Đang tải... (xem toàn văn)
Họ và tên Nguyễn Thị Thu Hoài Lớp Dược 2 Mã sinh viên 20010524 Môn Thực hành hóa sinh BÁO CÁO THỰC HÀNH BÀI 2 ĐỊNH TÍNH PROTEIN VÀ MỘT SỐ PHẢN ỨNG KẾT TỦA PROTEIN I Phản ứng Biuret xác định liên kết peptid 1 Chuẩn bị Thuốc thử Dung dịch protein trứng khoảng 1% pha loãng 1 lòng trắng trứng với 15 thể tích nước cất, lọc qua vài lần vải gạc, bảo quản ở 4C Khi dùng pha loãng 0,1% Dung dịch gelatin 0,1% trong nước Dung dịch glycin 0,1% trong nước Dung dịch CuSO4 1% trong nước Dung dịch NaOH 10% trong.
Họ tên: Nguyễn Thị Thu Hoài Lớp: Dược Mã sinh viên: 20010524 Mơn: Thực hành hóa sinh BÁO CÁO THỰC HÀNH BÀI 2: ĐỊNH TÍNH PROTEIN VÀ MỘT SỐ PHẢN ỨNG KẾT TỦA PROTEIN I Phản ứng Biuret xác định liên kết peptid 1.Chuẩn bị: Thuốc thử: - Dung dịch protein trứng khoảng 1%: pha lỗng lịng trắng trứng với 15 thể tích nước cất, lọc qua vài lần vải gạc, bảo quản 4C Khi dùng pha loãng 0,1% Dụng cụ: - Ống nghiệm nhỏ, giá - Pipet Pasteur - Quả bóp cao su mL mL - Dung dịch gelatin 0,1% nước - Dung dịch glycin 0,1% nước - Dung dịch CuSO4 1% nước - Dung dịch NaOH 10% nước 2.Cách tiến hành: Ống nghiệm Dung dịch protein trứng 0,1% (giọt) Dung dịch gelatin 0,1% (giọt) Dung dịch glycin 0,1% (giọt) Dung dịch NaOH 10% (giọt) Dung dịch CuSO4 1% (giọt) 3 1 Lắc đều, phản ứng coi dương tính có màu tím rõ rệt Quan sát thay đổi màu ống Kết thí nghiệm Khơng màu Màu tím Ống X Ống X Ống Màu khác (ghi rõ) X Giải thích tượng: Ống 1: Trong Protein trứng có chứa liên kết peptid (do chứa nhiều loại acid amin liên kết với nhau) nên MT kiềm có mặt Cu2+ tạo phức hợp anion có màu tím Ống 2: Trong Gelatin có chứa liên kết peptid (do chứa nhiều loại acid amin liên kết với nhau) nên MT kiềm có mặt Cu2+ tạo phức hợp anion có màu tím Ống 3: Glycin acid amin không chứa liên kết peptid, phản ứng khơng có màu II Xác định điểm đẳng điện protein 1.Chuẩn bị: Thuốc thử vật liệu thí nghiệm: Pha dung dịch đệm acetat có pH=3,6-5,8 Ống số CH3COOH 0,2M (ml) CH3COONa 0,2(ml) pH dung dịch 9,25 0,75 3,6 8,8 1,20 3,8 5 4,75 0,9 9,1 5,6 0,6 9,4 5,8 - Dung dịch tanin 0,1% - Dung dịch albumin trứng 1% (chuẩn bị giống 1) Dụng cụ: - Pipet ml - Ống nghiệm nhỏ 2.Cách tiến hành: Ống nghiệm Dung dịch đệm pH=3,6 (ml) pH=3,8 pH=4,75 pH=5,6 pH=5,8 Dung dịch protein trứng (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Dung dịch tanin 1 1 Lắc Để phút So sánh độ đục ống trước sau cho tanin: Phân biệt mức độ đục (khơng đục, đục ít, nhiều, nhiều) Kết thí nghiệm Khơng đục Đục Đục nhiều Đục nhiều Ống Ống Ống Ống Ống Giả sử sau kết thúc phản ứng ta thấy ống đục nhiều, ống cịn lại đục khơng đục Giải thích tượng: Ống có pH=3,8 có tượng đục nhiều nói cách khác với dung dịch đệm có pH=3,8 làm cho protein tủa mạnh chứng tỏ pH=3,8 gần với giá trị pI (điểm đẳng điện) protein III Phân lập protein phương pháp diêm tích 1.Chuẩn bị: Thuốc thử vật liệu thí nghiệm: - Dung dịch protein trứng: Khuấy kỹ lòng trắng trứng 1000 ml nước cất Lọc qua vài lớp vải gạc (Tương ứng với protein 1%) - Dung dịch (NH4)2SO4 bão hoà - Bột (NH4)2SO4 bão hoà - Bột (NH4)2SO4 mịn - Bột NaCl mịn - Dung dịch CH3COOH 1% ( AcOH 1%) - Thuốc thử Biuret (dd NaOH 10% CuSO4 1%) Dụng cụ: - Ống nghiệm - Pipet ml - Pipet Pasteur - Phễu nhỏ, Giấy lọc 2.Cách tiến hành: Diêm tích albumin globulin NaCl: Bước 1: Trong ống nghiệm: cho ml dung dịch protein trứng 1% Thêm bột NaCl đến bão hoà hoàn toàn (cịn bột khơng tan) Sau vài phút, globulin tủa Bước 2: Lọc bỏ tủa globulin (pha NaCl thấm qua giấy lọc trước lọc) Dịch lại albmin (khơng tủa NaCl bão hồ) Thêm vào dịch lọc giọt acid acetic 1% đun sôi, albumin kết tủa Sau vài phút, lọc loại tủa albumin làm phản ứng Biuret tìm protein dịch lọc Trong ống nghiệm cho: 10 giọt dịch hoà tan 10 giọt thuốc thử Biuret Lắc Quan sát Kết thí nghiệm: Phản ứng âm tính (dung dịch sau phản ứng có màu xanh da trời nhạt) Giải thích tượng: Do trước làm phản ứng Biuret để tim protein ta lọc bỏ hết globulin albumin (2 thành phần chủ yếu cấu tạo nên protein trứng) nên dung dịch sau phản ứng khơng có màu tím phản ứng âm tính Diêm tích albumin globulin (NH4)2SO4 : Bước 1: Trong ống nghiệm: cho 2ml dung dịch protein trứng 1%, thêm 2ml dung dịch sulfat amon bão hoà, globulin tủa Sau phút, lọc để loại tủa globulin Trong dịch lọc cịn lại albumin Thêm bột sulfat amon bão hồ (cịn dư khơng tan), tủa albumin lên Bước 2: Thêm nước cất vào ống nghiệm để làm nồng độ bão hoà sulfat amon Tủa albumin hoà tan trở lại Dùng dung dịch hoà tan tủa làm phản ứng Biuret để tìm protein Trong ống nghiệm cho: 10 giọt dịch hoà tan 10 giọt thuốc thử Biuret Lắc Quan sát Kết thí nghiệm: Phản ứng dương tính dưng dịch sau phản ứng có màu tím Giải thích tượng: Do tủa albumin hoà tan trở lại bước 2, tức dung dich albumin nên sau thực phản ứng Biuret dung dịch có màu tím phản ứng dương tính ... thí nghiệm: Pha dung dịch đệm acetat có pH=3,6-5,8 Ống số CH3COOH 0,2M (ml) CH3COONa 0 ,2( ml) pH dung dịch 9 ,25 0,75 3,6 8,8 1 ,20 3,8 5 4,75 0,9 9,1 5,6 0,6 9,4 5,8 - Dung dịch tanin 0,1% - Dung... albumin (2 thành phần chủ yếu cấu tạo nên protein trứng) nên dung dịch sau phản ứng khơng có màu tím phản ứng âm tính Diêm tích albumin globulin (NH4)2SO4 : Bước 1: Trong ống nghiệm: cho 2ml dung... cất Lọc qua vài lớp vải gạc (Tương ứng với protein 1%) - Dung dịch (NH4)2SO4 bão hoà - Bột (NH4)2SO4 bão hoà - Bột (NH4)2SO4 mịn - Bột NaCl mịn - Dung dịch CH3COOH 1% ( AcOH 1%) - Thuốc thử Biuret