Họ và tên Nguyễn Thị Thu Hoài Lớp Dược 2 Mã sinh viên 20010524 Môn Thực hành hóa sinh BÁO CÁO THỰC HÀNH BÀI 3 CÁC PHẢN ỨNG BIẾN TÍNH PROTEIN I Chuẩn bị thuốc thử và dụng cụ thí nghiệm 1 Thuốc thử và vật liệu thí nghiệm Dung dịch protein trứng không có NaCl Lọc lòng trắng trứng gà qua vải thưa (để loại các chất nhờn) Trộn lẫn một thể tích lòng trắng với 15 thể tích nước cất Trộn kỹ rồi lọc lại sẽ thu được dung dịch protein trứng khoảng 1% Bảo quản ở 40C Dung dịch Acid acetic 1% và 10% Dung dịch N.
Họ tên: Nguyễn Thị Thu Hoài Lớp: Dược Mã sinh viên: 20010524 Mơn: Thực hành hóa sinh BÁO CÁO THỰC HÀNH BÀI CÁC PHẢN ỨNG BIẾN TÍNH PROTEIN I Chuẩn bị thuốc thử dụng cụ thí nghiệm Thuốc thử vật liệu thí nghiệm: - Dung dịch protein trứng khơng có NaCl : Lọc lịng trắng trứng gà qua vải thưa (để loại chất nhờn) Trộn lẫn thể tích lịng trắng với 15 thể tích nước cất Trộn kỹ lọc lại thu dung dịch protein trứng khoảng 1% Bảo quản 40C - Dung dịch Acid acetic 1% 10% - Dung dịch NaOH 10% - Dung dịch NaCl bão hoà (độ hoà tan NaCl 100 C 39,2g; 00 C 35,6g) - Acid nitric đặc, Ethanol 960, Aceton - Dung dịch Acid trichloracetic 10% - Dung dịch Acid sulfosalicylic 20% - Dung dịch CuSO4 1% nước - Dung dịch Pb(CH3COO)2 5% nước Dụng cụ: - Ống nghiệm nhỏ - Pipet 10 ml - Pipet Pasteur - Bơm cao su 1- ml - Giấy lọc Phễu nhỏ II Tiến hành thí nghiệm Biến tính protein nhiệt độ a Tiến hành Ống nghiệm DD protein trứng khơng có NaCl (ml) 1 1 5 CH3COOH 1% ( giọt) CH3COOH 10% ( giọt) DD NaCl bão hoà (giọt) DD NaOH 10% ( giọt) Đun sôi ống nghiệm quan sát tượng b.Kết thí nghiệm Có tủa Ống Ống Ống Ống Ống c Giải thích tượng Khơng tủa x x x x x Ống 1: DD protein trứng khơng có NaCl mơi trường trung tính, đun sơi bị lớp áo nước phần lớp protein có pI nên xuất tủa Ống 2: xuất tủa không nhiều nồng độ acid cao so với dung dịch ống, môi trường acid yếu gây tủa protein Ống 3: xuất tủa nhiều giọt CH3COOH nhiều so với 1ml dd protein trứng, tạo môi trường acid yếu gây tủa protein Ống 4: Giống ống cho thêm chất điện giải NaCl làm trung hịa điện tích tủa xuất nhanh nhiều Ống 5: Khơng có tủa giọt dd NaOH nhiều so với 1ml dd protein trứng nên tạo môi trường kiềm, MT kiềm protein khơng tủa Biến tính protein acid vô mạnh a Tiến hành Tủa protein HNO3 H2SO4 Ống nghiệm Dung dịch protein 0,1% (giọt) 5 HNO3 đặc (giọt) rỏ từ từ vào thành ống để nghiêng H2SO4 đặc (giọt) rỏ từ từ vào thành ống để nghiêng Lắc nhẹ ống nghiệm quan sát tượng sau thêm giọt acid loại vào ống tương ứng b.Kết thí nghiệm Trước cho thêm acid Có tủa Ống x Ống x Khơng có tủa Sau cho thêm acid Tủa tan Tủa không tan x x c Giải thích tượng Trước thêm acid Ống 1: môi trường acid (do tỷ lệ dd protein HNO3 1:1) nên tác dụng acid vơ đậm đặc protein bị kết tủa Ống 2: Tương tự ống có môi trường acid tác dụng H2SO4 đặc protein bị kết tủa Sau cho thêm acid Ống 1: Tủa khơng bị hịa tan dung dịch có chứa HNO3 Ống 2: Tủa bị hịa tan trở lại cho thừa acid H2SO4 Biến tính protein muốn kim loại nặng a Tiến hành Ống nghiệm Dung dịch protein trứng 0,1% (giọt) 10 10 CuSO4 5% (giọt) Pb(CH3COO)2 5% (giọt) Quan sát tạo tủa, sau cho thừa muối vào ống tương ứng tiếp tục quan sát tượng b.Kết thí nghiệm Trước cho thừa muối Có tủa Ống Khơng có tủa Sau cho thừa muối Tủa tan x x Ống x c Giải thích tượng x Tủa khơng tan Trước cho thừa muối Ống ống xuất tủa Ion kim loại nặng có khả gắn vào nhóm chức mạch nhánh acid amin phân tử protein làm phá vỡ cấu trúc không gian gây tủa Sau cho thừa muối Ở hai ống tủa bị tan cho thừa muối kim loại nặng (trừ AgNO3 HgCl2), tủa tan trở lại hấp phụ ion kim loại tạo điện tích dương phân tử protein Biến tính protein dung mơi hữu a Tiến hành Cho vào ống nghiệm : - giọt dung dịch protein trứng 0,1% - 15-20 giọt ethanol 950 Sau cho thêm giọt NaCl bão hịa b.Kết thí nghiệm Đầu tiên dung dịch vẩn đục, sau đs cho thêm NaCl bão hịa tủa protein xuất rõ rệt c Giải thích tượng Protein kết tủa bơng hay bị vẩn đục dung môi hữu (Ethanol dung môi hữu cơ) bị lớp áo nước Cho thêm chất điện giải NaCl để trung hòa điện tích tủa xuất rõ ràng ... acid vơ mạnh a Tiến hành Tủa protein HNO3 H2SO4 Ống nghiệm Dung dịch protein 0,1% (giọt) 5 HNO3 đặc (giọt) rỏ từ từ vào thành ống để nghiêng H2SO4 đặc (giọt) rỏ từ từ vào thành ống để nghiêng...II Tiến hành thí nghiệm Biến tính protein nhiệt độ a Tiến hành Ống nghiệm DD protein trứng khơng có NaCl (ml) 1 1 5 CH3COOH 1% ( giọt) CH3COOH 10% ( giọt) DD NaCl bão hoà... chứa HNO3 Ống 2: Tủa bị hòa tan trở lại cho thừa acid H2SO4 Biến tính protein muốn kim loại nặng a Tiến hành Ống nghiệm Dung dịch protein trứng 0,1% (giọt) 10 10 CuSO4 5% (giọt) Pb(CH3COO)2 5%