Nghiên cứu thu nhận CELLULOSE vi khuẩn làm chất mang trong kỹ thuật cố định tế bào vi sinh vật

Cellulose vi khuẩn – BC đƣợc biết đến với nhiều khả năng ứng dụng trong các lĩnh vực kỹ thuật, công nghệ vật liệu, y khoa… Bên cạnh những ứng dụng đó, trong đề tài nghiên cứu này BC sẽ đƣợc biết đến với vai trò làm chất mang trong kỹ thuật cố định vi sinh vật. Đối tượng được chúng tôi lựa chọn cố định trên chất mang BC là Saccharomyces cerevisiae 28. Trƣớc khi lên men thu nhận và tiến hành xử lý BC, chúng tôi thực hiện tối ƣu hóa pH và môi trƣờng lên men nhằm thu nhận đƣợc lƣợng BC tối ƣu. pHopt của chủng Acetobacter xylinum BC16 đƣợc chúng tôi ghi nhận tại pH = 4.4 và môi trƣờng lên men BC tối ƣu với nồng độ glucose, (NH4)2SO4 và (NH4)2HPO4 lần lƣợt là 20gl, 8gl và 2gl môi trƣờng nƣớc dừa già. BC trở thành chất mang cố định tế bào nấm men bằng 2 phƣơng pháp: bẫy – hấp phụ và nhốt chủ động. Chế phẩm BC với kích thƣớc 2cmx2cm, chế độ lắc 200 vòngphút và thời gian ủ 2 ngày của phƣơng pháp bẫy – hấp phụ đã cố định lƣợng lớn tế bào nấm men với mật độ 9,251x106 tế bàocm3;

Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA  NGHIÊN CỨU THU NHẬN CELLULOSE VI KHUẨN LÀM CHẤT MANG TRONG KỸ THUẬT CỐ ĐỊNH TẾ BÀO VI SINH VẬT Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số ngành: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2008 CƠNG TRÌNH ĐƢỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hƣớng dẫn khoa học: TS NGUYỄN THÚY HƢƠNG (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét 1: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét 2: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Luận văn thạc sĩ đƣợc bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày 10 tháng 07 năm 2008 TÓM TẮT Cellulose vi khuẩn – BC đƣợc biết đến với nhiều khả ứng dụng lĩnh vực kỹ thuật, công nghệ vật liệu, y khoa… Bên cạnh ứng dụng đó, đề tài nghiên cứu BC đƣợc biết đến với vai trò làm chất mang kỹ thuật cố định vi sinh vật Đối tƣợng đƣợc lựa chọn cố định chất mang BC Saccharomyces cerevisiae 28 Trƣớc lên men thu nhận tiến hành xử lý BC, chúng tơi thực tối ƣu hóa pH mơi trƣờng lên men nhằm thu nhận đƣợc lƣợng BC tối ƣu pHopt chủng Acetobacter xylinum BC16 đƣợc ghi nhận pH = 4.4 môi trƣờng lên men BC tối ƣu với nồng độ glucose, (NH4)2SO4 (NH4)2HPO4 lần lƣợt 20g/l, 8g/l 2g/l môi trƣờng nƣớc dừa già BC trở thành chất mang cố định tế bào nấm men phƣơng pháp: bẫy – hấp phụ nhốt chủ động Chế phẩm BC với kích thƣớc 2cmx2cm, chế độ lắc 200 vòng/phút thời gian ủ ngày phƣơng pháp bẫy – hấp phụ cố định lƣợng lớn tế bào nấm men với mật độ 9,251x106 tế bào/cm3; đồng thời chế phẩm đƣợc sử dụng khảo sát biến động trình lên men rƣợu Với phƣơng pháp nhốt chủ động, BC sau xử lý có dạng hình trịn với Ø = 11cm, bề dày 2mm cố định đƣợc 1,102x107 tế bào/cm3 Hiệu sử dụng chế phẩm Saccharomyces cerevisiae 28 cố định chất mang BC giai đoạn lên men (số lần tái sử dụng) lần mà đảm bảo hoạt tính sinh học nấm men Abstract Bacterial Cellulose (BC) is known with many applications in material technology, and medical field… Beside those applications, BC in this project will be known as a carrier in the immobilizing bacterial cell technology Saccharomyces cerevisiae 28 is the object that we chose for immobilization using the BC carrier Before fermenting, gathering and treating BC, we brought the pH concentration and fermentative environment into the optimized level where we could collect the most BC pHopt concentration of Acetobacter xylinum BC16 strain was collected at pH = 4.4, and the optimized level of fermentative environment was found in juice of old coconut with glucose concentration, (NH4)2SO4 and (NH4)2HPO4 respectively was 20g/l, 8g/l, and 2g/l BC became the carrier immobilizing yeasts by methods: trap – absorb and active confinement In trap – absorb method, BC preparation with size 2cm x 2cm, agitator at 200 cycle/min, and incubation time in days had immobilized a huge amount of yeasts with density 9,251x106 cells/cm3; also, this preparation was used for testing the fluctuation of the alcoholic fermentation In active confinement method, BC after treatment had circle shape with diameter was 11 cm, and the thickness was 2mm This BC had immobilized 1,102x107 cells/cm3 The effect of using Saccharomuces cerevisiae 28 preparation for immobilizing the BC carrier in the fermentative process could be up to times, and still keep the biology properties of the yeast MỤC LỤC Mục lục Trang Chƣơng – MỞ ĐẦU Mở đầu Chƣơng – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu cellulose vi khuẩn (BC) Acetobacter xylinum 2.1.1 Các vi sinh vật sản sinh BC 2.1.2 Sơ lƣợc vi khuẩn Acetobacter xylinum 2.1.3 Các đặc điểm cellulose vi khuẩn (bacterial cellulose – BC) 2.1.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình tạo BC 13 2.1.5 Nƣớc dừa già -Nguyên liệu dùng để nuôi A xylinum nhằm thu nhận BC 16 2.1.6 Các nghiên cứu A.xylinum 17 2.2 Kỹ thuật cố định tế bào vi sinh vật .19 2.2.1 Sơ lƣợc kỹ thuật cố định tế bào vi sinh vật 19 2.2.2 Các phƣơng pháp cố định 20 2.2.3 Ƣu điểm vi sinh vật cố định với vi sinh vật tự 23 2.2.4 Chất mang kỹ thuật cố định tế bào vi sinh vật .23 2.3 Tính chất chất mang BC 25 Chƣơng – VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP 3.1 Địa điểm thời gian thực 27 3.2 Vật liệu .27 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 30 3.3.1 Sơ đồ nghiên cứu 30 3.3.2 Khảo sát giống A xylinum 31 3.3.3 Phƣơng pháp giữ giống nhân giống 31 3.3.4 Phƣơng pháp thu nhận BC 32 3.3.5 Phƣơng pháp quy hoạch thực nghiệm 33 3.3.6 Xác định trọng lƣợng BC khô .35 3.3.7 Phƣơng pháp xử lý cellulose vi khuẩn tƣơi thu hoạch 36 3.3.8 Phƣơng pháp xác định mật độ tế bào đƣợc cố định chất mang BC .37 3.3.9 Phƣơng pháp hóa lý .37 3.3.10 Nghiên cứu phƣơng pháp điều kiện cố định S cerevisiae chất mang BC .37 3.3.11 Nghiên cứu biến động trình lên men rƣợu 40 Chƣơng – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Một số đặc điểm sinh học chủng Acetobacter xylinum BC16 khảo sát đề tài 42 4.2 Tối ƣu hóa mơi trƣờng điều kiện ni cấy để thu nhận BC 44 4.2.1 Tối ƣu hóa pH mơi trƣờng lên men 45 4.2.2 Tối ƣu hóa môi trƣờng .46 4.3 Ứng dụng BC làm vật liệu kỹ thuật cố định nấm men Saccharomyces cerevisiae 28 .50 4.3.1 Xử lý BC trƣớc cố định vi sinh vật lên chất mang 50 4.3.2 Khảo sát trình cố định chất mang BC phƣơng pháp bẫy - hấp phụ 51 4.3.3 Cố định tế bào nấm men S cerevisiae 28 lên chất mang BC phƣơng pháp nhốt chủ động 55 4.4 Khả ứng dụng nấm men cố định chất mang BC lên men rƣợu .58 Chƣơng – KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận .64 5.2 Kiến nghị .65 Tài liệu tham khảo 66 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình Trang Hình 2.1 Acetobacter xylinum Hình 2.2 A-BC đƣợc tạo từ mơi trƣờng lắc (a) S-BC đƣợc tạo từ môi trƣờng tĩnh (b) Hình 2.3 Cấu trúc cellulose (a) Cellulose vi khuẩn (x 20000) (b) cellulose thực vật (x200) Hình 2.4 Vị trí – q trình biến dƣỡng carbon tổng hợp cellulose A xylinum Hình 2.5 Con đƣờng dự đốn q trình sinh tổng hợp tiết cellulose glucose đƣợc tế bào A xylinum hấp thụ từ bên Hình 2.6 Sự tổng hợp vi sợi Acetobacter xylinum 10 Hình 2.7 Con đƣờng chuyển hóa carbon Acetobacter xylinum 12 Hình 2.8 Bacterial cellulose điều kiện nuôi cấy tĩnh 14 Hình 2.9 Bacterial cellulose điều kiện nuôi cấy lắc 14 10 Hình 2.10 Sơ đồ chất mang việc cố định tế bào 24 11 Hình 3.1 Sơ đồ tiến trình nghiên cứu 30 12 Hình 3.2 Sơ đồ thu nhận BC 32 13 Hình 3.3 Sơ đồ xử lý BC 36 14 Hình 4.1 Hình ảnh vi thể A xylinum BC16 42 15 Hình 4.2 Hình ảnh đại thể A xylinum BC16 môi trƣờng đặc 43 16.Hình 4.3 Màng BC mơi trƣờng lỏng 43 17 Hình 4.4 Màng BC trƣớc xử lý 50 18 Hình 4.5 Màng BC sau xử lý 50 19 Hình 4.6 Nấm men cố định chất mang BC 55 20 Hình 4.7 Nấm men cố định chất mang BC 55 21 Hình 4.8 BC trƣớc cố định phƣơng pháp nhốt 56 22 Hình 4.9 BC sau cố định phƣơng pháp nhốt 56 DANH MỤC BẢNG VÀ ĐỒ THỊ I DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Cấu trúc BC số loài vi khuẩn 2 Bảng 2.2 Thành phần nƣớc dừa 16 Bảng 2.3 Ƣu, nhƣợc điểm phƣơng pháp thông dụng để cố định tế bào 22 Bảng 4.1 Kết kiểm tra đặc điểm sinh hóa 44 Bảng 4.2 Trọng lƣợng BC thu đƣợc pH 45 Bảng 4.3 Các nhân tố quy họach thực nghiệm 47 Bảng 4.4 Mơ hình quy hoạch thực nghiệm điều kiện lên men tĩnh (YT) lên men lắc (YL) 48 Bảng 4.5 Kết thí nghiệm tâm 48 Bảng 4.6 Hệ số bj phƣơng trình hồi quy 49 10 Bảng 4.7 Mật độ tế bào nấm men cố định chất mang qua phƣơng pháp 30 phút đầu hấp phụ 51 11 Bảng 4.8 Ảnh hƣởng thời gian ủ lên mật độ tế bào nấm men đƣợc cố định chất mang BC 53 12 Bảng 4.9 So sánh phƣơng pháp bẫy – hấp phụ phƣơng pháp nhốt chủ động 57 13 Bảng 4.10 Một số tiêu hóa lý lên men rƣợu 59 14 Bảng 4.11 So sánh chất mang kỹ thuật cố định tế bào nấm men 62 II DANH MỤC ĐỒ THỊ Trang Đồ thị 4.1 Ảnh hƣởng pH đến trọng lƣợng BC khô môi trƣờng lên men 46 Đồ thị 4.2 Mật độ vi khuẩn cố định BC với kích thƣớc khác qua chế độ khuấy đảo khác 52 Đồ thị 4.3 Ảnh hƣởng thời gian ủ lên mật độ tế bào nấm men 54 Đồ thị 4.4 So sánh độ rƣợu dịch lên men mẫu đối chứng qua lần tái sử dụng chế phẩm 60 Đồ thị 4.5 So sánh số mật độ quang mẫu đối chứng với lần tái sử dụng chế phẩm nấm men cố định 60 28 Hestrin, S., Schramm, M (1954) Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum Laboratory of Microbiologycal chemistry, Department of Biochemistry, Hebrew University Hadassah Medical school, Jerusalem, Israel, received 20 April, 1954 29.Hirai, A., Horii, F (1999) Cellulose assemblies produced by Acetobacter xylinum ICR Annual Report, Vol.6, p 28-30 30 Holt, J.G., Krieg, N.R., Sneath, P.H.A., Staley, J.T., Williams, S.T (1994) Bergey’s Manual® of determinative bacteriology Williams & Wilkins, p 71,126 31 Iguchi M., Yamanaka S., Budhiono A (2000) Bacterial cellulose - a masterpiece of nature's arts Journal Of Materials Science 35 (2), p 261-270 32 John Wiley & Sons (2000) Bacterial cellulose production by Acetobacter xylinum in a 50-L internal-loop airlift reactor Inc Biotechnol Bioeng 68, p 345-352 33 Klein J., Vorlop K.D., (1988) Immobilization of whole cells Biotechnology focus I, Hansre Publishing, New York, 1988 34 Kojima, Y., Tonouchi, N., Tsuchida, T., Yoshinaga, F (1998) The characterization of Acetic acid bacteria efficiently producing bacterial cellulose from sucrose: the proposal of Acetobacter xylinum subsp Nonacetoxidans subsp Nov Biosci Biotechnol Biochem., Vol 62, No.1, p 185-187 35 Kourkoutas, Y., Bekatorou, A., Banat, I M., Marchant, R., Koutinas, A.A (2004) Immobilization technologies and support materials suitable in alcohol beverages production A rewiew, Food Microbiology, Vol.21, No.4, p 377-397 36 Kunihiko Watanabe, Mari Tabuchi, Yasushi Morinaga and Fumihiro Yoshinaga (1998) Structural features and properties of bacterial cellulose produced in agitated culture Cellulose (1998) Vol 5, p 187-200 37 Masahiro Samejima, Jungi Sugiyama, Kijohiko Igarashi, Karl-Eril L Eriksson (1998), Enjymatic hydrolysis of bacterial cellulose Carbohydrate Research 305 38 Priscilla C Sanchez, Toshiomi Yoshida, Marian A Pulido, Mikio Nakajima (1999) Fermentation conditions for high-cellulose production of Philippine strains of Acetobacter xylinum International Conference on Asian Network on Microbial Research Chiang Mai, Thailan, p 459-461 39 Prof Dr Eng Stanislaw Bielecki, Dr Eng Alina Krystynowicz, Prof Dr Mariana Turkiewicz, Dr Eng Halina Kalinowska, ―Bacterial cellulose‖ Institute of Technical Biochemistry, Technical University of Lódz, Stefanowskiego 4/10, 90-424 Lóbz, p 37 – 46 40 Sangok Bae, Yasushi Sugano and Makoto Shoda, (2004) Improvement of Bacterial Cellulose Production by Addition of Agar in a Jar Fermentor Journal of Bioscience and Bioengineering, Vol 97, No 1, p 33-38 41 S Hestrin and M Schramm (1954) Synthesis of cellulose by Acetobacter xylinum Laboratory of Microbiologycal chemistry, Department of Biochemistry, Hebrew University Hadassah Medical school, Jerusalem, Israel, received 20 April, 1954 42 Schramm, M., and Hestrin, S., (1954) Factors Affecting production of Cellulose at the air/liquid interface of a culture of Acetobacter xylinum Joural of General Microbiology, 11, p 123-129 43 Son, H.J., Heo, M.S., Kim, Y.G., Lee, S.J (2001) Optimization of fermentation conditions for the production of bacterial cellulose by a newly isolated Acetobacter sp A9 in shaking cultures Biotechnol Appl Biochem 33, p 1-5 44 Tahara N., Tabuchi M., Watanabe K., Morinaga Y., Yoshinaga F (1997) Degree of polymerization of cellulose from Acetobacter xylinum BPR 2001 dereased by cellulose produced by the strain Bioscience Biochnology & Biochemistry, Vol 61, No.11, p 1862-1865, 11/1997 45 Takehiko Ishida, Yasushi Sugano, Tomonori Nakai and Makoto Shoda (2002) Effects of Acetan on Production of Bacterial Cellulose by Acetobacter xylinum Biosci Biotechnol Biochem., Vol 66, No.8, p 16771681 46 Toda K., Asakura T., Entani E., Kawamura Y (1997) Cellulose production by acetic acid resistant Acetobacter xylinum Journal of Fermentation & Bioengineering 85 (3), p 228-231 47 Watanebe K, Yamanaka S (1995) Effects of oxygen tension in the gaseous phase on production and physical properties of bacterial cellulose formed under statis culture conditions Biosci Biotechnol Biochem 59, p 65-68 48 Wojciech Czaja, Alina Krystynowicz, Stanislaw Bielecki and R Malcolm Brown, Jr (2006) Microbial cellulose—the natural power to heal wounds ScienceDirect-Biomaterial, Vol 27, Issue 2, p 145-151, January 2006 49 Y Chao, Y Sugano, M Shoda (2001), ―Bacterial cellulose production under oxygen-enriched air at different fructose concentrations in a 50-liter, internal-loop airlift reactor‖, Appl Microbial Biotechnol, Vol 55, p 673-679 50 Yoshinaga F., Tonuochi N., Watanabe K (1997), ―Research progress in production of bacterial cellulose by areation and agitation culture and its application as a new industrial material‖, Biosci Biotechnol Biochem, 61, 219-224 TÀI LIỆU TỪ INTERNET 51 http://www.botany.utexas.edu/lab/research_appl/pospaper.htm 52 http://www.wws.priceton.edu/ota/dist1/1993/9313/931305.pdf 53 http://www.res.titech.ac.jp/~junkan/english/cellulose/index.html 54 http://www.rcub.bg.ac.yu/~todorom/tutorials/rad15.html 55.http://sinh.hnue.edu.vn/mod.php?mod=publisher&op=viewarticle&artid=405 56 http://www.weightlossforgood.co.uk/nutrition/coconut_water.htm 57 http://www.wiley-vch.de/books/biopoly/pdf_v06/bpol6008_215_224.pdf 58 http://www.rcub.bg.ac.yu/todorom/tutorial/rad15.html 59 http://www.cogprints.org/3691/01/applbiotechnology PHỤ LỤC Hình BC đƣợc lên men sau ngày Hình Thu hoạch BC sau ngày lên men Hình BC kích thuớc 2cmx2cm trƣớc cố định phƣơng pháp bẫy – hấp phụ Hình Chế phẩm nấm men cố định chất mang BC Hình BC lên men sau ngày đƣợc sử dụng cho phƣơng pháp nhốt chủ động Hình BC sử dụng phƣơng pháp nhốt chủ động có độ dày 2mm Hình 7.BC xử lý đƣợc sử dụng phƣơng pháp nhốt chủ động đƣờng kính miếng BC: Ø = 11cm bề dày 2mm Hình Hệ thống máy hút chân không đƣợc sử dụng phƣơng pháp nhốt chủ động Môi trƣờng khảo sát giống A xylinum BC16 MT6: Môi trường Hoyer (NH4)2SO4 : 1g K2HPO4 : 0,1g KH2PO4 : 0,9g MgSO4.7H2O : 0,25g FeCl3.6H2O : 0,02g Ethanol : 30ml Nƣớc cất : 1lít MT7: Kiểm tra khả oxy hóa ethanol Cao nấm men : 30g Agar : 20g Nƣớc cất : 1lít Trƣớc cấy vi khuẩn bổ sung vào 1ml ethanol 15% MT8: Kiểm tra chuyển hóa glucose thành acid Cao nấm men : 30g Glucose : 10g CaCO3 : 30g Agar : 20g Nƣớc cất : 1lít MT9: Kiểm tra chuyển hóa glycerol thành dihydroxyaxeton Cao nấm men : 30g Glycerol : 30g Agar : 20g Nƣớc cất : 1lít Tối ƣu hóa mơi trƣờng 2.1 Kết tối ƣu hóa mơi trƣờng lần Bảng 1: Các nhân tố quy hoạch thực nghiệm Nhân tố Biến có thứ Biến khơng thứ nguyên (Z) nguyên (X) Mức ΔZ Mức ΔX Glucose 20 2 (NH4)2SO4 0,8 (NH4)2HPO4 0,2 Phƣơng trình hồi quy tuyến tính có dạng: ŷ = bo + b1x1 + b2x2 + b3x3 Bảng Mô hình quy hoạch thực nghiệm điều kiện lên men tĩnh (YT) lên men lắc (YL) Z1 Z2 Z3 X0 X1 X2 X3 18 7,2 1,8 + 22 7,2 1,8 18 YT YL - - - 4,150 4,158 + + - - 3,888 5,210 8,8 1,8 + - + - 4,382 4,420 22 8,8 1,8 + + + - 4,298 5,876 18 7,2 2,2 + - - + 4,730 5,138 22 7,2 2,2 + + - + 4,690 5,542 18 8,8 2,2 + - + + 4,138 6,334 22 8,8 2,2 + + + + 4,298 6,014 Thực thêm ba thí nghiệm tâm có kết quả: Bảng Kết thí nghiệm tâm Điều Giá trị Phƣơng sai kiện Yo1 Yo2 Yo3 S2th Tĩnh 4,078 4,478 4,482 0,054 Lắc 6,294 5,524 6,058 0,156 lên men Sau giải ma trận đƣợc hệ số bj phƣơng trình hồi quy Bảng Hệ số bj phƣơng trình hồi quy Điều kiện lên men Tĩnh Lắc Hệ số bj Giá trị tj t0.05(2) Kết luận 52,266 4,3 ≠0 0,344 4,3 =0 0,520 4,3 =0 Sbj bo 4,289 b1 -0,028 b2 -0,043 b3 0,142 1,733 4,3 =0 bo 5,468 39,204 4,3 ≠0 b1 0,324 2,323 4,3 =0 b2 0,325 2,327 4,3 =0 b3 0,421 3,015 4,3 =0 0,082 0,139 2.2 Kết tối ƣu hóa mơi trƣờng lần Bảng 5: Các nhân tố quy hoạch thực nghiệm Nhân tố Biến có thứ Biến khơng thứ nguyên (Z) nguyên (X) Mức ΔZ Mức ΔX Glucose 20 (NH4)2SO4 2,6 (NH4)2HPO4 0,6 Phƣơng trình hồi quy tuyến tính có dạng: ŷ = bo + b1x1 + b2x2 + b3x3 Bảng Mô hình quy hoạch thực nghiệm điều kiện lên men tĩnh (YT) lên men lắc (YL) Z1 Z2 Z3 X0 X1 X2 X3 14 5,4 1,4 + 26 5,4 1,4 14 YT YL - - - 4,512 4,570 + + - - 4,316 6,286 10,6 1,4 + - + - 3,836 5,264 26 10,6 1,4 + + + - 4,448 5,682 14 5,4 2,6 + - - + 4,470 5,674 26 5,4 2,6 + + - + 4,426 4,710 14 10,6 2,6 + - + + 4,302 4,784 26 10,6 2,6 + + + + 4,480 4,814 Thực thêm ba thí nghiệm tâm có kết quả: Bảng Kết thí nghiệm tâm Điều Giá trị Phƣơng sai kiện Yo1 Yo2 Yo3 S2th Tĩnh 4,194 4,574 4,504 0,041 Lắc 5,930 6,116 5,782 0,028 lên men Sau giải ma trận đƣợc hệ số bj phƣơng trình hồi quy Bảng Hệ số bj phƣơng trình hồi quy Điều kiện lên men Tĩnh Hệ số bj Giá trị bo 4,349 b1 0,069 b2 -0,082 Sbj 0,072 tj t0.05(2) Kết luận 60,820 4,3 ≠0 0,962 4,3 =0 1,150 4,3 =0 Lắc b3 0,071 0,989 4,3 =0 bo 5,438 91,895 4,3 ≠0 b1 0,150 2,535 4,3 =0 b2 -0,087 -1,470 4,3 =0 b3 -0,228 -3,845 4,3 =0 0,059 Kết cố định tế bào nấm men S cerevisiae 3.1 Cố định tế bào nấm men phƣơng pháp bẫy – hấp phụ Bảng Mật độ tế bào ban đầu đếm đƣợc trƣớc cố định (Đơn vị tính: số tế bào x 108/cm3) Kích thƣớc BC Chế độ khuấy đảo BC1(2cmx3cm) BC2(2cmx2cm) BC3(2cmx1cm) A B C A B C A B C 1,79 1,21 1,29 1,57 1,20 1,03 1,15 1,76 1,91 1,34 1,07 1,11 1,05 1,26 1,13 1,12 1,25 1,05 1,47 1,56 1,89 1,83 1,55 1,72 1,61 1,79 1,43 Số lần lặp lại Bảng 10 Mật độ tế bào nấm men cố định chất mang BC1, BC2 BC3 qua chế độ khuấy đảo 30 phút đầu hấp phụ (Đơn vị tính: số tế bào x 106/cm3) Kích thƣớc BC Chế độ khuấy đảo BC1(2cmx3cm) BC2(2cmx2cm) BC3(2cmx1cm) A B C A B C A B C 0.691 0.644 0.666 2.001 0.667 1.078 1.106 0.994 3.178 1.059 1.065 1.093 1.050 3.209 1.070 0.694 0.669 0.684 2.047 0.682 1.044 1.088 1.138 3.270 1.090 1.097 1.069 1.134 3.300 1.100 0.731 0.691 0.703 2.125 0.708 1.084 1.159 1.135 3.378 1.126 1.094 1.191 1.172 3.457 1.152 Số lần lặp lại Tổng Trung bình 3.2 Khảo sát ảnh hƣởng thời gian ủ lên trình cố định bẫy – hấp phụ Mật độ tế bào Thời gian ủ (ngày) ngày* ngày 1,088 1.138 1,043 1,090 6,487 8,621 7,910 7,673 8,061 9,861 9,832 9,251 6,810 6,738 6,846 6,797 5,977 6,257 6,801 6,343 Lần lặp lại Trung bình 6,746 7,789 6,880 7,138 ... lƣợc kỹ thu? ??t cố định tế bào vi sinh vật Kỹ thu? ??t cố định tế bào đƣợc định nghĩa kỹ thu? ??t bao bọc định vị tế bào nguyên vẹn lên vùng không gian định nhằm bảo vệ hoạt tính xúc tác mong muốn Cố định. .. pháp cố định 20 2.2.3 Ƣu điểm vi sinh vật cố định với vi sinh vật tự 23 2.2.4 Chất mang kỹ thu? ??t cố định tế bào vi sinh vật .23 2.3 Tính chất chất mang BC 25 Chƣơng – VẬT... chất ức chế môi trƣờng lên men 2.2.4 Chất mang kỹ thu? ??t cố định tế bào vi sinh vật 2.2.4.1 Tính chất chất mang Các chất mang đóng vai trị quan trọng vi? ??c ảnh hƣởng đến khả cố định tế bào vi sinh