BÁO cáo THU HÀNH SINH học đại CƯƠNG

thực hành sinh

KHOA KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP



BÀI BÁO CÁO THỰC HÀNH

GVHD: BÙI VĂN MY TIN

NHÓM THỰC HIỆN MSSV

NGUYỄN THỊ HUỲNH NHƯ 1211032083

NGUYỄN THỊ HUỲNH NHƯ 1211032084

NGUYỄN THỊ TỐ NHƯ 1211032085

Công Nghệ Thực Phẩm A

Tháng 11/2012

Bài 1: Cách sử dụng kính hiển vi quang học

III/ Kính hiển vi quang học

1.Nguyên tắc cấu tạo

Kính hiển vi được cấu tạo bằng hai hệ thống thấu kính hội tụ, mỗi hệ thống hoạt độngnhư một kính lúp, kính lúp quay về vật quang sát gọi là vật kính, kính lúp để đặt mắt vàoquan sát gọi là thị kính

Từ mẫu vật quang sát (ab), vật kính cho một ảnh thật ngược chiều (a’b’) xuất hiện phíatrong mặt phẳng (f) của thị kính Thị kính hoạt động như một kính lúp và qua thị kính sẽquan sát được ảnh ảo (a’’b’’) được phóng đại từ ảnh thật (a’b’)

Kính hiển vi quang học là một loại kính mà ánh sáng xuyên thấu qua mẫu vật; vì thế,tiêu bản phải trong suốt và mẫu vật phải được cắt lát mỏng để các tia sáng có thể xuyênthấu

b’

Hình 1: Sơ đồ nguyên tắc cấu tạo của kính hiển vi quang học

2.Các bộ phận của kính hiển vi: kính hiển vi gồm các bộ phận chính sau:

Chân kính làm bằng kim loại nặng để giữ thăng bằngcho kính

Thân kính làm giá để gắn các bộ phận khác vào và để

có thể cầm được khi đi chuyển kính

Một ống kính chuyển động được, phía trên mang mộthoặc hai thị kính có độ phóng đại khác nhau: 4X, 10X,

Một ốc vặn nhỏ (vi cấp) dùng để vặn cho ống kính chuyển động lên xuống với khoảngcách thật ngắn và nhìn bên ngoài không thể thấy ống kính di chuyển

Bàn kính: 2 kẹp rời để giữ tiêu bản khi quan sát hoặc có bộ phận kẹp vi mẫu với 2 đinh

ốc (1 dùng để di chuyển tiêu bản qua lại, 1 dùng để di chuyển tiêu bản tới lui) Giữa bànkính có một lỗ tròn để ánh sáng đi qua

Bên dưới bàn kính là bộ phận ngưng tụ ánh sáng (tụ quang) được gắn liền với bộ phậnchắn sáng và trên đó có một cần điều chỉnh độ sáng của ánh sáng Tụ quang có thể được

mở lớn hoặc nhỏ nhờ cần chắn sáng

Dưới tụ quang là bộ phận đèn chiếu sáng hoặc một gương có 2 mặt (mặt phẳng và mặtlõm) để lấy ánh sáng phản chiếu từ đèn Thường chỉ sử dụng gương lõm

3.Cách sử dụng:

Khi sử dụng kính hiển vi phải theo đúng trình tự các bước sau:

- Lau nhẹ tay bẳng vải mềm mặt trên kính, mặt dưới vật kính, bàn kính, gương hay bộphận tụ quang

- Đặt kính hiển vi hơi lệch về phía tay trái nếu thuận tay phải và ngược lại

- Bật nguồn sang Nếu kính không có đèn, phải đặt kính hướng về nguồn sang

- Xoay nhẹ đĩa mang vật kính để vật kính nhỏ nhất ngay quang trục đúng lúc nghetiếng “cạch” nhỏ thì dừng lại

- Lấy ánh sáng :

+ Tụ quang phải ở vị trí cao nhất

+ Mở hết chắn sang để ánh sang đi vào cực đại

+ Hạ ống kính xuống từ từ bằng cách vặn ống thứ cấp cho đến lúc vừa cứng khôngvặn được nữa thì dừng lại

+ Đặt mắt trái vào thị kínhđồng thời tay xoay mặt lõm của gương hướng về đèn đểlấy ánh sang cho đến khi thị trường kính hiển vi được chiếu sang tối đa Nếu kính hiển

vi có bộ phận đèn thì chỉ cần bật đèn Sau đó tuyệt đối không được xê dịch kính hiển vinữa.

Quan sát mẫu vật với vật kính 10x:

- Đặt tiêu bản lên bàn kính, xê dịch bằng tay hoặc dùng hai đinh ốc nhỏ trên bộ phậnkẹp để di chuyển tiêu bản đưa vi mẫu về trung tâm bàn kính ngay vị trí đượcv chiếu sang,sau đó giữ tiêu bản ở vị trí này bằng 2 kẹp

- Đặt mắt trái hoặc ca3 hai mắt vào thị kính đồng thời vặn ốc thứ cấp nâng ống kínhlên từ từ và dừng lại khi thấy rõ ảnh nhất

Muốn quan sát chi tiết một phần của mẫu vật ở vật kính lớn hơn (20x, 40x….):

- Mắt vẫn đặt vào thị kính vừa quan sát mẫu vật ở vật kính 10x vừa dịch chuyển phầnmuốn quan sát vào giữa thị trường, sau đó xoay đĩa mang vật kính sang 20x hay 40 x đếnngay quang trục khi nghe tiếng “cạch” là được

- Vặn ốc vi cấp để điều chỉnh cho ảnh rõ nhất

Tuyệt đối không được dùng ốc thứ cấp khi sử dụng các vật kính có độ phóng đại lớn để tránh làm bể tiêu bản và hỏng vật kính.

Sau khi quan sát xong muốn lấy tiêu bản ra khỏi vật kính, phải:

- Xoay sang vật kính ngắn nhất hay vật kính 10x về ngay quang trục

- Mở bộ phận kẹp và lấy tiêu bản ra khỏi bàn kính

- Lau khô đầu các vật kính và đậy kính hiển vi lại

1 Những lổi khi quan sát dưới kính hiển vi vật kính 10X nhưng không được ảnh

của vật mẫu là : không đưa vi mẫu vào đúng trung tâm của bàn kính,không điềuchỉnh tụ quang hợp lý để thu ánh sáng

2 - Các bước quan sát mẫu vật dưới kính hiển vi ở vật kính 10X : đặt tiêu bản lên

bản lên bàng kính ,xê dịch bằng tay hay bằng 2 đinh ốc nhỏ trên bộ phận kẹp để dichuyển tiêu bản đưa vi mẫu vào trung tâm bán kính ngay vị trí được chiếu sáng,sau

đó giữ tiêu bản ở vị trí này bằng 2 kẹp

- Đặt mắt trái hay 2 mắt vào thị kính đồng thời vặn đinh ốc thứ cấp nâng ống

kính lên từ từ và dừng lại khi thấy ảnh rõ

3 Các bước quan sát mẫu vật dưới kính hiển ở vật kính 40X : mắt vẫn phải đặt

vào thị kính vừa quan sát mẫu vật ở vật kính 10X vừa dịch chuyển phần muốnquan sát vào giữa thị trường ,sau đó xoay đĩa mang vật kính sang 40X đến ngayquang trục khi nghe tiếng “ cắt” là được Vặn đinh ốc vi cấp để điều chỉnh cho thấy

rõ nhất

4 Khi di chuyển từ vật kính 10X sang vật kính 40X không quan sát được ảnh rỏ

có thể do : không điều chỉnh tiêu bản vào vị trí thích hợp,ánh sáng không đủ

5 Các bước để lấy tiêu bản ra khỏi kính hiển vi :

+ Xoay sang vật kính ngắn nhất hay vật kính 10X về ngay quang trục

+ Mở bộ phận kẹp và lấy tiêu bản ra khỏi bàn kính

+ Lau khô đầu các vật kính và đậy kính hiển vi lại

BÀI 2:Cấu tạo tế bào động và thực vật

I/ Mục đích yêu cầu

- Học cách làm tiêu bản tạm thời các mẫu vật để quan sát dưới kính hiển vi

- Nhận biết được sự khác biệt cơ bản giữa tế bào động vật và tế bào thực vật

- Nhận biết vài bào quan của tế bào động vật và thực vật dưới kính hiển vi như: lục lạp,sắc lạp, bột lạp, không bào co bóp,điểm mắt, nhân,…

- Quan sát và vẽ tế bào với các thành phần cấu trúc cơ bản

II/ Vật tư thiết bị và hóa chất

- Kính hiển vi

- Lame, lamelle

- Tăm xỉa răng, kim mũi giáo, kẹp, lưỡi lam

- Phẩm nhuộm Lugol (Iodo iodur)

- Củ hành tây ( Allium cepa L.)

- Trái ớt chín ( Capsicum frutesscens)

- Củ khoai tây( Solanum tuberosum)

- Rong nhớt( Spirogyra sp)

- Paramecium sp – Euglena sp – Phacus sp

- Củ cà rốt

III/ Các bước tiến hành

1/ Thực hiện tiểu bản để quan sát tế bào thực vật:

Cách thực hiện:

- Nhỏ sẵn lên lame ( kính mang vật) một giọt Lugol

- Gở lớp biểu bì mặt trong của vảy hành tây bằng cách:

+ Dùng lưỡi lam rạch nhẻ lên lớp biểu bì một hình vuông một cạnh 0,5 cm

+ Bóp nhẹ thep mặt cong của vảy hành để lớp biểu bì ở mặt trong bong ra khỏi lớpnhu mô bên dưới

+ Dùng kẹp gở nhẹ một góc của miếng mẫu để tách lớp biểu bì ra

- Đặt mặt trong của lớp biểu bì tiếp xúc với phẩm nhuộm trên lame

- Đậy lamelle ( kính đậy vật) lại bằng cách:

+ Đặt một cạnh của lamelle tiếp xúc với rìa của giọt phẩm nhuộm và nghiên mộtgóc 450

+ Dùng kim mũi giáo đở cạnh đối diện và hạ từ từ lamelle xuồng ( để tránh có bọtkhí) cho đến khi lamelle nằm sát trên lame

- Nhỏ sẵn trên giữa lame một giọt lugol

- Dung đầu dẹp của tăm xỉa răng gợt nhẹ vào lớp biểu mô phía trong má miệng để lấy

tế bào biểu mô

- Dầm nhẹ đầu tăm vào giọt phẩm nhuộm trên lame và lậy lamelle lại.

Quan sát:

Dưới vât kính 10X, tế bào có dạng gần tròn hay hình đa giác không đều hay có khibiến dạng trong quá trình thực hiện tiêu bản do màng tế bào tương đối mỏng Nhân thườngnằm giữa tế bào và có màu vàng đậm hơn tế bào chất

Dưới vật kính 40X, nhân tế bào đồng đều và không gấp nếp để quan sát

Bài phúc trình:

1 Vẽ hình và chú thích đầy đủ chi tiết một tế bào biểu bì vảy hành tây và một tế bào mô

má miệng :

Hình tế bào biểu bì vẩy hành tây

Hình tế bào biểu mô má miệng

Chú thích:

Cell wall: vách tế bào

Cytoplasm: tế bào chất

Nucleus: nhân

Cell membrane: màng tế bào

2 Những đặc điểm cơ bản về sự khác biệt cấu tạo giữa tế bào động vật và tế bào thực vật:

rất nhỏ và rất ít khi có không bào

Vị trí của

nhân

- Ở gần sát vách tế bào - Ở giữa tế bào

3 Giải thích sự khác biệt về hình dạng giữa tế bào động vật và tế bào thực vật:

- Tế bào thực vật có thành tế bào nên quyết định hình dạng của tế bào Còn tế bào động vật thìkhông có thành tế bào nên không có hình dạng xác định

- Tế bào thực vật có không bào lớn chứa nhiều nước, do sức ép của nước nên nhân nằm sátvách tế bào

Bài 3: Tính thấm chọn lọc ở màng tế bào thực vật

I/ Đặc điểm

Tế bào, cũng như các bào quan bên trong nó, đều có màng lipoprotein bao bọc, ngăncách chúng với môi trường xung quanh Màng này, nếu nguyên vẹn vó tính thấm chọn lọc,nhờ đó tế bào giữ được thành phần chất dinh dưỡng hữu cơ và khoáng cần thiết bên trong

nó, kiểm soát hiệu quả sự trao đổi chất với môi trường, duy trì nồng độ thẩm thấu riêng vàđảm bảo sự trao đổi nước qua màng nhờ hiện tượng thẩm thấu

Mọi yếu tố ảnh hưởng đến tính toàn vẹn của cấu trúc màng đều sẽ ảnh hưởng đến cácchức năng trên của tế bào

II/ Thiết bị - mẫu vật:

- Kính hiển vi – Lame – Lamelle – lưỡi lam

Cắt củ dền thành 7 miếng đều nhau có kích thước 4cm x 1cm x 0.5cm

Rửa dưới dòng nước trong 5 – 10 phút để lôi đi tất cả sắc tố từ những tế bào bị vỡ, sau

đó ngâm chúng trong nước sạch

Ghi số các ống nghiệm từ 1→7

2 đĩa petri rạch 7 vùng đựng mẫu sau khi xử lí

Cho vào ống nghiệm 1đến ống 6: 15ml nước cất

Cho vào ống nghiệm 7: 15ml Methanol 30%

Cho một miếng củ dền vào ống nghiệm 1 (chuẩn) 1 miếng vào ống số 7.

Những miếng còn lại được xử lí nhiệt trong 2 phút trước khi cho vào các ống nghiệmtheo thứ tự như sau:

ống 2: sẽ cho vào miếng dền đã xử lý 400C

ống 3: sẽ cho vào miếng dền đã xử lý 600C

ống 4: sẽ cho vào miếng dền đã xử lý 800C

ống 5: sẽ cho vào miếng dền đã xử lý 1000C

ống 6: sẽ cho vào miếng dền đã xử lý -100C

Tất cả ống nghiệm đặt vào giá, để yên trong 30 phút Sau đó vớt miếng dền ra bỏ, lắcđều, so sánh màu của dung dịch trong các ống nghiệm ( so sánh với ống nghiệm chuẩn).Kết quả thực hành:

 Tác dụng của nhiệt độ lên sự khuếch tán:

+ Nhiệt đô từ 400C đến 1000C: ở nhiệt độ càng cao sự khuếch tán càng tăng nên màucủa dung dịch đậm, nhiệt độ cao làm giảm tính bền của màng và protein Mặt khác sựkhuếch tán còn phụ thuộc vào nhiệt độ do nhiệt độ làm gia tăng sự khuếch tán bằngcách tăng tốc độ va chạm giữa ác phân tử

+ Ở nhiệt độ - 100C: nguyên nhân vì sao ở ống nghiệm chứa miếng dền có xử lí -100Clại cho màu đậm hơn ống 400C có thể la do tác dụng của nhiệt độ lạnh làm thay đổitính lỏng của màng tế bào, gây cho màng tế bào mất đi chức năng sinh học.

 Tác dụng của dung môi hữu cơ: ở ống nghiệm chứa dung dịch Methanol màu sắc cũngđậm hơn ống nghiệm 400C vì tác dụng của dung môi hữu cơ ( methanol) vào sắc tố vàtính thấm của dung môi hữu cơ cao hơn so với nước ở nhiệt độ 400C Mặt khác khảnăng tan của các sắc tố trong dung môi hữu cơ cũng tốt hơn so với nước vì thế màngươi ta thương dùng nó để trích sắc tố…

Bài 4: Khảo sát hiện tượng quang hợp và sự tạo

thành tinh bột trong quang hợp

I/ Mục đích yêu cầu:

Chứng minh cây xanh hấp thụ CO2 và phóng thích O2 trong quá trình quang hợp

Khả sát các yếu tố ngoại cảnh ảnh hưởng đến diễn tiến của quá trình này

Chứng minh sản phẩm của quá trình quang hợp là tinh bột

II/ Vật tư thiết bị và hóa chất:

1 beaker đựng nước(cỡ lớn)

3 mẫu rong đuôi chồn

Dung dịch NaHCO3 0.5%,0.25%

3 ống nghiệm(như nhau)

III/ Các bước tiến hành:

1.Thí nghiệm chứng minh hiện tượng quang hợp:

Cho dung dịch NHCO3 0,5% vào gần đầy các ống nghiệm

Cắt 3 gốc nhánh rong đuôi chồn còn tốt Dùng kim gút xâm 2 – 3 lỗ nhỏ dưới mặt cắtvài ml

Cho 3 nhánh rong đuôi chồn vào 3 ống nghiệm, mặt cắt hướng lên trên cách mặt dungdịch khoảng 2cm (các nhánh đặt thật thẳng)

Đặt 3 ống nghiệm vào beaker đựng nước cỡ lớn, cách nguồn sáng 75w 10cm Sau 30phút, các bọt khí lên đều từ các lỗ xâm đó đếm số bọt khí từng ống nghiệm trong 1 phút

2 Thí nghiệm ảnh hưởng của cường độ ánh sáng vào sự quang hợp:

Chọn trong 3 nhánh rong có bọt khí thoát ra trong 1 phút nhiều nhất.

Đặt nhánh này cách nguồn sáng 20cm, 30cm, 40cm, 50cm, 60cm luôn giữ nhiệt trongBeaker không đổi

Đếm số bọt khí (trung bình của 3 lần đếm) thoát ra ở mỗi khoảng cách trong 1 phút

3 Thí nghiệm ảnh hưởng của nhiệt độ vào sự quang hợp:

Làm lại thí nghiệm trên nhưng:

Khoảng cách cố định từ nguồn sáng là 20cm

Nhiệt trong Beaker chứa nước là 200 và nhiệt độ phòng

Đếm số bọt khí N trung bình thoát ra trong 1 phút ở mỗi nhiệt độ

4.Thí nghiệm chứng minh sự tạo thành tinh bột:

Vẽ lại hình dạng của lá bông bụm kiểng, đánh dấu phần có đốm trắng:

Bước 1: Cho lá bông bụm vào Beaker nước đang đun sôi và đun tiếp khoảng 5 phút.

Bước 2: Dùng kẹp chuyển lá vào ống nghiệm chứa cồn 70 0 và đặt ống nghiệm vào Beaker nước sôi, đun tiếp cho đến khi lá mất màu xanh Rửa lá bằng nước và trãi trên đĩa Pétri.

Bước 3: Cho dung dịch Iót vào đĩa Pétri và lắc để được nhuộm màu đều sau 5 phút Rửa lại bằng nước sạch Lau khô lá bằng giấy.

IV/Bài phúc trình:

1.Ống nghiệm (nhánh rong) 1: 32 bọt khí

Ống nghiệm (nhánh rong) 2: 2 bọt khí

Ống nghiệm (nhánh rong) 3: 3 bọt khí

2.

Qua biểu đồ ta thấy khoảng cách càng xa nguồn sáng thì số bọt khí thoát ra càng ít do cường

độ quang hợp của cây rong đuôi chồn thấp

Kết luận rằng cường độ ánh sáng tác động rất lớn đến quá trình quang hợp của cây.

3.Ở nhiệt độ phòng: 15 bọt khí

Ở nhiệt độ 20 0 C: sau 15 phút không thấy bọt khí nào

5.

Sự ăn màu khác nhau của lá bụp kiểng, cụ thể ở những vùng lá màu xanh sau khi loại bỏ sắc

tố và nhỏ iod vào thì chuyển sang màu xanh tím còn những vùng có lá màu trắng thi hầu như

ko chuyển màu (màu của iod) Nguyên nhân là do những vùng lá có màu xanh mới diễn ra sự quang hợp mà có quang hợp mới tạo được tinh bột, mặt khác tinh bột lai tác dụng với dung dịch iod nên tạo ra màu xanh tím.

Bài 5: Phân tích thành phần sắc tố của lá cây

I/ Mục đích yêu cầu:

Màu xanh của lá cây là do 1 hỗn hợp các sắc tố gồm diệp lục tố a, diệp lục tố b vàcarotenoicd Các thành phần hỗn hợp này có thể được phân tích bằng phương pháp sắc kýtrên cột hoặc trên giấy

Vị trí của sắc tố (hay các thành phần của hỗn hợp nói chung) trên giấy (hay trên cột)sắc ký được biểu thị bằng trị số Rf:

II/Vật tư thiết bị và hóa chất:

Lá rau ngót Cối chày bằng sành dể giả, Becher 250ml.

Acêton, giấy thấm, tăm(giấy thấm hay giấy sắc ký 2cm)

III/ Cách bước tiến hành:

1.Ly trích sắc tố

Giả 4g lá ngót trong cối sạch và khô Thêm vào 2ml acêton và tiếp tục giả

Vắt lấy dung dịch sắc tố dựng trong đĩa petri

Đặt miếng giấy thấm đã kẻ vạch sắc tố vào becher có đựng aceton (sao cho vạch sắc tốkhông chạm vào aceton)

Đợi 30 phút Sau đó, ghi lại vị trí của từng loại sắc tố đã tách rời nhau trên tờ sắc ký(chú ý :diệp lục a có màu xanh nhạt, diệp lục b có màu xanh lục và carotenoid có màuvàng cam) Ghi vị trí của từng loại sắc tố đã tách rời nhau trên tờ sắc ký Tính chỉ số Rf

Bài phúc trình:

Trên giấy sắc ký bao gồm các thành phần sau : Diệp lục a(màu xanh nhạt), Diệp lục b(màu xanh lục), Carotenoid(carotenol va xantophyl) có màu vàng cam và dung môi aceton(không hòa tan trong nước) Tính trị số Rf:

+ Đoạn đường di chuyển của dung môi aceton la 60 mm.

+ Đoạn đường di chuyển của diệp lục a : 28mm

+ Đoạn dường di chuyển của diệp lục b: 17mm

+ Đoạn đường di chuyển của carotenoid: 18mm

Ta thấy rằng, các sắc tố trên giấy sắc ký đã tách ra và di chuyển với những đoạn khác nhau.Trong đó, đoạn đường di chuyển của diệp lục a là lớn hơn so với các sắc tố khác và diệp lục b

la di chuyển thấp nhất Bởi vì:

+Các sắc tố ddeuf có độ hòa tan khác nhau đối với dung môi aceton

+ Khi tiến hành sắc ký, do hiện tượng mao dẫn nên aceton sẽ di chuyển dần dần lên giấy sắcký