VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP ĐÈ TÀI “NGHIÊN CỬU ĐIỀU KIỆN CHUYÊN HÓA SUCROSE THÀNH ISOMALTULOSE sủDỤNG VI SINH VẠT” Giáo viên hưóng dẫn PGS TS Vũ Nguyên Thành S.
VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP ĐÈ TÀI: “NGHIÊN CỬU ĐIỀU KIỆN CHUYÊN HÓA SUCROSE THÀNH ISOMALTULOSE sủ'DỤNG VI SINH VẠT” Giáo viên hưóng dẫn: PGS TS Vũ Nguyên Thành Sinh viên thực hiện: Truong Thị Tú Anh Lóp: K20- 1302 Hà Nội - 2017 Viện đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học LỜI CẢM ON Với lòng biết ơn sâu sac em xin gứi lời căm ơn chân thành tới PGS TS Vũ Nguyên Thành tận tình hướng dẫn, truyền thụ cho em kiến thức chuyên mơn vơ q báu lịng nhiệt tình suốt q trình hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin bày tỏ lịng biết ơn tới Ban Giám hiệu Viện Đại học Mờ Hà Nội Ban Chù nhiệm khoa Công nghệ sinh học thày cô giáo Bộ môn động viên chi dần đóng góp ý kiến tạo điều kiện thuận lợi đế em hoàn thành luận văn Đồng thời em xin chân thành cảm ơn ThS.Nguyễn Thanh Thủy ThS.Cao Xuân Bách anh chị làm việc Trung tâm Vi sinh vât Công nghiệp - Viện Công nghiệp Thực.phâmiđã nhiệt tình hướng dần giúp, đỡ em suốt q trình học tập hồn thành đề tài nghiên cứu Cuối cùng, em xin gứi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè, người ln bên cạnh động viên, khích lệ, giúp đỡ em suốt thời gian học tập nghiên cứu Do thời gian khã bán thân hạn che, khóa luận cùa cm khơng tránh khỏi thiêu sót Em mong nhận chi bảo cùa thầy đóng góp ý kiến cùa bạn đế khóa luận cùa em đầy đù hoàn chinh Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Sinh viên Trương Thị Tú Anh Trương Thị Tú Anh - 1302 Viện đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học MỰC LỰC LỜI CẢM ƠN .1 PHẦN 1: TÔNG QUAN 1.1 Đường Isomaltulose 1.1.1 Cấu trúc Isomaltulose 1.1.2 Tính chất đường Isomaltulose 1.1.3 Enzyme chuyến hóa sucrose thành isomaltulose 1.2 Đặc điêm sinh hóa 1.2.1 Khả tiêu hóa 1.2.2 Sự trao đổi chất 1.2.3 Vai trò chức ciịa đường Isomaltulose Tnử vĩẹn Viẹn Đặĩ nọc Mo Hà Nối 11 1.3 Tinh hình sản xuất đường Isomaltulose giới 12 1.4 Tinh hình sản xuất Isomaltulose Việt Nam 13 PHÀN 2: VẶT LIỆU VÀ PHUONG PHÁP NGHIÊN cửu 13 Nguyên vật liệu 13 2.1 2.1.1 Chủng giống 14 2.1.2 Hóa chất 15 2.1.3 Thành phần môi trường dùng nghiên cứu 15 2.2 Máy móc thiết bị 16 2.3 Các phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Nuôi cấy vi sinh vật 17 Trương Thị Tú Anh - 1302 Viện đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học 2.3.2 Nhuộm tế bào vi khuẩn Gram 17 2.3.3 Điều kiện chuyến hóa sucrose thành isomaltulose 18 2.3.4 Các yếu tố ành hường đến trình chuyến hóa sucrose thành isomaltulose 19 Các phương pháp phân tích 22 2.4 2.4.1 Phương pháp xác định đường khử DNS 22 2.4.2 Phương pháp sắc ký lóng hiệu cao (HPLC) 25 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Tuyển chọn chủng có khả sinh enzyme chuyến hóa hiệu suất cao 27 3.2 Đặc điểm hình thái phân loại vi khuấn .32 3.3 Điều kiện chuyến hckd'suerbsk thẳìíh htịbiẩìtkííosea b.1.;34 3.3.1 Thời gian chuyển hóa 35 3.3.2 Ảnh hướng cùa pH q trìnhchuyển hóa 36 3.3.3 Ánh hường nhiệt độ q trình chuyển hóa 38 3.3.4 Anh hưởng nồng độ chất 39 3.4 Quy trình sản xuất isomaltulose phịng thí nghiệm 41 PHÀN 4: KÉT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ 43 4.1 Kết luận 43 4.2 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 Trương Thị Tú Anh - 1302 Viện đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học nhũng tù viết tất PCA Plate count agar SPY Sucrose peptone yeast extract rpm Revolutions Per Minute DNS Dinitrosalicylic acid WHO World Health Organization HPLC High Performance Liquid Chromatography GI Glycemic Index Thư viện Viện Đại học Mớ Hà Nội Trương Thị Tú Anh - 1302 Viện đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học DANH MỤC BẢNG Bảng I Danh sách mẫu chủng vi khuấn sinh isomaltulose 14 Bàng Tỉ lệ pha đệm axit axetic 20 Bảng Ti lệ pha đệm sodium phosphate .21 Bảng Pha nồng độ đường đường chuấn 23 Bàng Hình thái tế bào chủng lựa chọn khảo sát 33 Thư viện Viện Đại học Mớ Hà Nội Trương Thị Tú Anh - 1302 Viện đại học Mở Hà Nội Khoa Công Nghệ Sinh Học DANH MỤC HÌNH Hình Sơ đồ chuyền hóa sucrose tác dụng cùa sucrose Hình Cơng thức cấu tạo cùa Isomaltulose Hình Đồ thị đường chuấn Isomaltulose 24 Hình Đồ thị đường chuẩn 26 Hình So sánh nồng độ đường khử tống sàn phẩm theo DNS cũa 23 chúng ISB CBS 28 Hình Kết q phân tích nồng độ glucose, isomaltulose, sucrose cùa 23 chủng 1SB chùng CBS theo HPLC 29 Hình Sơ đồ phân loại chủng chuyến hóa sucrose thành isomaltulose 31 Hình Hình thái khuấn lạc te bào cùa chùng chủng vi khuấn 33 Hình Thí nghiệm kháo sát theo thòi gian lấy mẫu thời điếm: Oh, 111 2h,3h,4h,5h,6h, 12h,24h 35 Hình 10 Thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng cùa pH pH 3, pH 4, pH 5, pH 6, pH 7, pH 37 Hình 11 Thí nghiệm kháo sát ãnh hường nhiệt độ bao gồm 20°C, 30°C, 40°C, 50°C, 60°C, 70°C 38 Hình 12 Thí nghiệm khảo sát với nồng dộ chất bao gồm 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 39 Hình 13 Hiệu suất chuyển hóa sucrose thành isomaltulose 40 Hình 14 Quy trình cơng nghệ sản xuất isomaltulose từ sucrose 41 Trương Thị Tú Anh - 1302 MỞ ĐÀU Theo cảnh báo Tố chức Y tế giới (WHO), nay, có khống I tỷ số gần tỷ người thể giới bị thừa cân, có 400 triệu người mắc bệnh béo phì Bên cạnh béo phì yếu tố di truyền lối sống, tiện ích xã hội đại dành nhiều thời gian xem truyền hình, chơi video game, sử dụng máy tính liên tục, dành thời gian lập the dục khiến người ta vận động thê lực Bên cạnh cịn ngun nhân chế độ dinh dưỡng không hợp lý ngày người có xu hướng thích đồ ăn nhanh hay loại bánh kẹo chứa nhiều chất béo làm chất béo tích tụ ngun nhân Tĩ lệ béo phì thừa cân tăng lên đột ngột quốc gia nghèo hơn, không nước giàu dự báo trước gánh nặng bệnh mãn tính tiếu đường, tim, huyết áp ung thư loãng xương Mồi năm chi phí chữa béo phì chiếm từ 2% đến 8% ngân sách dành cho yựế cùa quốc gia Đối với bệnh tiểu đường, Tổ chức Y tế giới (WHO) cho “Cơn sóng thần tàn phá sức khịe tồn cầu” Tuy Việt Nam khơng phải nước có tỉ lệ mắc bệnh tiếu đường lớn the giới nước có bệnh tiếu đường phát triến nhanh giới Hiện có khoảng 4,8 triệu người mắc bệnh tiểu đường số tăng lên đến triệu người vào năm 2025, khuyến cáo từ Viện nghiên cứu Chiến lược phịng chống bệnh tiếu đường Việt Nam Chính từ mối lo ngại đó, gần 20 năm qua, nhà khoa học nghiên cứu, lựa chọn tìm phương pháp sản xuất loại đường chức có nhiều đặc tính có lợi cho sức khỏe như: chống bệnh tiều đường, chống béo phì khơng gây sâu răng, có khă kích thích hoạt động hệ tiêu hóa Điển hình loại đường chức năng: mannitol, sorbitol, xylitol Trương Thị Tú Anh - 1302 galactose, isomalulose, xylo-oligosacarit, v.v Trong isomaltulose loại đường chức nhiều nhà nghiên cứu ý bời ưu điếm cùa loại đường không gây tác dụng phụ loại đường hóa học có nhiều lợi ích cụ thể cho thể người với số đặc tính ưu việt Đặc biệt gần người ta chứng minh isomaltulose tốt cho chức cùa não, tăng nhớ Hiện nay, isomaltulose ứng dụng rộng rãi sản xuất thực phẩm dược phẩm Đi đầu sán xuất sàn phấm tập đoàn Siidzucker Đức nhà sán xuất đường lớn cùa châu Âu Ngoài ra, Cerestar (thuộc tập đoàn Cargill) Shin Mitsui (Nhật) công ty lớn sản xuất isomaltulose Isomaltulose công nghiệp sản xuất từ sucrose qua phán ứng đồng phân hố bời enzyme sucrose isomerase Cơng nghệ sản xuất isomaltulose phổ biến giới sử dụng tế bào cố định ProtơminobaCter rubturn Nhận thấy tính thực tiễn đó, với mong muốn nâng cao hiệu suất chuyển hóa giâm chi phí sàn xuất isomaltulose từ đường mía (sucrose) Việt Nam quốc gia có nguồn nguyên liệu đường sucrose dồi Vậy nên đề tài tập trung "Nghiên cún điểu kiện chuyến hóa sucrose thành isomaltulose nhờ vi sinh vật" Trương Thị Tú Anh - 1302 Nội dung nghiên cứu: - Chọn chúng có hiệu suất chuyển hóa sucrose thành isomaltulose với hiệu suất 85-90% - Điều kiện chuyến hóa sucrose thành isomaltulose - Xây dựng qui trình sàn xuất isomaltulose phịng thí nghiệm Mục tiêu: Sàn xuất đường hệ - Isomaltulose từ đường sucrose (đường mía) cách sư dụng chế phẩm enzyme sucrose isomerase sinh từ chùng vi khuẩn phân lập Việt Nam Thư viện Viện Đại học Mờ Hà Nội Trương Thị Tú Anh - 1302 Do đó, chúng lơi lựa chọn nghiên cứu chùng có tiềm chúng chùng có sinh enzyme cao bao gồm chủng: ISB8, ISB10, ISB11, ISB19, ISB36 Các chúng lựa chọn đại diện cùa nhóm khác nhau: ISB8 ISB19 thuộc nhánh cùa nhóm Klebsiella sp ISB36 thuộc nhóm Klebsiella singaporensis ISB11 thuộc nhóm Kosakonia cowanii ISB10 thuộc nhóm Kosakonia sp 3.2 Đặc điếm hình thái phân loại vi khuân Các chùng vi khuẩn có khả chuyến hóa sucrose thành isomaltulose lựa chọn kháo sát (ISB8, ISB10 ISB11, ISB19, ISB36 CBS) môi trường PCA Chúng ựến hành chụp ảnh hình thái nhuộm gram để quan sát tế bào Hình ảnh khuẩn lạc mơ tả hình Trương Thị Tú Anh - 1302 32 Hình Hình thái khuấn lạc tế bào chùng chúng vi khuấn Bảng Hình thái tế bào chúng lựa chọn kháo sát Tên chủng Tinh thái tế bào Que ngăn Khuấn lạc to, đường kính 2-3mm, mép Gram (-) khơng trịn đều, nhẵn bóng, nhầy Que ngắn Khuẩn lạc to, đường kính 2-2,5mm, mép Gram (-) trịn đều, nhẵn bóng Que ngắn Khuấn lạc có đường kính l,5-2mm, mép Gram (-) trịn đều, dầy :SB8 :sb Tinh thái khuẩn lạc 10 SB 11 Trương Thị Tú Anh - 1302 33 Que ngắn, Khuấn lạc to, có đường kính 2-3mm, mép trịn đều, dầy bề mặt nhằn SB 19 Gram (-) bóng Que ngấn, Khuẩn lạc to, đường kính 2-3mm trịn Gram (-) đều, nhẵn bóng, nhầy dầy Que ngăn, Khuấn lạc to, đường kính 1,5-2tnm, trịn Gram (-) đều, nhẵn bóng, nhầy, dẹt SB 36 DBS 574.77 Từ hình có thề thấy tất chúng vi khuẩn chuyển hóa đường sucrose thành đường isomaltulose lựa chọn có hình dáng khuấn lạc tế bào tương đồng Tất cá chúng vi khuẩn Gram (-), khuấn lạc trịn đều, nhẵn bóng có hình thái tế bào dạng que ngan hình thái, cắc chủtag cằ thể dược chia làm nhóm, khác biệt lớn nằm chỗ: chủng ISB8 có màng nhầy nhớt nhiều, chúng ISB19 ISB36 có màng nhầy, cịn chúng ISB10 ISB11 khơng có màng nhầy Ve màu sắc, chùng ISB8 khuẩn lạc màu trắng ngà, ISB19 ISB36 khuẩn lạc màu trắng trong, chủng ISB10 ISB11 khuẩn lạc màu vàng 3.3 Điều kiện chuyển hóa sucrose thành isomaltulose Trong nghiên cứu chúng tơi lựa chọn yếu tố cơng nghệ ánh hưởng tới phân ứng enzyme đế khảo sát Nội dung phần bao gồm kết quâ thời gian chuyến hóa, ảnh hướng nhiệt độ, ănh hường pH ảnh hường nồng độ chất Trương Thị Tú Anh - 1302 34 3.3.1 Thời gian chuyển hóa Đề đánh giá thời gian chuyến hóa, tơi có tham khảo báo trước thấy sucrose isomerase đạt hiệu suất chuyển hóa tối đa sau 20 Trong nghiên cứu với chúng LX3 thuộc nhóm Klebsiella sp cho thấy chủng LX3 sàn xuất isomaltulose nhanh đạt đen mức tối đa sau nuôi cấy nồng độ đường môi trường 10%, tìr đến 22 isomaltulose khơng chuyền hóa thêm [5] Tương tự chúng tơi thiết kể thí nghiệm kháo sát lấy mẫu thời điềm: Oh, Ih 2h,3h,4h,5h,6h,12h,24h Kết quà trình bày hình Hình Thí nghiệm khảo sát theo thời gian lấy mẫu thời điếm: Oh, Ih, 2h,3h,4h.5h.6h,12h,24h Có the thấy chúng hoạt động mạnh vòng Các chủng ISB10, ISB11, CBS phản ứng nhanh chi đạt Trương Thị Tú Anh - 1302 35 50% nồng độ đường chuyển hóa chủng ISB8, ISB19, ISB36 phải khoảng đạt 50% Sau chùng gần đạt hiệu suất tối đa sau chuyển hóa chậm dần Ờ 12h nồng độ sàn phẩm có giảm nhẹ đến kết thúc q trình chuyển hóa sau 24h kết đo cho thấy chủng chuyên hóa hết đường Cuối chúng có hiệu suất chuyền hóa cao ISB11 chùng thấp ISB36 Từ kết quâ thu được, nhận thấy trình chun hóa sucrose thành isomaltulose nhanh vào khoảng đàu, sau từ từ chậm lại Chuyến hóa isomaltulose đạt 50% vào khống 1-2 Ket q phù hợp với nghiên cứu trước đó, chúng hoạt động mạnh đầu đạt hiệu suất tối đa sau 20 [5], 3.3.2 Anh hưởng cứa pH q trình chuyến hóa Các pH tiến hậ,'pổ *5, pH 6, pH 7, pH Kết trình bày hình 10 Trưong Thị Tú Anh - 1302 36 Hình 10 Thí nghiệm khảo sát ảnh hướng pH pH 3, pH pH 5, pH 6, pH 7, pH Kết thí nghiệm cho thấy hoạt động chuyến hố sucrose thành isomaltulose cúa chủng kháo sát nhạy căm với thay đồi pH Trong khoảng pH 3-4 nồng độ chuyền hóa thấp chi 1/3 nồng độ chuyến hóa hoạt động pH tối ưu Chúng hoạt động mạnh khoảng pH 4-5, khoáng pH 5-6 có nồng độ có tăng nhẹ Khoảng pH 6-7 ISB10 ISB11 giảm nồng độ Trong khoảng pH 7-8, hầu hết chùng giám nồng độ đường Vì khoảng pH - pH 7, enzyme sinh isomaltulose hoạt động ổn định hiệu Trương Thị Tú Anh - 1302 37 3.3.3 Anh hưởng nhiệt độ q trình chuyến hóa Các nhiệt độ tiến hành khảo sát bao gồm 20°C, 30°C, 40°C, 50°C, 60°C, 70°C Kết quà trình bày hình 11 Hình 11 Thí nghiệm khâo sát ánh hường nhiệt độ bao gồm 20°C 30°C, 40°C, 50°C, 60°C, 70°C Tại giá trị nhiệt độ thấp 20°C 30°C enzyme sucrose isomerase hoạt động với hoạt tính thấp Hoạt tính tăng mạnh nhiệt độ 40°C Đối với chủng CBS khảo sát nhiệt độ 20°C, 30°C, 40°C nồng độ cao chùng khác khác.Khi kháo sát 50°C nồng độ đường tạo thành không thay đồi đáng kể, giữ mức cao trừ chủng CBS ISB8 bắt đầu giãm nồng độ Tuy nhiên nhiệt độ tiếp tục tăng lên 60°C nồng độ đường tạo giảm mạnh Tại 70°C, gần khơng cịn q trình chun hố sucrose thành isomaltulose Có thê thấy enzyme sucrose isomerase cùa chủng gan Trương Thị Tú Anh - 1302 38 bị ức chế nhiệt độ phản ứng khoảng 50°C Và dải nhiệt độ thích hợp cho hoạt động tống hợp isomaltulose tìr 40°C đến 50°C 3.3.4 Anh hưởng nồng độ CO' chất Chúng khảo sát với nồng độ chất bao gồm 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% Kết trình bày hình 11 Hình 12 Thí nghiệm kháo sát với nồng độ chất bao gồm: 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% Theo kết tăng nồng độ chất từ 10% đến 60% sucrose lượng sàn phấm tạo thành tăng lên Các chủng vi khuấn kháo sát có chuyển hóa tốt nồng độ chất cao 60% Nồng độ sucrose gắn liền với động lực sàn xuất isomaltulose điều quan trọng cơng nghệ sản suất cơng nghiệp Nếu q trình tống hợp isomaltulose vần đạt hiệu hoạt động nồng độ sucrose cao, Trương Thị Tú Anh - 1302 39 công nghiệp nhiều lợi hạn chế tạp nhiễm ức chế protease có thề làm giảm tồng hợp isomaltulose [2] Điều phù hợp với nghiên cứu sản xuất isomaltulose với chúng p.rubrum cố định alginate từ báo trước tham khảo [4].Nghiên cứu cho thấy nồng độ sucrose 65% -70% phù hợp cho mục đích cơng nghiệp Munir (1983) [7] cấp bang sáng che quy trình cơng nghiệp cho sán xuất isomaltulose đề nghị sử dụng 40-75% Từ số liệu DNS nồng độ đường khứ già thiết q trình chuyến hóa sucrose thành isomaltulose theo phản ứng hình Từ mol sucrose sau chuyên hóa tạo thành mol isomaltulose Vì hiệu suất chun hóa nồng độ đường khử thực tế chia cho nồng độ đường khử lý thuyết (isomaltulose) Ket quà biêu diễn hình 13 Hình 13 Hiệu suất chuyến hóa sucrose thành isomaltulose Theo lí thuyết lượng isomaltulose sản phẩm tạo thành lượng sucrose ban đầu Nhưng hình 13 tất cá chủng đạt Trương Thị Tú Anh - 1302 40 hiệu suất chuyển hóa cao 100% Điều cho thấy đường sucrose khơng chi chun hóa theo Hình mà có thê chuyên hóa có thêm sàn phàm phụ trehalulose, glucose fructose Điều cần chúng tơi cịn cần thời gian nghiên cứu khảo sát thêm thời gian tới Từ kết nghiên cứu thấy chùng tham gia khảo sát có tiềm ứng dụng cho sàn suất isomaltulose công nghiệp 3.4 Quy trình sản xuất isonialtulose phịng thí nghiệm Dựa kết quà nghiên cứu đề xuất quy trình kỹ thuật sản xuất isomaltulose từ sucrose phịng thí nghiệm Hình 14 Quy trình cơng nghệ sản xuất isomaltulose từ sucrose Trương Thị Tú Anh - 1302 41 Thuyết minh quy trình Lên men tao sinh khối - Nhân giống sơ cấp từ môi trường PCA sang môi trường SPY (sucrose 4%, peptone I %, cao nam men 0.4%, pH 7) Nhân giống thứ cap mơi trường SPY theo tý lệ tích cấp giống 1:20 - Lên men 30°C, lắc 150rpm 24h Thu hồi sinh khối vi khuân - Ly tâm 5000 vòng 30 phút sử dụng máy ly tâm đìa đế loại canh trường thu sinh khối Chuyến hóa sucrose thành isomaltulose - Chuyển sinh khối vào dịch đường sucrose 60%, pH - Tiến hành phán ứng 40°C, lắc 150rpm 24 Thu hồi dich dường sau chuyến hóa học Mờ Hà Nội Ly tâm 5000 vòng 30 phút sử dụng máy ly tâm đĩa để loại sinh khối thu hồi canh trường Trương Thị Tú Anh - 1302 42 4.1 KÉT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ Kết luận Từ trình nghiên cứu kháo sát chủng có khả chuyền hóa sucrose thành isomaltulose Chúng tơi đưa kết luận sau: - Đã khảo sát 23 chủng phân lập có ISB10 thuộc nhóm Kosakonia sp ISB11 thuộc nhóm Kosakonia cowanii thuộc nhóm chúng với chúng cơng nghiệp CBS 574.77 Từ chọn chủng đại diện nhóm khác nhau: ISB8 ISB 19 thuộc nhánh cùa nhóm Klebsiella sp ISB36 thuộc nhóm Klebsiella singaporensis ISB11 thuộc nhóm Kosakonia ĨCD yiên Viên ISB110A thuộc nhóm Koakonia sp Đại học Mở Hà Nội - Sau kháo sát thời gian chuyển hóa khác thấy rang sau đầu chủng đạt gần hết q trình chuyển hóa, điều tương đồng với công bố trước (đạt hiệu suất chuyển hóa tối đa sau 20 giờ) - khoảng pH 5-7 enzyme sinh isomaltulose hoạt động ồn định hiệu suất chuyến hóa cao - Nhiệt độ thích hợp cho hoạt động tổng họp isomaltulose từ 40°C đến 50°C - Các chủng vi khuẩn khảo sát hoạt động tốt nồng độ đường cao 60% - Đã xây dựng qui trình sản xuất isomaltulose phịng thí nghiệm dựa thơng số khảo sát Trương Thị Tú Anh - 1302 43 4.2 Kiến nghị Nếu tiếp tục nghiên cứu đề tài chúng tơi có số kiến nghị: - Nghiên cứu thêm pH khoảng khoáng pH5-7 Mờ rộng nghiên cứu thêm pH thấp pH cao - Tiếp tục nghiên cứu dải nhiệt độ 40°C-50°C đế biết nhiệt độ thích hợp - Mở rộng nghiên cứu nồng độ chất nồng độ cao 60% - Thử nghiệm kết tinh đường - Nghiên cứu sàn xuất quy mô lớn Thư viện Viện Đại học Mở Hà Nội Trương Thị Tú Anh - 1302 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Nguyền Thanh Thúy, Nguyền Thị Hoa Mai, Đinh Thị Mỹ Hằng, Vũ Nguyên Thành "Công nghệ sàn xuất Isomaltulose từ sucrose sử dụng vi khuẩn Enterobacter sp ISB-25" (tạp chí Khoa học Cơng nghệ tập 51 số năm 2013) Tài liệu Tiếng Anh Bucke, c., Cheetham, P.S.J., (1982) Production of Isomaltulose US Patent No 4359531 Hashimoto, H., Yamada, K., Yoshimura, J., 1987 Glucosylation of methyl-b-Darabinofuranosidase with 60 chloro-60-deoxysucrose and immobilized Protaminobacter rubrum Biotechnology Letters 9, 849- Thứ vien vien Đại nọc Mo' Ha XỰ1 854 Li N, Zhang D, Zhang LH, Swaminathan K (2003) Expression, crystallization and preliminary X-ray analysis of isomaltulose synthase (Pall) from Klebsiella sp LX3 Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 59, 150-151 Li X, Zhao c, An Q, Zhang D Substrate induction of isomaltulose synthase in a newly isolated Klebsiella sp LX3 J Appl Microbiol (2003), 95, 521-527 Lina BA, Jonker D, Kozianowski G Isomaltulose (Palatinose): a review of biological and toxicological studies Food Chern Toxicol (2002)40, 1375-1381 Trương Thị Tú Anh - 1302 45 Mu w, Li w, Wang X, Zhang T, Bo J (2014) Current studies on sucrose isomerase and biological isomaltulose production using sucrose isomerase Appl Microbiol Biolechnol DOI 10.1007/s00253-014-5816- Munir, M., (1983) Verfahren zur Herstellung von Isomaltulose (6-O-aDglucopyranosido D fructose) mit Hilfe von immobilisierten bakterienzellen Deutsches Patentamt DE 3213107 Al Protaminobacter rubrum Biotechnology Letters 9, 849-854 Sentko A, Bernard J (2011) Isomaltulose In: O'Brien-Nabors L (ed) Alternative sweeteners 4th edn CRC Press, Georgia 10-Tsuji, Y., Yamada, K., Hosoya, N., Moriuchi, s„ (1986) Digestion and absorption of sugars and sugar substitutes in rat small intestine Journal of Nutritional Science and Vitaminology 32, 93-100 l.Weidenhagen R., Lorenz, s.;(1957), Palatinose (6-alpha-Glucopyranosido-fructofuranose), ein neues bakterielles Umwandlung-sprodukt der Saccharose Zcitschrift fu r die Zuckerindustrie 7, 533-534; und Angcwandte Chemic 69, 641 12.Yamada, K., Shinohara, H„ Hosoya, N.,(1985) Hydrolysis of 1-0- alpha-d-glucopyranosyl-d-fructofuranose (Trehalulose) by rat intestinal sucrase-isomaltase complex Nutrition Reports International 32, 1211- 1220 Trưong Thị TÚ Anh - 1302 46 ... hóa sucrose thành isomaltulose nhờ vi sinh vật" Trương Thị Tú Anh - 1302 Nội dung nghiên cứu: - Chọn chúng có hiệu suất chuyển hóa sucrose thành isomaltulose với hiệu suất 85-90% - Điều kiện. .. có lẽ đóng vai trị giúp vật chù cạnh tranh giành nguồn dinh dưỡng với vi sinh vật khác môi trường giàu sucrose bời phần lớn vi sinh vật khă sử dụng isomaltulose Ngồi ra, isomaltulose cịn có khả... Thu hồi sinh khối vi khuân - Ly tâm 5000 vòng 30 phút sử dụng máy ly tâm đìa đế loại canh trường thu sinh khối Chuyến hóa sucrose thành isomaltulose - Chuyển sinh khối vào dịch đường sucrose