tài liệu thực hành hóa phân tích

TRƢỜNG ĐẠI HỌC ĐẠI NAM KHOA DƢỢC BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH - KIỂM NGHIỆM THỰC HÀNH HĨA PHÂN TÍCH 1+2 HÀ NỘI - 2017 TRƢỜNG ĐẠI HỌC ĐẠI NAM KHOA DƢỢC BỘ MƠN HĨA PHÂN TÍCH VÀ KIỂM NGHIỆM THỰC HÀNH HĨA PHÂN TÍCH + (Sách dùng đào tạo dƣợc sỹ đại học) Hà Nội – 2017 THỰC TẬP HĨA PHÂN TÍCH 1+2 Chủ biên PGS TS Nguyễn Văn Minh Tham gia biên soạn Ths Đỗ Thị Thu Hằng Ths Vũ Văn Tuấn LỜI NĨI ĐẦU Hóa phân tích mơn học chƣơng trình đào tạo Dƣợc sĩ Môn học sở để sinh viên học môn học nhƣ: Kiểm nghiệm dƣợc phẩm định hƣớng chuyên ngành Đảm bảo chất lƣợng thuốc Giáo trình Thực hành hóa phân tích 1+2 gồm phần Phần 1: Phân tích hóa học gồm Phần 2: Phân tích dụng cụ gồm Các thực hành đƣợc xây dựng sở lý thuyết giáo trình Hóa phân tích Hóa phân tích Đối với sinh viên, giáo trình thực hành giúp em minh họa kiến thức lý thuyết Hóa phân tích, thực tế hóa thao tác ứng dụng lý thuyết để thực số phép phân tích: Chuẩn độ thể tích, chuẩn độ đo thế, đo pH, sắc ký, đo quang Giáo trình giúp giảng viên, kĩ thuật viên theo dõi, giám sát đánh giá thao tác nhƣ kết thực hành sinh viên Sinh viên cần chuẩn bị trƣớc vào phòng thực hành nhƣ báo cáo đầy đủ nội dung sau buổi thực hành Quán triệt mục tiêu đào tạo nhà trƣờng, tập thể giảng viên mơn Hóa phân tích – Kiểm nghiệm biên soạn tài liệu “Thực hành hóa phân tích 1+2” nhằm phục vụ cơng tác đào tạo Dƣợc sĩ Vì khả thời gian có hạn, nên khơng thể tránh khỏi thiếu sót Chúng tơi mong nhận đƣợc đóng góp quý báu đồng nghiệp bạn đọc Chúng xin chân thành cảm ơn! CÁC TÁC GIẢ MỤC LỤC PHẦN I: CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH HĨA HỌC BÀI 1: PHƢƠNG PHÁP ACID – BASE BÀI 2: PHƢƠNG PHÁP ACID – BASE BÀI 3: PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BẰNG BẠC BÀI 4: PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BẰNG BẠC Bài: PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BẰNG KMnO4 .10 BÀI 6: PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BẰNG IOD .13 Bài 7: PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG BẰNG IOD 17 Bài 8: PHƢƠNG PHÁP COMPLEXON 19 PHẦN II: CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH HĨA LÝ 22 BÀI 1: SẮC KÝ LỚP MỎNG VÀ SẮC KÝ TRAO ĐỔI ION 23 BÀI 2: PHƢƠNG PHÁP ĐIỆN HÓA: ĐO pH VÀ CHUẨN ĐỘ ĐO THẾ .28 BÀI 3: ĐỊNH TÍNH BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-VIS 33 BÀI 4: ĐỊNH LƢỢNG DUNG DỊCH SẮT (III) BẰNG PHƢƠNG PHÁP .35 QUANG PHỔ VIS .35 BÀI 5: ĐỊNH LƢỢNG NOVOCAIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP CHIẾT ĐO QUANG 39 BÀI 6: ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN CLORID TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƢƠNG PHÁP THÊM CHUẨN TRONG PHÉP ĐO QUANG PHỔ UV-VIS 42 BÀI 7: XÁC ĐỊNH DEXAMETHASON BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC .45 (KIẾN TẬP) .45 PHẦN I: CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH HĨA HỌC BÀI 1: PHƢƠNG PHÁP ACID – BASE Pha dung dịch chuẩn Natri hydroxyd Định lƣợng dung dịch Acid hydrochloric Mục tiêu - Pha đƣợc dung dịch chuẩn: dung dịch chuẩn HCl từ ống chuẩn dung dịch chuẩn NaOH có nồng độ xác theo u cầu - Xác định đƣợc nồng độ dung dịch HCl NaOH phƣơng pháp chuẩn độ acid – base Nguyên tắc Nguyên tắc phƣơng pháp định lƣợng acid mạnh base mạnh ngƣợc lại dựa phản ứng: NaOH + HCl → NaCl + H2O Chỉ thị: phenolphthalein heliantin (da cam methyl) để nhận điểm tƣơng đƣơng Nồng độ dung dịch HCl NaOH đƣợc tính theo cơng thức: VNaOH NNaOH = VHCl NHCl Dụng cụ hóa chất Dụng cụ Hóa chất - Cân kỹ thuật, cân phân tích - Dung dịch HCl 0,1N ống chuẩn - Buret - NaOH rắn - Pipet bầu 10ml; pipet Pasteur - Chỉ thị phenolphthalein, Heliantin - Bình nón 100ml Tiến hành thí nghiệm 4.1 Pha xác định nồng độ dung dịch NaOH TT Các thao tác Pha dung dịch HCl 0,1000N từ ống chuẩn Tính lƣợng NaOH cần lấy để pha 100ml dung dịch NaOH xấp xỉ 0,1N - Cân cân kỹ thuật lƣợng NaOH tính đƣợc, cho vào cốc cỏ mỏ, rửa nhanh với nƣớc, bỏ nƣớc - Phần NaOH lại thêm nƣớc hòa tan thành khoảng 100ml đƣợc dung dịch NaOH xấp xỉ 0,1N Đổ dung dịch NaOH khoảng 0,1N vừa pha lên buret Kết Lấy xác 10ml dung dịch chuẩn HCl 0,1N vào bình nón 100ml, thêm 1-2 giọt phenolphthalein, nhỏ dung dịch NaOH xuống đến xuất màu hồng nhạt Ghi lại thể tích NaOH sử dụng (Vml) Tính xác nồng độ dung dịch NaOH 4.2 Xác định nồng độ dung dịch HCl g/l (X) TT Các thao tác Cho dung dịch HCl cần định lƣợng (dung dịch X) lên buret Lấy xác 10ml dung dịch NaOH vừa xác định nồng độ Kết vào bình nón 100ml, thêm giọt thị heliantin Nhỏ dung dịch HCl xuống màu chuyển từ vàng sang đỏ cam Ghi thể tích Vml HCl Tính nồng độ dung dịch HCl (g/l) Nội dung báo cáo kết thực hành - Tính đƣợc lƣợng NaOH cần phải cân để pha 100ml dung dịch NaOH ~0,1N - Thiết lập cơng thức tính xác nồng độ đƣơng lƣợng dung dịch NaOH vừa pha - Thiết lập cơng thức tính đƣợc nồng độ g/l dung dịch HCl tập (X) Câu hỏi lƣợng giá 6.1 Khi chuẩn độ NaOH HCl, để dung dịch NaOH buret nên dùng thị phenolphthalein hay methyl da cam? Tại sao? 6.2 Tại pha trực tiếp dung dịch NaOH chuẩn từ NaOH viên? 6.3 Khảo sát đƣờng biểu diễn định lƣợng lựa chọn thị định lƣợng acid mạnh base mạnh? BÀI 2: PHƢƠNG PHÁP ACID – BASE Pha dung dịch chuẩn NaOH 0,1N HCl 0,1N Định lƣợng dung dịch Natri hydrocarbonat (NaHCO3) Mục tiêu - Pha đƣợc dung dịch chuẩn: dung dịch chuẩn NaOH 0,1N từ ống chuẩn dung dịch chuẩn HCl 0,1N từ acid HCl đặc - Xác định đƣợc nồng độ dung dịch NaHCO3 phƣơng pháp chuẩn độ acid – base Nguyên tắc 2.1 Pha dung dịch chuẩn HCl 0,1N từ HCl đặc Acid HCl đặc có khối lƣợng riêng d= 1,174-1,188 g/ml, có nồng độ 35% - 38% (kl/kl) thƣờng không đạt tiêu chuẩn chất gốc Bởi pha acid HCl 0,1N từ acid HCl đặc, ta pha gần Sau đó, xác định lại nồng độ dung dịch base chuẩn 2.2 Định lƣợng dung dịch NaHCO3 Nguyên tắc phƣơng pháp định lƣợng NaHCO3 acid HCl dựa vào phản ứng sau: NaHCO3 + HCl → NaCl + H2O + CO2 Sử dụng thị da cam methyl để nhận điểm tƣơng đƣơng Dụng cụ hóa chất Dụng cụ Hóa chất - Cân kỹ thuật, cân phân tích - Dung dịch NaOH 0,1N ống chuẩn - Buret - Dung dịch NaHCO3 tập - Pipet bầu 10,00ml; Pipet Pasteur - Chỉ thị phenolphthalein, Heliantin - Bình nón 100ml Tiến hành thí nghiệm 4.1 Pha dung dịch NaOH 0,1N từ ống chuẩn Sinh viên pha theo hƣớng dẫn nhãn ống chuẩn hƣớng dẫn kĩ thuật viên 4.2 Pha dung dịch chuẩn HCl 0,1N từ HCl đặc: Các bƣớc tiến hành TT Tính thể tích acid HCl đặc cần để pha 100ml dung dịch HCl có nồng độ khoảng 0,1N Dùng pipet (không đƣợc hút miệng) lấy thể tích HCl đặc, cho Kết acid vào nƣớc cất pha loãng đến vừa đủ 100ml cốc có mỏ 100ml Rót dung dịch HCl vừa pha đƣợc lên buret Lấy xác 10ml dung dịch NaOH 0,1N cho vào bình nón, thêm giọt phenolphthalein Nhỏ dung dịch HCl từ buret xuống màu hồng phenolphthalein dùng lại Ghi thể tích Vml dung dịch HCl sử dụng Từ số liệu tính xác nồng độ dung dịch HCl pha 4.3 Định lƣợng NaHCO3 Các bƣớc tiến hành TT Kết Cho dung dịch acid HCl vừa xác định nồng độ lên buret Lấy xác 10ml dung dịch NaHCO3 cần xác định nồng độ (dung dịch tập) vào bình nón 100nl, thêm giọt thị methyl da cam, lắc Nhỏ dung dịch HCl xuống màu chuyển từ vàng sang đỏ cam Ghi thể tích HCl dùng Tính nồng độ đƣơng lƣợng dung dịch NaHCO3 tập Nội dung báo cáo kết thực hành - Tính thể tích acid HCl đặc cần lấy để pha 100ml dung dịch HCl nồng độ xấp xỉ 0,1N? - Xây dựng cơng thức tính xác nồng độ dung dịch acid HCl pha? - Xây dựng công thức tính xác nồng độ dung dịch NaHCO3? Câu hỏi lƣợng giá 6.1 Trong phịng thí nghiệm có loại hóa chất tinh khiết: H2C2O4, H2O, NaOH viên, HCl đặc, H2SO4 đặc Trong chất này, chất chất gốc? Trình bày cách pha dung dịch chuẩn HCl từ acid HCl đặc? 6.2 Tại pha trực tiếp dung dịch NaOH chuẩn từ NaOH viên? BÀI 3: ĐỊNH TÍNH BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-VIS MỤC TIÊU - Trình bày đƣợc nguyên tắc định tính chất phƣơng pháp quang phổ UVVIS - Tiến hành định tính đƣợc B12 phƣơng pháp quang phổ UV-VIS ĐỊNH TÍNH B12 BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-VIS 2.1 Nguyên tắc Định tính chất phƣơng pháp quang phổ UV-VIS dựa việc đo phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến chất Phổ hấp phụ đồ thị biểu diễn phụ thuộc mật độ quang (độ hấp thụ) dung dịch chất phân tích vào bƣớc sóng tia sáng đơn sắc Thiết lập phổ hấp thụ cách đo mật độ quang dung dịch có nồng độ xác định với xạ có độ dài sóng giảm dần tăng dần, sau vẽ đồ thị D-λ Trên phổ hấp thụ nhận thấy cực đại hấp thụ (ứng với bƣớc sóng mà hấp thụ cực đại) cực tiểu có Các chất khác thƣờng có phổ hấp thụ khác Do thƣờng dùng phổ hấp thụ để định tính chất để thử tinh khiết chất vào dạng phổ, cực đại cực tiểu hấp thụ, tỷ lệ cƣờng độ hấp thụ cực đại cực tiểu hấp thụ Với vitamin B12, dung dịch 0.0025% nƣớc có cực đại hấp thụ: 278 ± 1nm, 361 ± 1nm 550 ± 2nm Tỉ số độ hấp thụ 361nm với độ hấp thụ 278nm 1,70 đến 1,90 Tỉ số độ hấp thụ 361nm với độ hấp thụ 550nm 3,15 đến 3,45 2.2 Dụng cụ hóa chất Dụng cụ Hóa chất - Máy quang phổ UV-VIS - Dung dịch thuốc tiêm vitamin B12 - Bình định mức 10, 25, 50, 100ml - Nƣớc cất - Cốc có mỏ, pipet xác 2.3 Tiến hành thí nghiệm TT Thao tác Chuẩn bị mẫu phân tích Từ dung dịch thuốc tiêm vitamin B12, pha lỗng nƣớc cất đến nồng 25µg/ml Khởi động máy 33 Kết Bật máy quang phổ, đƣa chế dộ quét phổ (scan) với bƣớc sóng cài đặt từ 200-600nm Quét phổ Lần lƣợt đƣa dung dịch mẫu trắng dung dịch cần định tính vào cuvet thạch anh thực chế độ quét phổ Xác định thông số phổ hấp thụ - Xác định vị trí cực đại hấp thụ giá trị mật độ quang cực đại hấp thụ 2.4 Nội dung báo cáo kết thực hành - Mơ tả hình dạng phổ hấp thụ ghi đƣợc hình vẽ - Vị trí cực đại hấp thụ (3 vị trí) giá trị mật độ quang dung dịch cực đại hấp thụ - Tỉ số mật độ quang 361 so với 278nm; tỉ số mật độ quang 361 so với 550nm - Kết luận phép phân tích định tính CÂU HỎI LƢỢNG GIÁ 3.1 Nêu nguyên tắc định tính chất phƣơng pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại khả kiến ? 3.2 Có thể điều chỉnh thí nghiệm nhƣ để đƣợc kết tin cậy ? 34 BÀI 4: ĐỊNH LƢỢNG DUNG DỊCH SẮT (III) BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ VIS MỤC TIÊU - Trình bày đƣợc nguyên tắc phƣơng pháp quang phổ hấp thụ UV-VIS - Thực hành pha đƣợc dãy dung dịch chuẩn để xây dựng đƣờng chuẩn biểu thị mối tƣơng quan mật độ quang nồng độ dung dịch - Thực hành chọn đƣợc bƣớc sóng để đo mật độ quang dung dịch - Ứng dụng phƣơng pháp quang phổ VIS để định lƣợng dung dịch tập ĐỊNH LƢỢNG DUNG DỊCH SẮT (III) BẰNG QUANG PHỔ VIS 2.1 Nguyên tắc Cơ sở phƣơng pháp phân tích định lƣợng quang phổ UV-VIS định luật Lambert-Beer: D = K.l.C Trong đó: D: mật độ quang dung dịch K: hệ số hấp thụ, phụ thuộc chất chất phân tích bƣớc sóng ánh sáng đơn sắc l: bề dày lớp dung dịch mà ánh sáng qua (chiều dài quang trình, đƣờng kính cốc đo) C: nồng độ dung dịch Định lƣợng dung dịch sắt (III) dựa phản ứng tạo phức màu đỏ ion Fe 3 và  ion CNS môi trƣờng acid: Fe 3 + 6CNS  [Fe(CNS)6]3 Phức có khả hấp thụ ánh sáng vùng khả kiến Do đó, dùng 3 phƣơng pháp đo độ hấp thụ vùng khả kiến để định lƣợng Fe 2.2 Dụng cụ hóa chất Dụng cụ Hóa chất - Máy quang phổ UV-VIS - Dung dịch Fe 3 chuẩn 0,005M - Pipet xác - Dung dịch Fe 3 cần định lƣợng - Ống đong - Dung dịch KSCN 0,1 M 35 - Bình định mức - Dung dịch HCl 10% 2.3 Tiến hành thí nghiệm TT Thao tác Chuẩn bị mẫu Từ dung dịch cho, pha mẫu từ đến theo hƣớng dẫn bảng Lắc đều, đổ mẫu ống nghiệm to, đánh số tƣởng ứng từ đến Xác định λmax - Sử dụng ống số số để xác định λmax , khảo sát bƣớc sóng từ 450 đến 570nm - Khảo sát sơ bộ: Ghi lại mật độ quang dung dịch thay đổi Δλ=10nm (tham khảo bảng 2) Từ bảng số liệu xác định λ mà ∆D = D3 –D2 có giá trị cực đại (gọi bƣớc sóng λ’) - Khảo sát chi tiết: ghi lại mật độ quang dung dịch từ bƣớc sóng λ’ -10nm đến λ’ +10nm, thay đổi Δλ=2nm (tham khảo bảng 2) Từ bảng số liệu thu đƣợc, xác định λmax bƣớc sóng mà ∆D = D3 –D2 có giá trị cực đại Xác định mật độ quang mẫu phân tích Tại bƣớc sóng λmax , xác định mật độ quang dung dịch ống từ đến đối chiếu với mẫu trắng (ống số 1) 36 Kết Bảng 1: Hƣớng dẫn pha dung dịch chuẩn dung dịch thử Dung dịch Fe 3 tập (ml) Dung dịch KSCN 0,1M(ml) Dung dịch 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 0 0 0 0,60 10 10 10 10 10 10 10 1 1 1 25 25 25 25 25 25 25 3 0,005M (ml) Dung dịch Fe HCl 10% (ml) Nƣớc cất vừa đủ (ml) Bảng 2: Minh họa theo dõi thay đổi mật độ quang theo bƣớc sóng TT λ … … … … D2 D3 ΔD = D3 –D2 2.4 Nội dung báo cáo kết thực hành - Hai bảng số liệu theo dõi dự thay đổi mật độ quang theo bƣớc sóng ống số số 3, giá trị λmax xác định đƣợc - Kết đo mật độ quang dung dịch phân tích λmax - Tính tốn kết xác định nồng độ dung dịch tập theo phƣơng pháp so sánh với dung dịch chuẩn - Đƣờng chuẩn kết xác định nồng độ dung dịch tập theo phƣơng pháp đƣờng chuẩn - Nhận xét giải thích kết xác định nồng độ dung dịch tập xác định đƣợc theo phƣơng pháp CÂU HỎI LƢỢNG GIÁ 3.1 Trình bày nguyên tắc phƣơng pháp đo quang phổ hấp thụ UV-VIS ? 3.2 So sánh ƣu nhƣợc điểm phƣơng pháp: So sánh với chuẩn đƣờng chuẩn ? 37 3.3 Tại lựa chọn bƣớc sóng λmax lại khảo sát từ 450-570nm ? 3.4 Vì đo mật độ quang D phải đối chiếu với mẫu trắng ? 3.5 Để bảo vệ cuvet tế bào quang điện để kết đo đƣợc xác, cần lƣu ý thao tác? 3.6 Vùng mật độ quang tối ƣu gì? Khi đo ngồi vùng đo tối ƣu? 3.7 Trình bày cơng thức tính nồng độ % dung dịch Fe 3 (kl/tt) ? 3.8 Nếu dung dịch không tuân theo định luật Lambert-Beer sử dụng phƣơng pháp so sánh, đƣờng chuẩn để xác định nồng độ chất đƣợc không ? Tại ? 38 BÀI 5: ĐỊNH LƢỢNG NOVOCAIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP CHIẾT ĐO QUANG MỤC TIÊU - Trình bày đƣợc nguyên tắc phƣơng pháp chiết đo quang - Thực đƣợc thao tác chiết nƣớc với dung môi hữu không trộn lẫn với nƣớc - Định lƣợng đƣợc novocain phƣơng pháp chiết đo quang ĐỊNH LƢỢNG NOVOCAIN BẰNG PHƢƠNG PHÁP CHIẾT ĐO QUANG 2.1 Ngun tắc Hình 1: Cơng thức cấu tạo Novocain (procain hydroclorid) Tên khoa học: Benzooic acid, 4-amino-2 (diethylamino) ethyl ester, monohydroclorid Novocain base tổng hợp, có khả tạo cặp ion mang màu với số chất acid (ví dụ màu azoin nhƣ heliantin, tropeolin OO ) Trong môi trƣờng dung dịch  đệm acetat (pH=4-5), novocain dƣới dạng cation (B ) với acid màu (nhƣ    Heliantin), novocain dƣới dạng anion (A ), tạo thành cặp ion B A có màu chiết đƣợc vào cloroform A  + B    B A   B : dạng cation alkaloid, base tổng hợp  A : dạng anion màu acid   B A : có màu, chiết vào cloroform Đo mật độ quang dung dịch cloroform bƣớc sóng 420nm, so sanh với mẫu chuẩn điều kiện tƣơng tự Từ đó, tính nồng độ Novocain mẫu phân tích 2.2 Dụng cụ hóa chất Dụng cụ Hóa chất - Máy quang phổ UV-VIS - Dung dịch novocain chuẩn 1mg/ml - Bình gạn 50ml - Dung dịch Novocain tập - Bình định mức 25ml - Đệm acetat pH 4-5 39 - Phễu, giấy lọc - Dung dịch heliantin 0,1% - Cốc có mỏ, pipet - Cloroform 2.3 Tiến hành thí nghiệm TT Thao tác Kết Chuẩn bị mẫu - Kiểm tra bình gạn xem kín chƣa, lắp lên giá, ghi tên - Lấy hóa chất vào bình gạn theo hƣớng dẫn bảng Chiết Novocain sang pha cloroform - Cho vào bình gạn 6ml chloroform, lắc bình gạn theo thao tác hƣớng dẫn 10 phút Đặt bình lên giá, mở nắp để phân lớp hoàn toàn - Gạn lấy lớp cloroform bên dƣới vào bình định mức khơ 25ml, ghi tên tƣơng ứng, không đƣợc để lẫn pha nƣớc - Chiết thêm lần tƣơng tự nhƣ mô tả - Thêm cloroform đến vừa đủ 25ml bình định mức, lắc Lọc - Lọc dung dịch bình định mức qua giấy lọc khô vào ống nghiệm ghi tên tƣơng ứng - Chú ý: Phễu, giấy lọc, ống nghiệm cần phải sạch, khô Đo mật độ quang Đo mật độ quang ống thu đƣợc bƣớc sóng 420nm so với mẫu trắng (S0) Chú ý: Cốc đo không đƣợc dính nƣớc Bảng 1: Hƣớng dẫn chuẩn bị mẫu phân tích S0 S1 S2 X1 X2 Đệm acetat (ml) 3 3 Heliantin 0,1%(ml) 2 2 Novocain chuẩn 1mg/ml (ml) 0,5 0,5 0 Novocain tập (ml) 0 0,5 0,5 Nƣớc cất (ml) 4,5 4,5 4,5 4,5 40 2.4 Nội dung báo cáo kết thực hành - Kết đo mật độ quang dung dịch phân tích - Xây dựng cơng thức tính nồng độ novocain (mg/ml) mẫu tập theo phƣơng pháp quang phổ UV-VIS so sánh với dung dịch chuẩn - Kết xác định nồng độ novocain (mg/ml) dung dịch tập - Trình bày nguyên nhân gây sai số, biện pháp khắc phục sử dụng mà thân dùng để hạn chế sai số ? CÂU HỎI 3.1 Trình bày nguyên tắc phƣơng pháp chiết cặp ion ? 3.2 Nguyên tắc phƣơng pháp định lƣợng novocain chiết đo quang ? 3.3 Khi chiết cặp ion novocain heliantin, ion có khối lƣợng lớn kỵ nƣớc ? 3.4 Có thể chiết cặp ion novocain heliantin môi trƣờng pH đƣợc không ? Tại ? 41 BÀI 6: ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN CLORID TRONG VIÊN NÉN BẰNG PHƢƠNG PHÁP THÊM CHUẨN TRONG PHÉP ĐO QUANG PHỔ UV-VIS MỤC TIÊU - Trình bày đƣợc nguyên tắc phƣơng pháp quang thêm chuẩn định lƣợng quang phổ UV-VIS - Ứng dụng phƣơng pháp để định lƣợng berberin clorid viên nén ĐỊNH LƢỢNG BERBERIN THEO PHƢƠNG PHÁP THÊM CHUẨN 2.1 Nguyên tắc Phƣơng pháp thêm chuẩn đƣợc sử dụng với mục đích hạn chế ảnh hƣởng mẫu trình xử lý mẫu mẫu phức tạp Trƣớc hết, thêm lƣợng chất chuẩn biết dãy mẫu thử Sau đó, xử lý mẫu dùng phƣơng pháp định lƣợng nhƣ quang phổ UV-VIS để so sánh đáp ứng mẫu điều kiện đo Kết đƣợc xác định theo công thức: Dx Dx Cx   Cx  Cch D' x  Dx Dx' Cx  Cch Trong đó: Cx Cch nồng độ chất phân tích mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn Dx D’x mật độ quang mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn Trong viên nén berberin, hoạt chất berberin clorid cịn có thành phần tá dƣợc, tạp chất khác Do đó, mẫu định lƣợng phức tạp, sử dụng phƣơng pháp thêm chuẩn để tang độ xác phép định lƣợng Hình 1: Cơng thức cấu tạo Berberin clorid Berberin clorid có cơng thức hóa học [C20H18NO4]+.Cl-.2H2O khối lƣợng phân tử 388,92 Nó tan nƣớc nóng, khó tan ethanol nƣớc, khó tan 42 cloroform, không tan ether Dung dịch berberin clorid nƣớc có cực đại hấp thụ 263 345nm 2.2 Dụng cụ hóa chất Dụng cụ Hóa chất - Máy quang phổ UV-VIS - Berberin clorid (chất chuẩn) - Cân phân tích - Viên nén berberin clorid 5mg - Chày, cối sứ - Nƣớc cất, giấy lọc - Cốc, đũa thủy tinh - Bình định mức 100ml - Pipet xác 1, 5, 10ml 2.3 Tiến hành thí nghiệm TT Thao tác Pha dung dịch berberin clorid chuẩn - Từ bột berberin chuẩn, pha 100ml dung dịch berberin chuẩn 0,1% - Khối lƣợng chất chuẩn thực tế cân ms Xác định khối lƣợng trung bình viên Cân 20 viên nén berberin clorid cân phân tích Xác định khối lƣợng trung bình viên Nghiền viên cối sứ đến bột mịn Chuẩn bị mẫu thử - Cân vào cốc có mỏ xác lƣợng bột viên tƣởng đƣơng với 10mg berberin clorid (m1) - Thêm vào khối bột vài giọt nƣớc cất để thấm ẩm, dùng đũa thủy tinh trộn Tiếp tục thêm 10ml nƣớc cất, khuấy - Thêm vào cốc khoảng 25ml nƣớc sôi, khuấy phút, để lắng, nguội 15 phút Gạn lấy phần dịch vào bình định mức 100ml (*) - Lặp lại thao tác (*) thêm lần Ở lần cuối, chuyển dịch cắn vào bình định mức 100ml Bình định mức nguội hồn tồn 43 Kết thêm nƣớc cất đến vạch, lắc - Lọc qua giấy lọc khô, bỏ 20ml dịch lọc đầu - Lấy xác 5ml dịch lọc vào bình định mức 100ml, thêm nƣớc cất đến vạch, lắc Chuẩn bị mẫu thử thêm chuẩn - Cân vào cốc có mỏ xác lƣợng bột viên tƣởng đƣơng với 10mg berberin clorid (m2) - Thêm vào khối bột vài giọt nƣớc cất để thấm ẩm, dùng đũa thủy tinh trộn Tiếp tục thêm xác 10,00ml dung dịch berberin clorid chuẩn 0,1%, khuấy - Các bƣớc làm tƣơng từ giai đoạn chuẩn bị mẫu thử (Chú ý: Làm song song mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn) Đo mật độ quang - Xác định mật độ quang mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn bƣớc sóng 263 345nm, đối chiếu với mẫu trắng (nƣớc cất) 2.4 Nội dung báo cáo kết thực hành - Khối lƣợng berberin clorid chuẩn cân (ms) - Khối lƣợng trung bình viên (mTB), khối lƣợng bột viên dùng pha mẫu thử (m1) mẫu thử thêm chuẩn (m2) - Mật độ quang mẫu thử mẫu thử thêm chuẩn - Xây dựng cơng thức tính hàm lƣợng (mg/viên) berberin clorid viên nén - Tính tốn hàm lƣợng berberin clorid viên nén (mg/viên) - Tỷ lệ % hàm lƣợng berberin clorid viên so với hàm lƣợng ghi nhãn CÂU HỎI LƢỢNG GIÁ 3.1 Từ cơng thức cấu tạo berberin clorid giải thích dùng phƣơng pháp quang phổ UV-VIS để định lƣợng dƣợc chất ? 3.2 So sánh ƣu, nhƣợc điểm phƣơng pháp thêm chuẩn với phƣơng pháp đo quang trực tiếp, so sánh với chuẩn ? 44 BÀI 7: XÁC ĐỊNH DEXAMETHASON BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC (KIẾN TẬP) MỤC TIÊU - Mô tả đƣợc cấu trúc trình bày đƣợc nguyên tắc hoạt động hệ thống HPLC - Trình bày đƣợc nguyên tắc định tính, định lƣợng chất HPLC - Xác định đƣợc số thông số từ sắc ký đồ thu đƣợc XÁC ĐỊNH DEXAMETHASON BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC 2.1 Nguyên tắc Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phƣơng pháp tách, xác định chất dựa phân bố chất pha tĩnh pha động Thứ tự rửa giải chất phân tích phụ thuộc vào khả phân bố chúng pha tĩnh pha động Thành phần pha động tốc độ dòng đƣợc điều chỉnh để rửa giải chất phân tích với thời gian hợp lý Để xác định dexamethason từ chế phẩm, chất phân tích đƣợc tách khỏi tạp đƣợc định tính, định lƣợng thơng qua so sánh với mẫu dexamethasone chuẩn đƣợc phân tích điều kiện - Định tính: Pic mẫu thử pic mẫu chuẩn có thời gian lƣu - Định lƣợng: So sánh đáp ứng mẫu thử với mẫu chuẩn (diện tích chiều cao pic) 2.2 Dụng cụ hóa chất Dụng cụ Hóa chất - Máy HPLC - Dexamethason chuẩn - Pipet thủy tinh, bình định mức - Chế phẩm cần phân tích - Màng lọc 0,45µm - Methanol dùng cho HPLC - Pipet tự động - Nƣớc cất lần dùng cho HPLC 2.3 Tiến hành thí nghiệm TT Thao tác Giới thiệu máy HPLC Giới thiệu cấu tạo nguyên tắc hoạt động hệ thống HPLC Đối chiếu lý thuyết học với hệ thống HPLC phịng thí nghiệm 45 Kết Chuẩn bị mẫu Chuẩn bị pha động mẫu sau: - Dung dịch thử: Cân xác lƣợng chế phẩm tƣơng ứng 2,5mg dexamethason vào bình định mức 25ml Hòa tan thêm vừa đủ methanol 50% nƣớc (tt/tt) Lắc đều, lọc - Dung dịch chuẩn: Dung dịch dexamethason chuẩn 0,01% methanol 50% (tt/tt) Cài đặt máy Hƣớng dẫn sinh viên cài đặt điều kiện sắc ký nhƣ sau: - Cột sắc ký nhồi pha tĩnh C18 (15 cm, µm) - Pha động methanol:nƣớc = 55:45 - Tốc độ dòng 1,2ml/phút - Thể tích tiêm 10µl - Detector quang phổ UV-VIS phát bƣớc sóng 238nm Triển khai sắc ký Sinh viên theo dõi trình tiêm mẫu, sắc ký lần lƣợt với dung dịch thử dung dịch chuẩn 2.4 Nội dung báo cáo kết thực hành - Các thông số sắc ký đồ mẫu chuẩn, mẫu thử: Thời gian lƣu, chiều cao, diện tích pic, độ rộng đáy pic - Nhận xét sắc ký đồ - Kết luận khả tách, định tính dựa thơng số đặc trƣng sắc ký đồ - Xây dựng công thức định lƣợng dexamethason mẫu phân tích tính tốn kết theo công thức CÂU HỎI LƢỢNG GIÁ 3.1 Nêu đặc điểm dung mơi pha động, chất cần phân tích phân loại sắc ký lỏng thực hành ? 3.2 Nêu ảnh hƣởng yếu tố tốc độ dịng, tỉ lệ dung mơi pha động đến kết phân tích ? 3.3 Tính số đĩa lý thuyết N chiều cao đĩa lý thuyết H ? 3.4 Nếu thay cột sắc ký C18 cột C8 sắc ký đồ thay đổi thơng số ? 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Trần Tử An (2007), Hóa phân tích tập 2, Nhà xuất y học, Hà Nội Trần Tử An (2007), Hóa phân tích tập 1, Nhà xuất y học, Hà Nội Trần Ngun Hà (2017), Thực tập hóa phân tích, Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội TRƢỞNG KHOA GIẢNG VIÊN TS Phạm Văn Nguyện PGS TS Nguyễn Văn Minh 47 ... phân tích 1+2 gồm phần Phần 1: Phân tích hóa học gồm Phần 2: Phân tích dụng cụ gồm Các thực hành đƣợc xây dựng sở lý thuyết giáo trình Hóa phân tích Hóa phân tích Đối với sinh viên, giáo trình thực. .. vào chất cần phân tích, chất phân tích khơng phân cực chọn chất hấp phụ có hoạt tính cao (hấp phụ mạnh) dung mơi khơng phân cực Chất phân tích phân cực chọn ngƣợc lại Sau đƣa mẫu phân tích lên mỏng,... sinh viên, giáo trình thực hành giúp em minh họa kiến thức lý thuyết Hóa phân tích, thực tế hóa thao tác ứng dụng lý thuyết để thực số phép phân tích: Chuẩn độ thể tích, chuẩn độ đo thế, đo pH,