Khảo sát mức độ nhạy cảm của một số chủng Candida spp. phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư với một số thuốc kháng nấm.pdf

NTTU-NCKH-04 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỎNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ• - GIẢNG VIÊN 2019 Tên đề tài: KHẢO SÁT MỨC ĐỘ NHẠY CẢM CỦA MỘT SỐ CHỦNG CANDIDA SPP PHÂN LẬP TỪ MIỆNG BỆNH NHÂN UNG THƯ VỚI MỘT SỐ THUỐC KHÁNG NẤM Sổ hợp đồng: 2019.01.63 Chủ nhiệm đề tài: PHẠM BỀN CHÍ Đơn vị cơng tác: KHOA DƯỢC - TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỀN TÁT THÀNH Thời gian thực hiện: 04/2019 - 12/2019 TP Hồ Chỉ Minh, ngày 28 tháng 11 năm 2019 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KÉT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO CÁN Bộ• - GIẢNG VIÊN 2019 Tên đề tài: KHẢO SÁT MÚ’C ĐỘ NHẠY CẢM CỦA MỘT SỐ CHỦNG CANDIDA SPP PHÂN LẬP TỪ MIỆNG BỆNH NHÂN UNG THƯ VỚI MỘT SỐ THUỐC KHÁNG NÁM Sổ họp đồng : 2019.01.63 Chủ nhiệm đề tài: PHẠM BÈN CHÍ Đơn vị cơng tác: KHOA DƯỢC - TRƯỜNG ĐẠI HỌC NGUYỄN TÁT THÀNH Thời gian thực hiện: 04/2019 - 12/2019 TP Hồ Chỉ Minh, ngày 28 tháng 11 năm 2019 MỤC LỤC Trang MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT V DANH MỤC Sơ ĐỒ VÀ HÌNH vi DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐÀU CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan vi nấm Candida 1.1.1 Phân loại Candida 1.1.2 Hình thể chung 1.1.3 Khả gây bệnh Candida 1.1.4 Đường lây truyền Candida 1.2 Tống quan bệnh Candida miệng 1.3 Tống quan số thuốc kháng nấm 1.3.1 Azole 1.3.2 Polyene 10 1.3.3 Echinocandin 11 1.3.4 Allylamine 11 1.3.5 Pyrimidine 11 1.3.6 Tình trạng đề kháng thuốc điều trị Candida miệng bệnh nhân ung 11 thư 1.4 Tổng quan phương pháp định danh 14 1.4.1 Định danh dựa vào đặc điếm hình thái 14 1.4.2 Định danh thử nghiệm sinh hóa 15 1.4.3 Định danh kỳ thuật sinh học phân tử 17 ii 1.5 Phương pháp thử tính nhạy cảm Candida với thuốc kháng nấm 17 1.5.1 Phương pháp khuếch tán đĩa [ 11, 20] 17 1.5.2 Phương pháp pha loăng 17 CHƯƠNG NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CÚƯ 19 2.1 Đối tượng 19 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2 Thuốc thừ nghiệm 19 2.1.3 Mơi trường thử nghiệm 19 2.1.4 Hóa chất, dung môi 20 2.1.5 Trang thiết bị, dụng cụ 20 2.2 Phương pháp nghiên cứu 21 2.2.1 Khảo sát hình thái khuân lạc môi trường CHROMagar Candida 23 2.2.2 Thử nghiệm sinh ống mầm [5] 24 2.2.3 Thử nghiệm sinh bào tử bao dày 24 2.2.4 Khảo sát mức độ nhạy cảm Candida spp với số thuốc kháng nấm 25 2.2.5 Định danh phương pháp giải trình tự gen 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Định danh sơ 28 3.1.1 Khảo sát hình thái khuẩn lạc môi trường CHROMagar Candida 28 3.1.2 Thử nghiệm sinh ống mầm 30 3.1.3 Thử nghiệm sinh bào tử bao dày 31 3.1.4 Kết luận định danh sơ 33 3.2 Ket nhạy cảm Candida spp với số thuốc kháng nấm 37 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 4.1 Kết luận 43 iii 4.2 Đe nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHAO .44 IV DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid desoxyribonucleic AMB Amphotericin B CFU Colony Forming Units (Đơn vị khuan lạc) CLSI Clinical & Laboratory Standards Institute (Viện tiêu chuẩn phịng thí nghiệm lâm sàng) CLT Clotrimazole CMA Com Meal Agar FDA Food and Drug Administration (Cục quản lý Thực phâm Dược phẩm Hoa Kỳ) FLU Fluconazole HIV Human Immunodeficiency Virus I Intermediate (Nhạy cảm trung gian) MCZ Miconazole MBC Minimum Bactericidal Concentration (Nồng độ diệt khuẩn tối thiêu) MFC Minimum Fungicidal Concentration (Nồng độ diệt nấm tối thiếu) MHA Mueller Hinton Agar MHA GMB Mueller Hinton Agar_Glucose Methylene Blue MIC Minimum Inhibitory Concentration (Nồng độ tối ức chế tối thiếu) NY Nystatin PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng khuếch đại gen) R Resistance (Đe kháng) s Sensitive (Nhạy cảm) SDA Sabouraud Dextrose Agar TP.HCM Thành phố Hồ Chí Minh V DANH MỤC Sơ ĐỒ VÀ HÌNH Trang Hình 1.1 Vị trí Candida hệ thống phân loại Hình 1.2 Các dạng hình thể Candida [45] Hình 1.3 Hình thể c.albicans [37, 39] Hình 1.4 Các nhóm thuốc kháng nấm [22] Hình 2.1 Khuấn lạc Candida spp mơi trường CHROMagar Candida [31] 23 Hình 2.2 Ống mầm c.albicans (400x) [9] 24 Hình 2.3 Mơ hình đường cấy thử nghiệm sinh bào tử bao dày 25 Hình 2.4 Phưong pháp khuếch tán đĩa 26 Hình 3.1 Khuẩn lạc cùa số mầu Candida spp CHROMagar Candida 29 Hình 3.2 Hình thể số mầu Candida spp thử nghiệm huyết 31 Hình 3.3 Hình the so Candida spp môi trường thạch bột ngơ 33 Hình 3.4 Biểu đồ tỉ lệ Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư 35 Hình 3.5 Hình thái C.tropicalis (mầu 69) 37 Hình 3.6 Tỉ lệ mức độ nhạy cảm với thuốc kháng nấm mầu Candida spp 39 Sơ đồ 2.1 Quy trình định danh sơ khảo sát tính nhạy cảm Candida spp với thuốc kháng nấm [9] 22 VI DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Hình thể cùa số lồi Candida mơi trường bột ngơ [14] Bảng 1.2 Khả đồng hóa carbohydrate số loài Candida spp [14] 16 Bảng 2.1 Đặc diêm khuân lạc CHROMagar Candida Candida spp [31] 23 Bảng 2.2 Bảng tham chiếu đường kính vịng kháng nấm (theo CLSI thông tin nhà sản xuất) 27 Bảng 3.1 Đặc điểm khuẩn lạc môi trường CHROMagar Candida 28 Bảng 3.2 Đặc diem Candida spp môi trường huyết 30 Bảng 3.3 Đặc diem Candida spp môi trường bột ngô 32 Bảng 3.4 Ket định danh sơ 34 Bảng 3.5 Ket số nghiên cứu nước tỉ lệcác loài Candida spp gây bệnh nấm miệng bệnh nhân ung thư 35 Bảng 3.6 Tỉ lệ mức đáp ứng với so thuốc thử nghiệm Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư 38 Bảng 3.7 Ket số nghiên cứu mức nhạy cảm Candida spp với thuốc kháng nấm 41 Bảng 3.8 Số lượng tỉ lệ nhạy cảm trung gian đề kháng chủng Candida spp 42 vii TÓM TẮT KẾT QUẢ ĐẠT ĐƯỢC Sản phầm đăng ký thuyết Sản phẩm thực đạt minh Quy trình, kết định danh Quy trinh, kết định danh số chủng Candida spp số chủng Candida spp tỉ lệ phân bố số loài tỉ kệ phân bố số loài Candida spp với cỡ mẫu thu Candida spp với cỡ mầu thu đuợc Ket mức độ nhạy cảm/ Ket mức độ nhạy cảm/ đề kháng đề chủng Candida spp lâm sàng với tác nhân clotrimazole, kháng kháng cùa chủng Candida spp lâm sàng với tác nhân kháng nấm: nystatin, nấm: amphotericin B fluconazole nystatin, fluconazole, amphotericin B miconazole 01 báo đăng Tạp chí 01 báo đăng Kỷ yếu Khoa học công nghệ trường Hội nghị ĐH Nguyễn Tất Đại học Nguyễn Tất Thành Thành tạp chí chuyên ngành nước Thời gian thực hiện: từ tháng 4/2019 đến tháng 12/2019 viii MỞ ĐÀU Tỷ lệ mắc bệnh ung thư giới ngày gia tăng Theo thống kê vào năm 2000, có 10 triệu ca ung thư toàn giới [35] Điều đáng lo ngại đây, đối tượng lại dề bị nhiềm nấm miệng Candida, đặc biệt đối tượng trải qua liệu pháp xạ trị, hóa trị tác dụng phụ làm khơ miệng, giảm tiết nước bọt Các thuốc dùng điều trị Candida miệng phần lớn thuộc nhóm azole: miconazole (gel bơi), itraconazole, fluconazole (uống), clotrimazole (ngậm, bơi); nhóm polyene: nystatin (ngậm, bơi), amphotericin B (uống) Tình trạng đề kháng thuốc Candida có dấu hiệu gia tăng, đặc biệt nhóm thuốc azole Muốn lựa chọn thuốc, cần tiến hành định danh thử nhạy cảm cùa Candida với thuốc kháng nấm Trong năm gần đây, Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu khảo sát Candida đối tượng bệnh nhân ung thư Vì vậy, chúng tơi thực đề tài “Khảo sát mức độ nhạy cảm số chủng Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư với số thuốc kháng nấm” Mục tiêu đề tài gồm: Định danh sơ 60 mẫu Candida spp ly trích từ miệng bệnh nhân ung thư phương pháp thường quy gom hình thái CHROMagar Candida, thử nghiệm sinh ống mầm sinh bào tử bao dày Khảo sát mức độ nhạy cảm 60 mẫu Candida spp với thuốc kháng nấm gồm clotrimazole, nystatin, amphotericin B, fluconazole miconazole ... nhiều nghiên cứu khảo sát Candida đối tượng bệnh nhân ung thư Vì vậy, thực đề tài ? ?Khảo sát mức độ nhạy cảm số chủng Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư với số thuốc kháng nấm” Mục... số chủng Candida spp số chủng Candida spp tỉ lệ phân bố số loài tỉ kệ phân bố số loài Candida spp với cỡ mẫu thu Candida spp với cỡ mầu thu đuợc Ket mức độ nhạy cảm/ Ket mức độ nhạy cảm/ đề kháng. .. loài Candida spp gây bệnh nấm miệng bệnh nhân ung thư 35 Bảng 3.6 Tỉ lệ mức đáp ứng với so thuốc thử nghiệm Candida spp phân lập từ miệng bệnh nhân ung thư 38 Bảng 3.7 Ket số nghiên