa petri tiệt trùng, đĩa ứng với nồng độ chất thử xác định Khi thạch đơng hồn tồn bắt đầu tiến hành chấm vi nấm thử nghiệm Chuẩn bị vi nấm: Vi nấm Candida cấy hoạt hóa đĩa thạch SDA, ủ 37C 48 Lấy khoảng khóm nấm có đường kính khoảng 1mm, hịa vào ống nghiệm chứa nước muối sinh lí có 0,05% Tween 80 Vortex dịch nấm vịng 20 – 30 giây Điều chỉnh dịch treo nấm dựa dung dịch chuẩn McFarland 0,5 giá trị tương đương với – × 10 CFU/ml Chấm vi nấm lên thạch: Tiến hành chấm 10 µl dịch nấm loại lên bề mặt thạch (nồng độ nấm vết chấm 10 CFU/ml) o Ủ vi nấm nhiệt độ 37 C 48 giờ, sau đọc kết MIC nồng độ thấp ức chế phát triển vi nấm quan sát mắt thường Mỗi thí nghiệm lặp lại lần, lấy giá trị MIC trung bình 517 KẾT QUẢ 3.1 Khảo sát hoạt tính số loại tinh dầu Kết khảo sát sơ hoạt tính kháng Candida in vitro tinh dầu Quế, dầu Riềng tinh dầu Hương nhu trắng trình bày bảng Bảng Khảo sát sơ hoạt tính kháng Candida in vitro số loại tinh dầu Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) Quế Dầu Riềng Hƣơng nhu trắng Candida albicans 0,23 1,6 0,67 Candida tropicalis 0,23 0,53 3.2 Đánh giá hoạt tính kháng Candida in vitro loại tinh dầu chủng bệnh phẩm 3.2.1 Hoạt tính kháng nấm tinh dầu Quế Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro tinh dầu Quế số nấm Candida albicans (CA) Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) CA1 0,20 CA2 0,13 CA3 0,12 CA4 0,13 CA5 0,13 CA6 0,10 CA7 0,10 CA8 0,20 CA9 0,20 Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro tinh dầu Quế Candida non-albicans (CNA) Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) CNA1 0,12 CNA2 0,17 CNA3 0,20 CNA4 0,20 CNA5 0,15 CNA6 0,20 CNA7 0,20 CNA8 0,20 Kết từ bảng cho thấy nồng độ ức chế tối thiểu phát triển nấm C albicans C non-albicans chủng bệnh phẩm tương đương MIC nằm khoảng từ 0,1-0,2 µl/ml 518 3.2.2 Hoạt tính kháng nấm dầu Riềng Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro dầu Riềng Candida albicans Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) CA1 0,2 CA2 3,2 CA3 2,9 CA4 3,2 CA5 1,0 CA6 2,4 CA7 0,2 CA8 2,65 CA9 3,2 Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro dầu Riềng Candida non-albicans Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) CNA1 0,2 CNA2 3,2 CNA3 0,8 CNA4 2,9 CNA5 1,2 CNA6 0,4 CNA7 1,6 CNA8 2,6 Kết từ bảng cho thấy mức độ nhạy với dầu Riềng chủng bệnh phẩm khác MIC khoảng từ 0,2 đến 3,2 µl/ml 3.2.3 Hoạt tính kháng nấm tinh dầu Hương nhu trắng Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro tinh dầu Hương nhu trắng Candida albicans Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) CA1 CA2 CA3 CA4 CA5 0,25 CA6 CA7 CA8 CA9 519 Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro tinh dầu Hương nhu trắng Candida non-albicans Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) CNA1 CNA2 CNA3 CNA4 CNA5 CNA6 CNA7 CNA8 Kết từ bảng cho thấy nồng độ ức chế tối thiểu phát triển nấm C albicans C nonalbicans tương đương chủng bệnh phẩm MIC vi nấm đa số µl/ml Chỉ có chủng CA5 có MIC 0,25 µl/ml KẾT LUẬN Tinh dầu Quế, dầu Riềng tinh dầu Hương nhu trắng cho hoạt tính kháng nấm tốt chủng bệnh phẩm tinh dầu Quế có hoạt tính tốt với MIC thấp loại chất thử Đây chất tiềm nghiên cứu sản xuất dạng thuốc kháng nấm có nguồn gốc từ dược liệu để điều trị bệnh nhiễm nấm Tuy nhiên, cần có đánh giá sâu độc tính tính kích ứng chất trình nghiên cứu phát triển thuốc TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Arun Singh, Renuka Verma, Aditi Murari, Ashutosh Agrawal (2014) “Oral candidiasis: An overview”, J Oral Maxillofac Pathol 18(Suppl 1): S81–S85 doi: 10.4103/0973-029X.141325 [2] Khan P Anwar, A Malik, Khan H Subhan (2012) "Profile of candidiasis in HIV infected patients" 4(4): 204–209 [3] Rajesh V Lalla,corresponding author Marie C Latortue, et al (2010) "A systematic review of oral fungal infections in patients receiving cancer therapy" doi: 10.1007/s00520-010-0892-z [4] S Aravind Warrier, S Sathasivasubramanian (2015) "Human immunodeficiency virus induced oral candidiasis" doi: 10.4103/0975-7406.163577 [5] Williams D, Lewis M (2011) 10.3402/jom.v3i0.5771 520 "Pathogenesis and treatment of oral candidosis" doi: ... 3.1 Khảo sát hoạt tính số loại tinh dầu Kết khảo sát sơ hoạt tính kháng Candida in vitro tinh dầu Quế, dầu Riềng tinh dầu Hương nhu trắng trình bày bảng Bảng Khảo sát sơ hoạt tính kháng Candida. .. Candida in vitro loại tinh dầu chủng bệnh phẩm 3.2.1 Hoạt tính kháng nấm tinh dầu Quế Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro tinh dầu Quế số nấm Candida albicans (CA) Vi nấm MIC trung bình (µl/ml) CA1 0,20... Kết từ bảng cho thấy mức độ nhạy với dầu Riềng chủng bệnh phẩm khác MIC khoảng từ 0,2 đến 3,2 µl/ml 3.2.3 Hoạt tính kháng nấm tinh dầu Hương nhu trắng Bảng Hoạt tính kháng nấm in vitro tinh dầu