Khảo sát ảnh hưởng của điều kiện tách chiết đến hàm lượng phenolic và hoạt tính kháng oxi hóa của quả sim Phú Quốc (Rhodomyrtus tomentosa).pdf

NTTU-NCKH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO SINH VIÊN 2017 Tên đề tài: Khảo sát ảnh hưởng điều kiện tách chiết đến hàm lượng phenolic hoạt tính kháng oxi hóa sim Phú Quốc (Rhodomyrtus tomentosa) số hợp đồng: 2017.02.40 Chủ nhiệm đề tài: sv Đinh Tùng Bách MSSV: 1311519899 Khoa: Mơi Trường-Thực Phẩm-Hóa Thời gian thực hiện: 06/2017 - 12/2017 TP HCM, 20/03/2018 CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc Đơn vị chủ trì: Trường Đại học Nguyễn Tất Thành BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐÈ TÀI NCKH DÀNH CHO SINH VIÊN 2017 Tên đề tài: Khảo sát ảnh hưởng điều kiện tách chiết đến hàm lượng phenolic hoạt tính kháng oxi hóa sim Phú Quốc (Rhodomyrtus tomentosa) số hợp đồng: 2017.02.40 Chủ nhiệm đề tài: sv Đinh Tùng Bách MSSV: 1311519899 Khoa: Môi Trường-Thực Phấm-Hóa Thời gian thực hiện: 06/2017 - 12/2017 Các thành viên phổi họp cộng tác: STT 01 02 03 Họ tên TS Võ Thanh Sang sv Huỳnh Bảo Khanh sv Nguyễn Thị Phượng Chuyên ngành Sinh học dược Cơ quan công tác Viện KT-CNC NTT Khoa MT-TP-H Khoa MT-TP-H Ký tên MỤC LỤC TÓM TẮT TÓNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giói thiệu sim 1.2 Những nghiên cứu giói 1.3 Những nghiên cứu Việt Nam 1.4 Tài liệu tham khảo NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Nội dung 2.2 Phương pháp nghiên cứu KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 11 3.1 Khào sát tối OỊU hóa điều kiện tách chiết 11 3.2 Khảo sát dung môi phân đoạn 16 3.3 Kháo sát kháng oxy hóa cùa cao chiết etyl acetat 17 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 19 TÓM TẮT Rhodomyrtus tomentosa bụi thường xanh có nguồn gốc từ nước Đông Nam Á với hoa màu hồng q màu tím sậm ăn Trong nghiên cứu này, điều kiện tối ưu để thu nhận hàm lượng cao hoạt tính kháng oxi hóa tốt họp chat phenolic tổng từ sim Phú Quốc khảo sát Ket quà cho thấy hàm lượng phenolic tổng sim 50.9 mg đương lượng axit galic gam trọng lượng cao chiết khô (GAE/DWE) hoạt tính qt gốc oxi hóa DPPH đạt 60.8% nong độ 1000 pg/ml Điều kiện tách chiết tối ưu xác định điều kiện metanon 100%, thời gian giờ, nhiệt độ 40 °C, tỉ lệ dung môi/mẫu bang 2/1 (v/w) Hơn nữa, phân đoạn dung môi EtAc chứng minh với hàm lượng phenolic tổng hoạt tính kháng oxi hóa cao so với phân đoạn hexan, diclorometan, butanon, and dư lượng nước Hàm lượng phenolic tồng cùa phân đoạn EtAc 326.4 ± mg GAE/g DWE Hoạt tính kháng oxi hóa cùa phân đoạn EtAc thể qua khã quét gốc tự DPPH ABTS với giá trị IC50 368.1 134.5 pg/ml khả bào vệ DNA chống lại tác nhân oxi hóa H2O2 Từ kết trên, quâ sim Phú Quốc xem nguồn tiềm hoạt chat phenolic với hoạt tính kháng oxi hóa cao 2 TĨNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giói thiệu sim Cây Sim hay gọi Hồng sim phân bố nhiều miền nam Việt Nam, Trung Quốc, Nhật Bản, Thái Lan, Philipin, Mã Lai Việt Nam, Sim mọc vùng đất cao vùng đoi núi Đặc biệt, 700 Sim tỉnh Kontum Trái Sim chua Sac tố the qua màu cùa Sim họp chat anthocyanin bao gom hydrolysable tannins, flavones, triterpenes steroids Q Sim có hình elip với đường kính 1-1.5 cm (Hình 2) với đài hoa dài thang Quà sống có màu xanh có vị chát Nó chuyển sang màu tím tía chín trở nên mềm Quả có nhiều hạt có đường kính 1.5 mm, xếp đen giả thùy có vách ngăn mỏng [1] Sim từ lâu sữ dụng để sàn xuất nước uống, mỹ phẩm dược phẩm Nó thường sử dụng y học cổ truyền đế chữa trị tiêu chảy, kiết lỵ, áp xe, chày máu Ngồi cịn sử dụng đe làm trắng da, chống lão hóa, làm đẹp da tăng cường hệ thống miền dịch Nhiều họp chất tìm thấy Sim chẳng hạn acylphloroglucinol, flavonoids, tannins, triterpenes Hình Thân, lá, Sim Rhodomyrtus tomentosa 1.2 Những nghiên cứu giới Hợp chất tinh chiết từ Sim sở hữu hoạt tính kháng oxi hóa kháng khuẩn mạnh Theo Dachriyanus cộng (2002), dịch chiết methanol từ Sim cho thấy hoạt tính kháng khuẩn đáng kể chống lại Escherichia coli Staphylococcus aureus Rhodomyrtone họp chất tinh chế từ cao chiết Sim thông qua phương pháp sac ký [2] Tương tự, Saising cộng (2008) chứng minh Rhodomyrtone có tác dụng hiệu việc ức chế chống lại s aureus ATCC 25923 với giá trị MIC 0.5 ụg/ml, gần với vancomycin [3] Trong nghiên cứu khác, rhodomyrtone chứng minh có hoạt tính kháng khuẩn mạnh chổng lại vi khuân gram dương Bacillus cereus, B subtilis, Enterococcus faecalis, methicillinresistant s aureus (MRSA), s epidermidis, s gordonii, s mutans, s pneumoniae, s pyogenes, and s salivariu [4] Thêm nữa, hoạt tính kháng khuẩn tụ cầu cùa rhodomyrtone khả ức che hình thành màng tụ cầu chứng minh bời Saising cộng [5] Đặc biệt, rhodomyrtone làm tăng biểu cùa hệ thống miền dịch chống lại nhiễm trùng s aureus [6] Bên cạnh hoạt tính kháng khuẩn, nhiều báo cũng cho thấy hoạt tính kháng oxi hóa cao cùa Sim hợp chất tách từ Sim Cui cộng (2013) tinh anthocyanins từ Sim hoạt tính cùa chúng thể qua khả thu dọn gốc tự DPPH ABTS, tăng lực khữ, quét gốc tự [7], Lavanya cộng (2012) khảo sát quy mô in vitro in vivo hoạt tính kháng oxi hóa dịch chiết Sim Nó cho thấy khả thu dọn gốc tự do, ức chế oxi hóa lipit, làm tăng nàng lực khữ, bắt kim loại Hoạt tính kháng oxi hóa in vivo xác định thông qua làm giảm hàm lượng chất phàn ứng axit thiobarbituric, tàng enzyme kháng oxi hóa GSH, SOD, CAT GPx máu, gan, thận cùa chuột cho ăn cao chiết Sim [8] Bang cách toi ưu hóa phương pháp tách chiết, Wu đong nghiệp (2014) cho thấy hoạt tính kháng oxi hóa thơng qua qt gốc tự DPPH flavonoids từ dịch chiết cùa Sim [9] Mặt khác, thò cho ăn dịch chiết trái Sim (50 mg/kg) làm giâm đáng ke hàm lượng cholesterol tong, cholosterol xấu, oxi hóa lipit, đong thời làm tàng đáng kể hàm lượng cholesterol tốt triacylglycerides [10] Dịch chiết (70%) từ Sim sử dụng để khâo sát hoạt tính chống lở loét vểt thương chuột K.ết cho thấy rằng, dịch chiết làm giảm chi so loét, làm tăng biểu enzyme kháng oxi hóa superoxide dismutase catalase, làm giâm oxi hóa lipit, chứng minh hoạt tính chong lở lt kháng oxi hóa cùa dịch chiết [11] Thêm vào đó, piceatannol 4’-O-p-D- glucopyranoside tinh từ dịch chiết ethanol Sim khô cho thấy khà thu dọn gốc superoxide với IC50 81.7 pg/ml, kích thích sinh sản nguyên bào sợi da tế bào biếu bì người [12] 1.3 Những nghiên cứu Việt Nam Việt Nam, nghiên cứu tinh mô tả hoạt chất từ Sim đạt bước tiến đáng ke Tung cộng (2009) tinh chiết hai anthracene glycosides từ Sim hoạt tính cùa chúng nhận thấy thơng qua làm tăng hoạt tính enzyme alkaline phosphatase, tống hợp collagen, khống hóa tế bào xương MC3T3-E1[13] Nhan Minh Tri (2013) tối ưu hóa điều kiện cho việc chiểt siro từ Sim để có sàn phẩm có hàm lượng cao anthocyanin chất lượng cao [14] Le Phuc Ho (2015) khảo sát ảnh hường cùa nhiệt độ đau vào chất làm khô lên lưu giữ hoạt tính kháng oxi hóa bột sim q trình xấy khơ Khi nhiệt độ đầu vào chất sấy khơ tăng từ 150 đến 180 °C độ ẩm cùa bột sim giảm lưu giữ hoạt tính kháng oxi hóa tăng lên Trong làm tăng nhiệt độ đau vào từ 180 đen 190 °C làm hỏng lưu giữ hoạt tính kháng oxi hóa q trình sấy khơ [15] Vo and Le (2014) khảo sát ảnh hưởng công suất thời gian siêu âm lên hàm lượng tổng họp chất phenolic axit ascorbic nước ép Sim [16] Xử lý siêu âm làm cải thiện đáng kể hàm lượng chất chống oxi hóa hoạt tính kháng oxi hóa cùa dịch chiết Thời gian công suất tối ưu hóa 25 w/g 6.5 với nong độ hợp chat phenolic axit ascorbic đạt tương ứng 6,067 mg (GAE)/1 516 mg/1 Trong đó, Hoang Thi Yen cộng (2015) chứng minh điều kiện tối ưu cho việc tách chiết họp chat phenolic có hoạt tính kháng oxi hóa cao từ Sim [17], Trong điều kiện 65% ethanol, 45 °C 30 phút, hàm lượng phenolic tổng 76.42 mg GAE/g khối lượng khô Gần đây, nhiều họp chat phenolic từ quà Sim mô tả bao gom stilbenes, ellagitannins, anthocyanins, flavonols, axit gallic [18] Piceatannol, chất tiềm có lợi cho sức khỏe, tìm thay với hàm lượng 2.3 mg/g trọng lượng khô, cao gấp 1000 - 2000 lần so với rượu Lần đầu tiên, Lai cộng (2015) chứng minh thành phan hóa học cách chi tiết cùa Sim bao gom thành phần dinh dưỡng, hàm lượng phenolic, khả kháng oxi hóa [19], Họ cho thấy rang 150 g trái sim chứa hàm lượng chất xơ cao (69.94-87.43%, Recommended Daily Intake), a-tocopherol (38.90-51.87% RDI), manganese (>100% RDI), đồng (44.44% RDI) thấp protein (2.63% RDI), lipit (1.59-3.5% RDI), đường (5.65% RDI) Đáng ý, hàm lượng họp chất phenolic tổng cao (49.21 mg GAE/g trọng lượng khơ), mà góp phần làm tăng hoạt tính kháng oxi hóa Sim Ngày nay, việc sữ dụng trái Sim ngày tàng Việt Nam Ngoài viêc sữ dụng y học dân gian, trái Sim dùng để làm sản phẩm nước uống lên men gọi Rượu Sim đâo Phú Quốc thuộc miền nam Việt Nam Trồng Sim đế thu hoạch trái làm rượu phố biến Phú Quốc mờ rộng nhiều tinh miền nam miền trung Việt Nam Mặc dù trái Sim đánh giá thành phần hóa học cứa chúng, liệu cơng bố hoạt tính sinh học chúng Việt Nam, đặc biệt chưa có liệu báo cáo ve hoạt tính kháng dị ứng chống xơ vữa động mạch, the giới Vì vậy, mục đích cùa nghiên cứu đe đánh giá thêm đặc tính dược tính cùa hợp chat phenolic từ quà Sim, đặc biệt hoạt tính kháng dị ứng chồng xơ vữa động mạch 1.4 Tài liệu tham khảo [1] Lai TN, André c, Rogez H, Mignolet E, Nguyen TB, Larondelle Y Nutritional composition and antioxidant properties of the sim fruit (Rhodomyrtus tomentosd) Food Chern 2015,168,410-416 [2] Dachriyanus, Saini, Sargent MV, Skelton BW, Soediro I, Sutisna M, White Allan, Yulinah E Rhodomyrtone, an antibiotic from Rhodotnyrtus tomentosa Aust J Chern 2002, 55, 229-232 [3] Saising J, Hiranrat A, Mahabusarakam w, Ongsakul M, Voravuthikunchai SP Rhodomyrtone from Rhodotnyrtus tomentosa (Alton) Hassk as a natural antibiotic for staphylococcal cutaneous infections Journal of Health Science, 2008, 54, 589-595 [4] Limsuwan s, Trip EN, Kouwen TRHM et al Rhodomyrtone: a new candidate as natural antibacterial drug from Rhodomyrtus tomentosa Phytomedicine, 2009, 16, 645-651 [5] Saising J, Ongsakul M, Voravuthikunchai SP Rhodomyrtus tomentosa (Alton) Hassk ethanol extract and rhodomyrtone: a potential strategy for the treatment of biofilm-forming staphylococci Journal of Medical Microbiology, 2011, 60, 1793-1800 [6] Srisuwan s, Tongtawe p, Srimanote p, Voravuthikunchai SP Rhodomyrtone modulates innate immune responses of THP-1 monocytes to assist in clearing methicillin-resistant Staphylococcus aureus PLoS ONE, 2014, 9, el 10321 [7] Cui c, Zhang s, You L, Ren J, Luo w, Chen w, Zhao M Antioxidant capacity of anthocyanins from Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) and identification of the major anthocyanins Food Chern 2013, 139, 1-8 [8] Lavanya G, Voravuthikunchai SP, Towatana NH Acetone Extract from Rhodomyrtus tomentosa: A Potent Natural Antioxidant Evid Based Complement Altemat Med 2012, 2012, 535479 [9] Wu p, Deng Q, Ma G, Li N, Yin Y, Zhu B, Chen M, Huang R Spray-drying of Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) Hassk flavonoids extract: optimization, physicochemical, morphological, and antioxidant properties International Journal of Food Science 2014, 2014, 420908 [10] Maskam MF, Mohamad J, Abdulla MA, Afzan A, Wasiman I Antioxidant activity of Rhodomyrtus tomentosa (Kemunting) fruits and its effect on lipid profile in induced-cholesterol New Zealand White Rabbits Sains Malaysiana 2014,43, 1673-1684 [11] Geetha KM, Sridhar c, Murugan V Antioxidant and healing effect of aqueous alcoholic extract of Rhodomyrtas tomentosa (Ait.) Hassk on chronic gastric ulcers in rats Journal of Pharmacy Research 2010, 3, 2860-2862 [12] Nojima J, Murakami T, Kiso A Piceatannol 4’-O-p-D-glucopyranoside for antioxidants, antiinflammation agents, skin-lightening agents, antiaging agents, tyrosinase inhibitors, and skin cosmetics Jpn Kokai Tokkyo Koho, JP2007223919 A 20070906 [13] Tung NH, Ding Y, Choi EM, Van Kiem p, Van Minh c, Kim YH New anthracene glycosides from Rhodomyrtus tomentosa stimulate osteoblastic differentiation of MC3T3-E1 cells Arch Pharm Res 2009, 32, 515-520 [14] Nhân Minh Trí, Nguyền Minh Thủy, Phạm Thị Kim Quyên Toi ưu hóa yeu tố ảnh hưởng đến trình sản xuất sirơ sim (Rhodomyrtus tomentosa) để có hàm lượng anthocyanin cao Tạp chí Khoa học Phát triển 2014, 12, 98-107 [15] Le Phuc Ho, Anh Huy Pham andVan Viet Man Le Effects of core/wall ratio and inlet temperature on the retention of antioxidant compounds during the spray drying of Sim (Rhodomyrtus tomentosa) juice Journal of Food Processing and Preservation 2015, 39, 2088- 2095 [16] Vo HD, Le VVM Optimization of ultrasonic treatment of rose myrtle mash in the extraction of juice with high antioxidant level International Food Research Journal 2014, 21, 2331-2335 [17] Hoang Thi Yen, Trinh Thi Thuy Linh, Mai Chi Thanh, Nguyen Thi Thu Huyen, Lai Thi Ngoc Ha, Bui Van Ngoc Optimization of extraction of phenolic compounds that have high antioxidant activity from rhodomyrtus tomentosa (ait.) Hassk (sim) in chi linh, Hai Duong Tap Chi Sinh Hoc 2015,37, 2015 [18] Lai TN, Herent MF, Quetin-Leclercq J, Nguyen TB, Rogez H, Larondelle Y, André CM Piceatannol, a potent bioactive stilbene, as major phenolic component in Rhodomyrtus tomentosa Food Chern 2013, 138, 1421-1430 [19] Lai TN, André c, Rogez H, Mignolet E, Nguyen TB, Larondelle Y Nutritional composition and antioxidant properties of the sim fruit (Rhodomyrtus tomentosa) Food Chern 2015, 168,410-416 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 2.1 Nội dung Nội dung TT Nội dung 1: Thu nhận xữ lý nguyên liệu 1.1 Chuân bị nguyên liệu: thu thập quả, rữa, sấy khô, xay nhuyễn đê thu hổn hợp nguyên liệu đong 1.2 Xác định độ tro độ ấm cùa mầu Nội dung 2: Tách chiểt cao chiểt sàng lọc hoạt tính kháng oxi hóa cùa cao chiểt 2.1 Tiên hành thu nhận cao chiêt khác ứng với loại dung môi khác 2.2 Xác định hàm lượng phenolic tông cùa cao chiêt 2.3 Sàng lọc hoạt tính kháng oxi hóa cao chiểt 3.1 Nội dung 3: Tồi ưu hóa điểu kiện tách chiểt đồi với dung môi tồt Khảo sát điểu kiện nhiệt độ tách chiểt, nồng độ dung môi tách chiết, tỳ lệ mẫu/dung môi, thời gian tách chiết 3.2 Xác định hàm lượng phenolic tông cùa cao chiểt ứng với điểu kiện tồi ưu 3.3 Khảo sát hoạt tính kháng oxi hóa cùa cao chiểt ứng với điểu kiện tồi ưu 4.1 4.2 Nội dung 4: Nuôi cấy tê bào kháo sát độc tính sinh học cùa mẩu Tê bào ni cầy điêu kiện thích hợp đê đạt đên điêu kiện sinh trưởng mật độ thích họp cho thí nghiệm Đánh giá độc tính cùa mẩu thừ đôi với sinh trưởng cũa tê bào Nội dung 5: Khảo sát hoạt tính kháng oxi hóa mẫu tối ưu 5.1 Xác định khả bắt gốc tự DPPH 5.2 Kháo sát lực khử mầu 5.3 Khảo sát hoạt tính bảo vệ chơng lại q trình oxi hóa DNA Nội dung 6: Xữ lý sô liệu viêt báo cáo 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp thu nhận cao chiết Nguyên liệu (quà sim) thu nhận, rùa sạch, phơi khô, xay mịn thành bột Bột Sim ngâm dung môi khác nhau, tỷ lệ khác nhau, nong độ dung môi khác nhau, nhiệt độ thời gian khác để thu nhận cao tống khác Dịch chiết sau thu nhận lọc cô quay cho đen thu cao chiết dạng cô đặc giữ tủ lạnh đen dùng 2.2.2 Phương pháp xác định hàm lượng phenolic tổng Xác định hàm lượng phenolic tổng thông qua sử dụng thuốc thử Folin-Ciocalteu Cao chiết pha loãng (0.5 ml, 1:10 v/v) họp chat phenolic chuẩn trộn với thuốc thừ Folin-Ciocalteu (5 ml, 1:10 pha với nước cất) dung dịch Na2CƠ3 (4 ml, IM) Hỗn họp gia nhiệt 45 °C 15 phút đo độ hấp thụ bước sóng 760 nm Đường chuẩn xây dựng dựa vào dung dịch acid galic với nồng độ khác Phenolic tổng biểu thị tương đương với hàm lượng acid galic (mg/g trọng lượng khô) 2.2.3 Phương pháp xác định bat goc tự DPPH Trộn chất thử nghiệm (2 mL, nong độ từ 100-1000 pg/mL, pha nước cất ) với DPPH (2 mL, 100 pM, pha methanol), vortex hỗn họp 10 giây, ủ hỗn họp tối 30 phút Mầu control chuẩn bị tương tự thay mẫu nước cất Đo độ hấp thu bước sóng 490 nm với mẫu blank nước cat Vitamin c sữ dụng làm mầu đối chứng dương Khả bắt gốc tự tính theo cơng thức theo sau: Khả bắt gốc tự DPPH (%) = (1 - Amẫu/ACOntroi)*100 Trong đó: Amâu độ hấp thu cũa mầu có chất thư nghiệm, Acontroi độ hấp thu mà mầu có chất thừ thay bang nước cất 2.2.4 Phương pháp xác định báo vệ chống lại trình oxi hóa DNA Hồn họp phán ứng với DNA (40 pL) trộn theo thứ tự bao gom mẫu có chất thừ nghiệm nồng độ khác (15 pL; 10-100 pg/mL), FeSO4 (10 pL, 200 pM), H2O2 (lOpL, mM) DNA (5 pL) Sau hồn họp ũ nhiệt độ phòng 10 phút Phản ứng kết thúc thêm EDTA (lOpL, 10 mM) Hồn họp phản ứng có chứa khoảng 20 pg DNA (20 pL) chạy điện di gel agarose 1% (100 V, 40 phút), gel nhuộm ethidium bromide (1 mg/mL) phát đèn uv Mầu control thực tương tự thay mẫu có chất thứ nghiệm bang nước cất 2.2.5 Phương pháp nuôi cấy tế bào Te bào ni mơi trường có độ am cao với 5% CO2 37 °C, sừ dụng môi trường nuôi cay DMEM có bổ sung 5% huyết bị bất hoạt nhiệt độ, mM Lglutamine, 10 mM HEPES, 100 u/ml penicillin G, 100 mg/ml streptomycin 5.2.6 Phương pháp Kiểm tra độc tố tế bào Mức độ tế bào sống kiểm chứng thừ nghiệm MTT [3-(4,5-dimethyl-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium bromide], Te bào tăng sinh đĩa 96 giếng với mật độ X 10 ' tế bào/ml Te bào sau thay mơi trường khơng chứa huyết bị xử lý với cao chiet/họp chất Sau 24 ũ, te bào rữa xữ lý với dung dịch MTT (1 mg/ml, nong độ cuối cùng) Cuối cùng, hút bỏ dịch thêm 100 pl DMSO để hòa tan muối formazan Hàm lượng muối formazan chứng minh thông qua đo độ hấp thụ 540 nm Hàm lượng te bào sống định lượng phần trăm với mầu chứng trắng (blank) KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát tối OỊU hóa điều kiện tách chiết a Khảo sát dung môi Ngâm sim xay nhuyễn Methanol, Ethanol Nước với tỉ lệ ban đau 1:4, thời gian ngâm ngày Sau ngày lọc chân không đem cô quây thu hoi cao sim Biểu đồ Biểu đồ thể nồng độ phenolic tổng theo dung môi 10 □ Nước ■ ethanol methanol Nông độ cao chiết (t-ig/ml) Biểu đồ Biểu đồ thể % bắt gốc tự DPPH theo dung môi Từ nồng độ phenolic tổng phần trăm bắt gốc tự DPPH cúa cao sim theo dung môi, cho thấy dung môi Methanol cho kết cao b Khảo sát theo tỉ lệ ngâm mẫu dung môi Methanol Biếu đồ Nồng độ phenolic tổng cao sim theo tỉ lệ Methanol 11 Biểu đồ Biểu đồ thể bắt gốc tự DPPH theo tỉ lệ nồng độ cao Methanol Tù nong độ phenolic tong phan trăm bắt gốc tự DPPH theo tỉ lệ gữa cao sim dung môi Methanol, cho thấy rang tỉ lệ 1:2 cho ket cao c Khảo sát theo nong độ cùa Methanol Biểu đồ Biểu đồ thể nồng độ phenolic tổng cùa cao sim theo nồng độ Methanol 12 Biểu đồ Biểu đồ thể bắt gốc tự DPPH cùa cao sim theo nồng độ Methanol d Khảo sát theo thời gian ngâm 41.500 Ih 2h 3h 6h 12h 24h Biểu đồ Biểu đồ thể nồng độ phenolic tổng theo thời gian ngâm 13 Biểu đồ Biểu đồ thể phần trăm bắt gốc tự DPPH cao chiết e Khào sát theo nhiệt độ ngâm 60.00 50.00 40.00 M - S at e 30.00 20.00 10.00 0.00 I III □hòng 50 c 40 c 60 70 đƠC Biểu đồ Biểu đồ thể nồng độ phenolic tổng cao chiết 14 70 Biểu đồ 10 Biểu đồ thể phần trăm bắt gốc tự DPPH cao chiết Kết luận, từ kết quà khảo sát ve dung môi, ti lệ dung môi với mẫu, nồng độ dung môi, thời gian ngâm nhiệt độ ngâm trên, kết luận điều kiện tối ưu hóa cho việc tách chiết phenolic cao, với hoạt tính kháng oxy hóa cao sau: □ Dung môi: Methanol □ Ti lệ mẫu dung môi: 1:2 □ Nồng độ dung môi: 100% Methanol □ Thời gian ngâm: □ Nhiệt độ ngâm: 40 °C 3.2 Khảo sát dung môi phân đoạn Cao chiết 100% Methanol, ti lệ 1:2, ngâm 40 °C mang phân đoạn Hexan, Diclometan, Etyl acetat, Butanol phần nước lại 15 Biểu đồ 11 Biểu đồ thể nồng độ phenolic tổng theo dung môi phân đoạn Biểu đồ 12 Biểu đồ thể phần trăm bắt gốc tự DPPH cùa cao chiết phân đoạn theo dung môi Dựa vào nồng đô Phenolic tổng phần trăm bất gốc tự DPPH cao chiết phân đoạn theo dung môi, cho thấy rang chiết phân đoạn dung môi Etyl acetat cho kết quà cao 3.3 Khảo sát kháng oxy hóa cao chiết etyl acetat a Khảo sát phần trăm bat gốc tự DPPH 16 Biểu đồ 13 So sánh hoạt tính bắt gốc tự DPPH cùa cao chiểt Etyl acetat với Vitamin c Cao chiết Etyl acetat có khâ bắt gốc tự DPPH thấp so với Vitamin c cao tương đương với số thảo dược có giá trị khác trình bày bảng sau: Cao chiết từ IC50 (Mg/ml) Hà thù Thân Nam sâm nị Re Nam sâm bò Lá Nam sâm bò Nam Linh chi Cây Chùm ngây 349.35 615.8 883.9 538.3 1326 537 b Khảo sát phần trăm bắt gốc tự ABTS Biểu đồ 14 So sánh hoạt tính bắt gốc tự ABTS cao chiết Etyl acetat với Vitamin c Cao chiết Etyl acetat có khả bắt gốc tự ABTS thấp so với Vitamin c cao tương đương với mơt sổ thảo dược có giá trị khác trình bày bàng sau: 17 Dưọc liệu ICso (ụg/ml) Cây chùm ngây Rau răm Chi Lan kim tuyến Đông trùng hạ thảo 163 140 380 688.8 c Khảo sát khả kháng oxy hóa DNA cùa cao chiết Etyl acetat Cao chiết Etỵlacetax(pg 1111) H-,0, - - + — 10 + 100 + 1000 + Biểu đồ 15 Khả kháng oxy hóa DNA cùa cao chiết Etyl acetat Ket cho thấy nhóm thử nghiệm có H2O2 DNA toàn b DNA bị phá hủy tác nhân oxy hóa H2O2 Đối với mẫu trang, nhóm chi có DNA mà khơng có mặt H2O2 nên DNA vần cịn ngun vẹn khơng bị ành hưởng Trong nhóm thừ nghiệm vừa có DNA, cao chiết Etyl acetat H2O2 ta nhận thấy khả nâng bảo vệ DNA cao chiết sim chổng lại oxy hóa làm hư tồn DNA tăng dần theo tăng dần cùa nồng độ cao chiết Đáng ý, nong đ 1000pg/ml hiệu quà bảo vệ DNA cao chiết cao, gan tương đương với mầu trang Điều cho thấy hiệu quà cúa hoạt tính kháng oxy hóa chống lại hư tổn DNA tác nhân oxy hóa gây nên cùa cao chiết sim Etyl acetat tốt KÉT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận: Qua khảo sát dung môi, nồng đ , ti lệ, thời gian, nhiệt đ tách chiết chiết ph n đoạn thấy điều kiện tối ưu để tách chiết cao chiết có hàm lượng phenolic cao hoạt tính kháng oxy hóa cao là: - Dung mơi: Methanol 18 ... hàm lượng cao hoạt tính kháng oxi hóa tốt họp chat phenolic tổng từ sim Phú Quốc khảo sát Ket quà cho thấy hàm lượng phenolic tổng sim 50.9 mg đương lượng axit galic gam trọng lượng cao chiết. .. minh điều kiện tối ưu cho việc tách chiết họp chat phenolic có hoạt tính kháng oxi hóa cao từ Sim [17], Trong điều kiện 65% ethanol, 45 °C 30 phút, hàm lượng phenolic tổng 76.42 mg GAE/g khối lượng. .. (2012) khảo sát quy mô in vitro in vivo hoạt tính kháng oxi hóa dịch chiết Sim Nó cho thấy khả thu dọn gốc tự do, ức chế oxi hóa lipit, làm tăng nàng lực khữ, bắt kim loại Hoạt tính kháng oxi hóa