VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Đề tài NGHIÊN củu CHỦNG VI KHUẤN CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG VI KHƯÁN Vibrio GÂY BỆNH CHO TÔM Nguôi hướng dẫn TS Kiều Thị Quỳnh Hoa Sinh viên.
VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TÓT NGHIỆP Đề tài NGHIÊN củu CHỦNG VI KHUẤN CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG VI KHƯÁN Vibrio GÂY BỆNH CHO TƠM Ngi hướng dẫn : TS Kiều Thị Quỳnh Hoa Sinh viên thực : Nguyễn Thị Kim Dung Lóp : 13-02 Hà Nội-2017 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI NGHIÊN củu CHỦNG VI KHUÁN CÓ KHẢ NĂNG KHÁNG VI KHUẨN Vibrio GÂY BỆNH CHO TƠM Ngi hướng dẫn : TS Kiều Thị Quỳnh Hoa Sinh viên thực : Nguyễn Thị Kim Dung Lóp : 13-02 Hà Nội-2017 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, em xin gửi lời cám ơn tới thầy cô giảo Khoa Công nghệ sinh học, Viện Đại học Mở Hà Nội cho em hội học tập với giảng hay nhiệt tình, tận tình hướng dan chi bão em thời gian học tập trường Em xin bày tỏ lịng biết OTÌ chân thành đến TS Kiêu Thị Quỳnh Hoa, Trường phòng Vi sinh vật dầu mó, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình hướng dan, dìu dắt, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực tập làm luận văn tốt nghiệp Em xin gửi lời cám ơn tới tập thê cán Phịng Vi sinh vật dầu mỏ, Viện Cơng nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình giúp đỡ em hồn thành luận văn Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn tới gia đình, bạn bè người thân bên em, ùng hộ, động viên khích lệ em suốt q trình hục tập để em có kết tốt ngày hơm Hà Nội, ngày 10 tháng 04 năm 2017 Sinh viên Nguyễn Thị Kim Dung MỤC LỤC CÁC CHŨ VIẾT TẤT TRONG LUẬN VÀN DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG MỎ ĐÀU 10 PHÀN I : TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tình hình ni tơm giới Việt Nam 1.1.1 Tình hình ni tơm trơn giới 1.1.2 Tình hình ni tơm Việt Nam .4 1.2 Các yếu tố ảnh hưởng tới suất nuôi tôm 1.2.1 Mật độ giống 1.2.2 Các yếu tố vật lý hóa học 1.2.3 nhiễm nguồn nước 1.3 Vi sinh vật gây hại nước nuôi tôm 1.3.1 Vi sinh vật gây hại trực tiếp cho tôm ❖ Vi rút gây bệnh cho tôm 13 ❖ Nấm gây bệnh cho tôm 13 ❖ Ký sinh trùng gây bệnh cho tôm 13 1.3.2 Tảo vi khuân gây hại gián tiếp cho tôm 13 1.4 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn kháng Vibrio gây bệnh cho ni tơm 14 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 1.4.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn kháng Vibrio gây bệnh cho tôm Việt Nam 15 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cúu 16 2.1 VẬT LIỆU 16 2.1.1 Chúng vi khuấn nghiên cứu 16 2.1.2 Hóa chất 16 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Môi trường nghiên cứu 17 2.2.2 Phương pháp phân lập vi khuấn có kháng Vibrio 17 2.2.3 Phương pháp xác định hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào, xác định Gram hình thành bào tử vi khuẩn nghiên cứu 18 2.2.4 Phương pháp bão quăn giông vi khuân 19 2.2.5 Xác định phát triển vi khuẩn theo mật độ quang 19 2.2.6 chọn Phương pháp đánh giá kháng Vibrio cùa vi khuấn lựa 19 2.2.7 Phương pháp phân loại vi khuẩn kháng Vibrio phân tích trình tự gen 16S rRNA 20 2.2.8 Phương pháp đánh giá yếu tố ảnh hường đến khả kháng Vibrio vi khuẩn lựa chọn 20 PHẦN 3: KÉT QUẢ 22 3.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc tế bào vi khuẩn kháng Vibrio 22 3.2 Lựa chọn chủng vi khuân có khả kháng Vibrio 23 3.2 Phân loại chủng vi khuẩn nghiên cứu phân tích trinh tự gen 16S rRNA 26 3.3 Động thái sinh trưởng khả kháng Vibrio chủng vi khuấn B amyloliquefaciens AH-VT3-6 26 3.4 Ánh hướng cùa yếu tố đến kháng V parahaemolyticus chúng vi khuan B amyloliquefaciens AH-VT3-6 29 3.4.1 Ảnh hưởng nhiệt độ 29 3.4.2 Ảnh hưởng pH 30 3.4.3 Ảnh hưởng NaCl 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 CÁC CHỮ VIẾT TẢT TRONG LUẬN VĂN FAO Tổ chức Lương thực Nông nghiệp Liên Hiệp Quốc GOAL Liên minh Ni thúy sản tồn cầu EU Liên minh nước Châu Âu BOD Nhu cầu oxy sinh học HKTS Hiếu khí tống số vsv Vi sinh vật DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Sản lượng tơm Việt Nam (2012-2014) Hình 1.2 Hình thái tế bào vi khuẩn Vibrio spp kính hiến vi điện tú' quét (SEM) 10 Hình 1.3 Biếu cùa tơm bị bệnh EMS 11 Hình 3.1: Hình thái khuẩn lạc chúng vi khuấn AH-VT3-6 môi trường HKTS 25 Hình 3.2: Hình thái tế bào chủng AH-VT3-6 kính hiến vi quang học Olympus (Nhật) (1000 x) 25 Hình 3.3: Chủng AH-VT3-6 sinh trưởng phát triển sau sốc nhiệt 26 Hình 3.4: Sự sinh trường khà kháng V parahaemolyticus cùa chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 .27 Hình 3.5: Khả đối kháng với V parahaemolyticus cùa chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 môi trường thạch HKTS 27 Hình 3.6: Sự sinh trường khả kháng V vulnificus cùa chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 28 Hình 3.7: Khả đối kháng với V vulnificus chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 mơi trường thạch HKTS 28 Hình 3.8: Sự sinh trưởng khả kháng V parahaemolyticus chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 nhiệt độ khác 29 Hình 3.9: Ánh hướng cùa nhiệt độ tới sinh trưởng kháng V parahaemolyticus chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 30 Hình 3.10: Sự sinh trưởng kháng V parahaemolyticus chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 pH khác 31 Hình 3.1 ỉ: Ánh hưởng pH tới sinh trưởng khả kháng V parahaemolyticus chùng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 31 Hình 3.12: Sự sinh trưởng khả kháng V parahaemolyticus chủng AH-VT3-6 nồng độ NaCl khác .33 Hình 3.13: Ảnh hướng cùa nồng độ NaCl tới sinh trướng kháng V parahaemolyticus cúa chúng B amyloUquefaciens AH-VT3-6 33 DANH MỤC BẢNG Báng 3.1: Các chủng vi sinh vật thu từ mẫu bùn nước Thanh Hóa 22 Báng 3.2 Các chúng vi sinh vật có khả kháng Vibrio 24 MỞ ĐẦU Ngành thúy sàn nói chung ngành ni tơm nói riêng có vị trí đặc biệt quan trọng chiến lược phát triến kinh tế - xã hội nước ta Trong năm qua sản xuất thủy sân đạt thành tựu đáng kế góp phần tăng trường GDP nước Năm 2016, tổng giá trị kim ngạch xuất tính riêng ngành tơm 3,1 tì USD tăng khoảng 4% so với năm 2015, đưa tổng giá trị xuất thủy sản nước cán đích ti USD Tuy nhiên, ngành ni tơm gặp phải vấn đề bất cập như: ô nhiễm nước nuôi tôm nước thãi dư thừa thức ăn, chất hữu dẫn đến xuất vi sinh vật gây bệnh làm tôm chết hàng loạt Các vi sinh vật (VSV) yếu gây bệnh cho tôm phải kê đến vi rát, vi khuấn, nguyên sinh động vật, ký sinh trùng Trong đó, vi khuẩn Vibrio số vsv gây bệnh nguy Hầu tất cá loài động vật thúy sán ni nước lợ mặn bị nhiễm chịu tác hại bệnh vi khuẩn Vibrio gây Nhóm vi khuấn yếu tố kìm hãm phát triển mờ rộng sán xuất ni trồng thủy sản nói chung ni tơm nói riêng Chúng gây bệnh nguy hiểm bệnh phát sáng ấu trùng tôm, bệnh nhiễm khuẩn hoại tử gan tụy tơm Vì vậy, việc nghiên cứu vi khuẩn kháng vi khuân gây bệnh cho tơm nói chung kháng Vibrio nói riêng giúp nâng cao sán lượng tôm cần thiết Xuất phát từ nhu cầu tìm kiếm chúng vsv hữu ích ức chế phát triển cùa vi khuấn gây bệnh cho tôm, đảm bảo cân môi trường sinh thái giúp nâng cao sán lượng tôm thương phàm, đề tài luận văn: “Nghiên cừu chủng vi khuân có kha kháng vi khuẩn Vibrio gây bệnh cho tôm" tiến hành Mục tiêu đề tài nhằm lựa chọn chúng vi khuân kháng Vibrio gây bệnh cho tôm nhằm giái khó khăn cúa ngành ni trồng thúy sản nói chung ngành ni tơm cơng nghiệp nói riêng ❖ Mục tiêu nghiên cứu: - Lựa chọn chủng vi khuẩn kháng Vibrio gây bệnh cho tôm - Xác định yếu tố ánh hướng đến khà kháng Vibrio cứa chúng vi khuẩn lựa chọn - Đánh giá kháng Vibrio cùa chúng vi khuấn lựa chọn điều kiện phù hợp ❖ Nội dung nghiên cứu: - Phân lập tuyên chọn sơ chung vi khn có khả kháng vi khn gây bệnh Vibrio - Phân loại chúng vi khuẩng kháng vi khuân Vibrio lựa chọn - Nghiên cứu yếu tố ảnh hướng đến kháng Vibrio cứa chúng vi khuấn lựa chọn - Đánh giá kháng Vibrio chủng vi khuấn lựa chọn với điều kiện nuôi cấy phù họp Bảng 3.2 Các chủng vi khuẩn có khả kháng Vibrio Chúng vi khuấn Đường kính vịng kháng khn (mm) V parahaemolyticus V vulnificus AH-VT1-I 15 17 AH-VT-12 0 AH-VT1-3 13 14 AH-VT1-4 0 AH-VT1-5 0 AH-VT1-7 0 AH-VT2-6 11 11 AH-VT3-6 24 25 AHX-6 15 16 AHX-7 0 AH-B-1 0 AH-B-2 0 AH-B-3 0 AH-B-4 11 12 AH-B-5 10 12 AH-B-6 0 AH-B-7 0 Từ 17 chủng vi khuẩn phân lập ao ni tơm Hoằng Phụ, Hoang Hóa, Thanh Hóa, có chúng vi khuấn có khả kháng Vibrio Trong đó, chủng AH-VT3-6 có kháng Vibrio tốt Đường kính vịng kháng khuấn tạo nghiên cứu đối kháng cúa chủng với hai chùng V parahaemoỉytỉcus V vulnificus 24 25 mm Vì vậy, chúng tơi chọn chủng vi khuấn AH-VT3-6 cho thí nghiệm Chủng AH-VT3-6 chúng vi khuấn Gram (+) bắt màu xanh tím với thuốc nhuộm gram Chùng vi khuấn tiến hành xác định khả hình thành bào tứ sốc nhiệt 80°C 15 phút Kết sau sốc 24 nhiệt cho thấy, chúng AH-VT3-6 mọc môi trường thạch đĩa sau nuôi cấy 30°C 24-48 Điều chứng tỏ chủng AH-VT3-6 chúng Gram (+), có hình thành bào tử Hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào kết sốc nhiệt cùa chùng AH-VT3-6 minh họa Hình 3.1, 3.2 3.3 Hình 3.1: Hình thái khuấn lạc chủng vi khuẩn AH-VT3-6 mơi trường HK.TS Hình 3.2: Hình thái tế bào chủng AH-VT3-6 kính hiến vi quang học Olympus (Nhật) (1000 x) 25 Hình 3.3: Chúng AH-VT3-6 sinh trướng phát triển sau sốc nhiệt 3.2 Phân loại chủng vi khuẩn nghiên cứu phân tích trinh tựgen 16S rRNA Đe xác định vị trí phân loại, chủng vi khuan AH-VT3-6 phân tích trình tự 16S rDNA so sánh trình tự thu với GenBank đế tìm nhũng lồi có trình tự tương đồng với chủng nghiên cứu Kết cho thấy, trình tự 16S rDNA cúa chúng AH-VT3-6 tương đồng 99% với loài Bacillus amyloliquefaciens Vậy chủng vi khuân AH-VT3-6 ký hiệu lại B amyloliquefaciens AH-VT3-6 3.3 Động thái sinh trưởng khả kháng Vibrio cua chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AH-VT3-6 Khá kháng Vibrio cùa vi khuẩn khác thời điếm khác không giống Vì vậy, chúng tơi tiến hành nghiên cứu thời điểm mà chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 kháng Vibrio tốt Chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 nuôi lắc 30°C, 200 vịng/phút Sau đó, tiến hành lấy mầu theo thời gian đe đo mật độ tế bào bước sóng 600 nm đồng thời kiếm tra hoạt tính kháng V parahaemolyticus vù 26 V vulnificus theo thời gian tương ứng Kết q thí nghiệm thể Hình 3.4, 3.5, 3.6 3.7 I 12 16 20 22 24 28 32 Thời gian (giờ) Hình 3.4: Sự sinh trưởng khả kháng V parahaemolyticus chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 Hình 3.5: Khá đối kháng với V parahaemolyticus chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 môi trường thạch HKTS Hình 3.4 3.5 cho thấy chùng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 có khả kháng V parahaemolyticus thời điêm khác không giông Sinh khối cùa chùng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 đạt cực đại với mật độ tế bào OD 2,72 sau 22 nuôi cấy (Hình 3.4) Khả đối kháng V 27 parahaemoìyticus, tốt sau 20 - 24 nuôi cấy với đường kính vịng kháng khuẩn cao hon so với thời điểm khác, 23, 25, 22 mm Như vậy, kết luận chùng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 có khả sinh trướng kháng V parahaemoỉyticus tốt sau 22 nuôi cấy với đường kính vịng kháng khuẩn lên tới 25 mm chi số OD 600 nm đạt 2,72 Thời gian (giờ) Hình 3.6: Sự sinh trướng kháng V vulnificus chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 Hình 3.7: Khá đối kháng với K vulnificus cứa chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 mơi trường thạch HKTS 28 Hình 3.6 3.7 cho thấy, chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 có kháng V vulnificus tốt sau 20 - 24 nuôi cấy với chi số OD 600nm đạt từ 2,6 - 2,72 đường kính vịng kháng khuẩn tạo tương ứng từ 20 - 24 mm Trong đó, vịng kháng khuẩn tạo lớn (24 mm) sau 22 nuôi cấy Qua động thái sinh trướng kháng V parahaemolyticus V vulnificus cùa chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6, thời điểm nuôi cấy sau 22 lựa chọn đế tiến hành thí nghiệm 3.4 Ảnh hưởng cua yếu tố đến khả kháng V parahaemolytìcus chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AH-VT3-6 3.4.1 Ảnh hưởng nhiệt độ Đe đánh giá ảnh hưởng nhiệt độ tới sinh trường khả kháng V parahaemolyticus, chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 nuôi cấy môi trường HKTS pH với nhiệt độ 20, 30, 37, 45 55°c Chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 xác định sinh khối khà kháng chủng V parahaemoỉyticus theo thời gian (từ đến 32 giờ) nhiệt độ khác Ket quà thể Hình 3.8 Hình 3.9 Hình 3.8: Sự sinh trưởng khả kháng V parahaemolyticus cúa chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 nhiệt độ khác 29 Hình 3.9: Ánh hưởng nhiệt độ tới sinh trưởng kháng K parahaemoỉyticus chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 Hình 3.8 3.9 cho thấy chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng tốt dải nhiệt độ 20 - 37°c Ớ dài nhiệt độ trên, chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 bắt đầu sinh trưởng sau nuôi cấy suy thoái sau 24 giờ, mật độ tế bào cao sau 22 với OD 600 nm đo từ 2,6 - 2,72 đường kính vịng kháng V parahaemolyticus tạo từ 23 - 26 mm Trong đó, 30°C chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng mạnh với số OD 600 nm 2,72 đường kính vịng kháng khuẩn tạo lớn 26 mm sau 22 nuôi cấy Như vậy, 30 °C nhiệt độ phù hợp cho chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng kháng vi khuẩn gây bệnh Vibrio Do đó, nhiệt độ lựa chọn cho thí nghiệm 3.4.2 Ảnh hưởng pH Chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 phân lập từ nước ao ni tơm cơng nghiệp ven biến Vì vậy, pH nhân tố quan trọng ánh hường đến sinh trưởng kháng Vibrio cúa chúng Đe đánh giá ảnh hưởng pH tới sinh trường khả kháng V parahaemolyticus, chùng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 nuôi cấy 30 môi trường HK.TS 30°C với giá trị pH = 5, 6, 7, Chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 xác định sinh trưởng kháng vi khuẩn V parahaemolyticus theo thời gian (từ đến 32 giờ) pH khác Kết thể Hình 3.10 3.11 ^■6 ^■7 IKI8 Hình 3.10: Sự sinh trưởng khả kháng K parahaemolyticus chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 pH khác Hình 3.1 ì: Ánh hướng cứa pH tới sinh trưởng kháng K parahaemolyticus cùa chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 31 Kết (Hình 3.10 3.11) cho thấy, chúng Bacillus amyloliquefaciens AH-VT3-6 có thề sinh trưởng kháng V parahaemoỉyticus dải pH rộng từ - Ớ dải pH chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trướng khoảng thời gian từ đến 24 nuôi cấy Khả kháng Vibrio mật độ tế bào cùa chủng cao sau 22 nuôi cấy với chi số OD 600 nm đạt 2,35 - 2,77 đường kính vịng kháng khn đạt từ 13 - 27 mm Trong đó, chùng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng kháng Vibrio mạnh giá trị pH sau 22 nuôi cấy với số OD 600 nm đạt 2,77 đường kính vịng kháng khuẩn tạo 27 mm Như vậy, pH = phù họp cho chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trướng kháng Vibrio Vì vậy, giá trị pH lựa chọn cho thí nghiệm 3.4.3 Ảnh hưởng NaCl Bên cạnh nhiệt độ, pH, nồng độ NaCl yếu tố quan trọng ảnh hướng lớn tới khả sinh trưởng kháng Vibrio chùng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 Đe đánh giá ãnh hưởng nồng độ NaCl tới sinh trưởng kháng Vibrio chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6, chủng nuôi cấy môi trường HKTS 30°C, pH = với nồng độ NaCl 0, 1, 3% Sự sinh trưởng khả kháng V parahaemolyticus chủng B amyloliquefacierts AH-VT3-6 xác định theo thời gian (từ đến 32 giờ) nồng độ NaCl khác Kết Hình 3.12 3.13 32 ^■0% ^■1% n 2% KI 3% —*-0% -*-l% -*-2% —1—3% Thời gian (giờ) Hình 3.12: Sự sinh trướng kháng K parahaemolyticus cúa chúng AH-VT3-6 nồng độ NaCl khác Hình 3.13: Ảnh hưởng nồng độ NaCl tới sinh trường kháng V parahaemolyticus cúa chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 Hình 3.12 3.13 cho thấy chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 có sinh trướng kháng V parahaemolyticus với nồng độ NaCl từ 0- 3% Ở nồng độ NaCl chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng từ đến 24 nuôi cấy Mật độ tế bào đường kính vịng kháng 33 khuấn cùa chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 đạt sau 22 nuôi cấy 2,41 - 2,75 17 - 24mm Trong đó, nồng độ NaCl 1% chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng kháng V parahaemolyticus mạnh sau 22 giời nuôi cấy với chi số OD đạt 2,75 đường kính vịng kháng khuấn 24mm Như vậy, với nồng độ NaCl 1% phù hợp cho chủng vi khuẩn B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng kháng Vibrio 34 KÉT LUẬN - Từ mẫu bùn nước thu ao nuôi tôm Hoằng Phụ, Thanh Hóa, phân lập 17 chúng vi khuân, có chủng vi khuân kháng hai loại Vibrio gây bệnh cho tôm V parahaemolyticus V vulnificus (AH-VT1-1, AH-VT1-3, AH-VT2-6, AH-VT3-6, AHX-6, AH-B-4, AH-B-5) Trong số chúng kháng Vibrio thu được, chúng vi khuẩn AH-VT3-6 có khả kháng V parahaemolyticus V vulnificus tốt sau 22 ni cấy với vịng kháng khuấn 24 25 mm Dựa vào đặc điểm hình thái phân tích trình tự genlóS rRNA chúng vi khuấn AH-VT3-6, xác định chúng AH-VT3-6 thuộc loài Bacillus amyloliquefaciens AH-VT3-6 với độ tương đồng 99 % - Chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng kháng V parahaemolyticus tốt dải nhiệt độ 20 - 37°c, tốt 30°C với số OD 2,72 đường kính vịng kháng khuẩn 26 mm sau 22 ni cấy - Chúng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trường kháng V parahaemolyticus dài pH rộng từ 5-9, tốt pH = với chi số OD đạt 2,77 đường kính vịng kháng V parahaemolyticus 27 mm sau 22 nuôi cấy - Chủng B amyloliquefaciens AH-VT3-6 sinh trưởng kháng V parahaemolyticus với nồng độ NaCl từ - 2%, tốt nồng độ NaCl 1% với số OD đạt 2,75 đường kính vịng kháng V parahaemolyticus 24 mm sau 22 nuôi cấy 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: l Bùi Quang Tề (2003), “Bệnh cùa tơm ni biện pháp phịng trị” Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội, 184 trang Dương Thị Hoàng Oanh, Huỳnh Trường Giang, Nguyễn Thị Kim Liên, (2014): “Mối liên hệ sức khóe tơm biến động quần thể Phytoplankaton ao nuôi tôm thẻ chân trắng thâm canh”, Tạp chí khoa học - Trường đại học cần Thơ Êgrorov N X, (1976), “Thực tập vi sinh vật học”, Nguyễn Lân Dũng dịch (1983) Giáo trình Chẩn đốn nhanh trị bệnh vi khuân, nấm động vật thủy sản nuôi nước - MĐ 04 ( Bộ nông nghiệp phát triền nơng thơn ) Giáo trinh phịng bệnh cho tôm thẻ chân trắng _BỘ nông nghiệp phát triền nông thôn - MĐ 05 ( T16 ) Giáo trình Phịng trị bệnh ấu trùng tơm_ Bộ nơng nghiệp phát triển nông thôn - MĐ 06: Sản xuất giống tơm sú (TI4) Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản (Số 1/2014) Tống quan bệnh nấm động vật thủy sãn_Tạp chí Khoa học 2010: 16b 88-97 (Trường Đại học cần Thơ) 9.T uyển tập hội nghỊMỘt số vấn đề Địa lý học đới bờ biển Việt Nam 10 Võ Thị Thứ, Trương Ba Hùng, Nguyễn Minh Dương, La Thị Nga, Lê Thị Thu Hiền, Phạm Thị Minh Hà, Lê Doanh Toại, Nguyễn Trường Sơn, Lê Trần Vinh, Đào Thị Thanh Xuân, “ Lên men chế phẩm sinh học BioF úng dụng nuôi trồng thủy sản” (8) Tuyền tập hội 36 thảo toàn quốc nghiên cứu ứng dụng khoa học công nghệ nuôi trồng thủy sản Tài liệu tiếng anh 11 Hernandez, D.; Cardcll, E and Zarate, V,(2005) “Antimicrobial activity of lactic acid bacteria isolated from Tenerife cheese: initial characterization of plantaricin TF711, a bacteriocin-like substance produced by Lactobacillus plantarum TF711 Journal of Applied Microbiology” 99:77-84 doi: 10.1111/j 1365-2672.2005.02576.x 12 Lai Thuy Hicn, Do Thu Phuong, Vu phuong Anh, Dang Phuong Nga, Pham Thi Hang, Vuong Thi Nga, Nguyen Ba Tu (2005), “ Application of probiotic for biorcmcdiation of industrial shrimp farming area in Hoang Hoa , Thanh Hoa”, Regional Symposium on Chemical Engineering 2005, pp 311-355 13 Moriarty, D.J.W (1998), “Control of luminous Vibrio sp in penaeid aquaculture ponds” Aquaculture 164:351-358 14 Phillips c J., Smith z., Emblcy M., Proser J, (1999) “ Phylogenetic differeces between particle-associated and plank tonic ammonia oxidizing bacteria of the R-subdivision of the class Proteobacteria in the Northwestern mediterranean sea”, Applied and Environmental Microbiology, 65 (2) ,pp 779-786 15 Renata Albuquerque Costa (2013), '"Escherichia coli in seafood: A brief overview, Advances in Bioscience and Biotechnolog”, 4, 450- 454 16 Surendraraj, A., Thampuran, N and Joseph, T.c, (2010) “Molecular screening, isolation, and characterization of enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 from retail shrimp Journal of Food Protection” 73, 97-103 37 17 Teophilo, G.N.D., Vieira, R.H.S.F., Rodrigues, D.p and Menezes, F.G.R, (2002) “Escherichia coll isolated from seafood: Toxicity and plasmid profiles International Microbiology”, 5, 11-14 doi: 10.1007/s 10123-002-0052-5 18 Wang X.H., Lijun J s., XuHuai s o., “ Application of probities in Aquaculture” Nguồn internet 19.http://www.mard.gov.vn/Pages/news_detail.aspx?NewsId=30272 20.http://vasep.com.vn/l 192/OneContent/tong-quan-nganh.htm 21 http://vascp.com vn/Tin-Tuc/1203_46881/Xuat-khau-tom-phuc-hoitich-cuc-trong-nam-2016.htm 22.https://tongcucthuysan.gov.vn/th%C6%B0%C6%Alngm%E %B A%A i-th%E %BB%A7yS%E %B A%A3n/xu%E %B A%A5t-nh%E %BA%ADpkh%E %BA%A9u/doc-tin/006822/2017-01-10/xuat-khau-tom-nam2016-du-bao-2017 23.http://vascp.com.vn/Tin-Tuc/1082_47636/FAO-San-luong-tomnuoi-the-gioi-nam-2016-giam.htm 24.tuvanthuvsan.net/kv-thuat-nuoi-trong/kv-thuat-nuoi-tom/tong-quan- nuoi-tom-the-chan-trang-tren-the-gioi-va-viet-nam 38 ... Vi sinh vật gây hại trực tiếp cho tôm ❖ Vi khuẩn gây bệnh cho tôm V Vi khuan Vibrio Vibrio nhóm vi khuân gây bệnh trực tiếp cho tơm Vibrio thuộc họ Vibrionaceae, Vibrionales, lóp Gammaproteobacteria,... vi khn có khả kháng vi khuân gây bệnh Vibrio - Phân loại chúng vi khuẩng kháng vi khuân Vibrio lựa chọn - Nghiên cứu yếu tố ảnh hướng đến kháng Vibrio cứa chúng vi khuấn lựa chọn - Đánh giá kháng. .. vi khuân gây hại gián tiếp cho tôm 13 1.4 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn kháng Vibrio gây bệnh cho nuôi tôm 14 1.4.1 Tình hình nghiên cứu giới 14 1.4.2 Tình hình nghiên cứu vi khuẩn kháng