Xây dựng quy trình định lượng đồng thời amoxicillin và acid clavulanic bằng phương pháp quang phổ UV-VIS

Nghiên cứu nhằm mục tiêu xây dựng quy trình định lượng đồng thời hỗn hợp hai thành phần amoxicillin và acid clavulanic bằng phương pháp quang phổ. Ứng dụng phương pháp này để thẩm định định lượng đồng thời amoxicillin và acid clavulanic trong viên nén Augmentin.

Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 14 - 2022 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG ĐỒNG THỜI AMOXICILLIN VÀ ACID CLAVULANIC BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV-VIS Nguyễn Chí Tồn* Tào Việt Hà Trường Đại học Tây Đơ * ( Email: nctoan@tdu.edu.vn) Ngày nhận: 01/11/2021 Ngày phản biện: 10/02/2022 Ngày duyệt đăng: 01/3/2022 TÓM TẮT Hiện nay, amoxicillin kết hợp với acid clavulanic chế phẩm sử dụng rộng rãi để điều trị bệnh nhiễm trùng vi khuẩn tiết β - lactamase đề kháng amoxicillin nên phải có phương pháp định lượng đồng thời hai hoạt chất chế phẩm Nghiên cứu nhằm mục tiêu xây dựng quy trình định lượng đồng thời hỗn hợp hai thành phần amoxicillin và acid clavulanic phương pháp quang phổ Ứng dụng phương pháp này để thẩm định định lượng đồng thời amoxicillin và acid clavulanic viên nén Augmentin Phương pháp thực cách sử dụng máy đo quang phở UV-Vis với bước sóng sử dụng phân tích 199 nm 228 nm Kết cho thấy có sự tuyến tính khoảng nồng độ 1,2 - 4,5 mg/l clavulanat kali 4,03 - 15,2 mg/l amoxicillin Phương pháp này thẩm định với tiêu: Độ đặc hiệu, độ với tỷ lệ phục hồi nằm khoảng 97 - 103%, độ lặp lại với RSD < 2%, giới hạn định lượng giới hạn phát amoxicillin 2,01 mg/l 0,61 mg/l; Đối với clavulanat kali 0,6 mg/l 0,18 mg/l, sử dụng phương pháp này định lượng đồng thời hoạt chất amoxicillin và acid clavulanic có viên nén Augmentin đạt theo tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam Từ khóa: Amoxicillin, acid clavulanic, máy quang phở UV-Vis, quy trình định lượng Trích dẫn: Nguyễn Chí Tồn Tào Việt Hà, 2022 Xây dựng quy trình định lượng đồng thời amoxicillin acid clavulanic phương pháp quang phổ UV-Vis Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ 14: 191-202 * Ths Nguyễn Chí Toàn – Giảng viên Khoa Dược và Điều dưỡng, Trường Đại học Tây Đơ 191 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô GIỚI THIỆU Đề kháng kháng sinh vấn đề diễn ngày phức tạp, gây nhiều khó khăn việc điều trị bệnh nhiễm khuẩn Việt Nam nói riêng giới nói chung Để tăng khả điều trị, chế phẩm dược có kết hợp nhiều hoạt chất bào chế Một kết hợp điển hình amoxicillin acid clavulanic (Lê Minh Trí, 2009) Sự phối hợp amoxicillin, kháng sinh họ  - lactam với acid clavulanic, chất ức chế không hồi phục  - lactamase chế phẩm sử dụng rộng rãi để điều trị bệnh nhiễm trùng vi khuẩn sản sinh  - lactamase đề kháng amoxicillin (Trần Đức Hậu, 2007), có nhiều chế phẩm kháng sinh thị trường có kết hợp amoxicillin acid clavulanic, dạng amoxicillin trihydrat clavulanat kali Từ thực tiễn này, cần có phương pháp định lượng đồng thời hoạt chất chế phẩm Phương pháp phổ biến để định lượng đồng thời chế phẩm có kết hợp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Ưu điểm phương pháp có tính đặc hiệu, độ xác cao, cho kết ổn định, nhanh chóng cho việc kiểm nghiệm Tuy nhiên, HPLC có điểm hạn chế phải sử dụng hóa chất, dung mơi có độ tinh khiết cao, thiết bị đắt tiền Đặc điểm tính chất amoxicillin clavulanat kali hai chất có khả hấp thụ ánh sáng vùng tử ngoại, nên sử dụng máy quang Số 14 - 2022 phổ UV-Vis để định lượng đồng thời hai chất Vì mục tiêu nghiên cứu nhằm thử nghiệm xây dựng quy trình định lượng đồng thời hỗn hợp hai thành phần amoxicillin acid clavulanic phương pháp quang phổ Ứng dụng phương pháp xây dựng để thẩm định định lượng đồng thời amoxicillin acid clavulanic viên nén Augmentin PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp nghiên cứu dựa tài liệu “Thẩm định quy trình phân tích đo quang phổ tử ngoại khả - khả kiến UV-Vis” Phụ lục số 8, Sổ tay đăng ký thuốc, ban hành Cục quản lý Dược (Bộ Y tế, 2013) Sử dụng Amoxicillin trihydrat với hàm lượng 99,5% tính lượng khan, đạt tiêu chuẩn IP USP 37 Acid clavulanic với hàm lượng 91,7%, cung cấp công ty Lek Pharmaceuticals, nước cất lần đạt tiêu chuẩn phân tích Máy quang phổ hai chùm tia UV 1800 SHIMAZDU (Nhật) kết nối với máy tính (chạy hệ điều hành Window 7) với phần mềm chuyên dụng UV Probe 2.50, Máy siêu âm Elmasonic (Đức), Cân phân tích số lẻ OHAUS CORPORATION (Mỹ) Mẫu placebo: Là mẫu bao gồm thành phần giống hệt mẫu thử không chứa hoạt chất cần định lượng (Đặng Văn Hịa Vĩnh Định, 2011) 192 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Công thức tá dược sau (Lê Quan Nghiệm Huỳnh Văn Hóa, 2007): - Tinh bột biến tính: 15 - 20% - Mg stearate: 1,2 - 1,5% - Talc: 0,5% Trên thực tế tá dược, độ trơn chảy, rã sử dụng để sản xuất viên nén đa dạng, nên việc chọn tá dược chưa đại diện Tuy nhiên, tạm chấp nhận cho áp dụng cho viên nén có thành phần tá dược % tá dược có viên 100  a% Tiến hành chọn % loại tá dược tương ứng với lượng thực tế Lượng cân loại tá dược tính theo cơng thức: 𝑚𝑣𝑖ê𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) Tiến hành quét phổ bình mẫu chuẩn đo điểm bước sóng chọn chất chuẩn Tính cộng phổ dung dịch hỗn hợp tổng độ hấp thu thành phần mỡi bước sóng độ hấp thu hỡn hợp - Thẩm định quy trình: Quy trình định lượng thẩm định theo hướng dẫn ICH mẫu thuốc bao gồm: Tính đặc hiệu, Độ đúng, Độ xác liên ngày, Giới hạn phát hiện, Giới hạn định lượng, Tính tuyến tính Chuẩn bị mẫu Mẫu chuẩn trihydrat) 𝑚(𝑡á 𝑑ượ𝑐)𝑖 = %(𝑡á 𝑑ượ𝑐)𝑖 𝑚 ̅̅̅ đồng thời thỏa điều kiện hai bước sóng cách khơng 10 nm Tiến hành khảo sát tính tuyến tính cách dựng đường chuẩn y = ax + b - Khảo sát tính cộng phổ dung dịch hỗn hợp: - Avicel: 10 - 30% 𝑚𝑐ℎ𝑢ẩ𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) Số 14 - 2022 (g) (1) Cân cho tất tá dược vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml nước cất lắc đều, siêu âm khoảng 15 - 20 phút, bổ sung nước cất tới vạch, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình 2, hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình - Lựa chọn bước sóng phân tích: Tiến hành qt phổ bình chất chuẩn amoxicillin trihydrat clavulanat kali từ 190 nm đến 400 nm Lựa chọn bước sóng có cực đại hấp thu thích hợp, AT (amoxicillin Cân xác khoảng lượng chất chuẩn amoxicillin trihydrat cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml nước cất lắc đều, siêu âm khoảng 15 phút, bổ sung nước cất tới vạch, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Hút xác thể tích: ml; 6ml; ml; 10ml; 12 ml; 15 ml từ bình số cho vào bình định mức 100 ml, thêm nước cất tới vạch, lắc 193 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ PC (Potassium clavulanat) Cân xác khoảng lượng chất chuẩn Potassium clavulanat cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml nước cất lắc đều, siêu âm khoảng 15 phút, bổ sung nước cất tới vạch, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Hút xác thể tích: ml; 6ml; ml; 10ml; 12 ml; 15 ml từ bình số cho vào bình định mức 100 ml, thêm nước cất tới vạch, lắc Mẫu hh chuẩn AT PC: Cân xác lượng mẫu chuẩn gồm AT PC chuẩn cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml nước cất lắc đều, siêu âm khoảng 15 - 20 phút, bổ sung nước cất tới vạch, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Mẫu placebo: Là mẫu tự tạo, có cơng thức thành phần chất hồn tồn giống mẫu thử (Bộ Y tế, 2011) Cân lượng amoxicillin trihydrat clavulanat kali giống mẫu chuẩn, thêm lượng tá dược giống tạo mẫu placebo, tất cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml nước cất lắc đều, siêu âm khoảng 15-20 Số 14 - 2022 phút, bổ sung nước cất tới vạch, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Dung mơi pha mẫu: nước cất Mẫu thử Augmentin: Mẫu thử: Là viên nén bao phim Augmentin K hệ số chuyển đổi: - Đối với amoxicillin 𝐾𝐴𝑚𝑜𝑥 = 𝑀𝐴𝑚𝑜𝑥 = 𝑀𝐴𝑇 365,4 419,4 - Đối với acid clavulanic 𝐾𝐶𝑙𝑎𝑣 = 𝑀𝐶𝑙𝑎𝑣 = 𝑀𝑃𝐶 199,16 237,3 Vậy khối lượng amoxicillin trihydrat clavulanat kali thực tế có viên Augmentin chứa 500 mg amoxicillin 125 mg acid clavulanic là: 𝑚𝑣𝑖ê𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) = 500 𝐾𝐴𝑚𝑜𝑥 + 125 𝐾𝐶𝑙𝑎𝑣 (mg) (2) Cân 20 viên Augmentin (đối tượng nghiên cứu) loại vỏ bao, tính khối lượng trung bình viên 𝑚 ̅ Tỷ lệ % (amoxicillin trihydrat clavulanat kali) có viên là: 194 a% = 𝑚𝑣𝑖ê𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) 100 ̅ 𝑚 Vậy lượng cân mẫu thử là: 𝑚𝑐â𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) = 𝑚𝑐ℎ𝑢ẩ𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) 𝑎% (g) (3) Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ Cân xác lượng mẫu thử tính tốn cho vào bình định mức 100 ml, thêm khoảng 70 ml nước cất lắc đều, siêu âm khoảng 15 - 20 phút, bổ sung nước cất tới vạch, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Hút xác 10 ml dung dịch từ bình cho vào bình định mức 100 ml, bổ sung nước cất tới vạch, lắc đều, ta bình Gọi 𝐶𝑗 (mol/l) nồng độ chất sau định lượng mẫu thử Hàm lượng viên là: ℎ𝑗 = 𝑚𝑣𝑖ê𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) 𝐶𝑗 𝐾 𝑚𝑐â𝑛(𝐴𝑇 + 𝑃𝐶) (g) (4) Số 14 - 2022 KẾT QUẢ 3.1 Lựa chọn bước sóng phân tích Kết qt phổ UV-VIS thang sóng 400-199 nm dung dịch chuẩn amoxicillin clavulanat kali thu kết Hình Có bước sóng có cực đại hấp thu 339 nm, 199 nm 193 nm Tại bước sóng 339 nm có độ hấp thu nhỏ, nên  (A = .l.C) nhỏ, khơng chọn bước sóng Tại 193 nm, bước sóng gần với bước sóng thấp dải sóng quét từ 199 nm đến 400 nm (Hình 1) Do bước sóng 199 nm chọn bước sóng phân tích clavulanat kali : Hình Phổ hấp thu clavulanat kali với nồng độ mg/L Hình Phổ hấp thu amoxicillin với nồng độ 10,072 mg/L 195 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đơ Kết trình bày Hình cho thấy có cực đại hấp thu bước sóng 340 nm, 272nm, 258 nm, 228 nm, 219 nm 193 nm Tuy nhiên, độ hấp thu bước sóng 340 nm, 272 nm, 258 nm thấp, dẫn đến hệ số hấp thu mol  nhỏ (A = .l.C), nên bước sóng khơng chọn Tại bước sóng 193 nm, có độ hấp thu cao, nhiên lại gần với bước chọn cho clavulanat kali 199 nm, nên Số 14 - 2022 khơng chọn bước sóng Vậy bước sóng 228 nm thích hợp Vậy, bước sóng phân tích amoxicillin 228 nm clavulanat kali 199 nm 3.2 Tính cộng phổ dung dịch hỗn hợp Tiến hành quét phổ chất chuẩn amoxicillin, clavulanat kali mẫu chuẩn thu kết Hình Hình Phổ hấp thu amoxicillin, clavulanat kali mẫu chuẩn Bảng Kết khảo sát tính cộng phổ amoxicillin clavulanat kali Bước sóng Độ hấp thu Amox Potassium clavulanate Tổng độ hấp thu hỡn hợp Mẫu chuẩn Từ Hình Bảng cho thấy, độ hấp thu dung dịch hỡn hợp amoxicillin clavulanat kali có tính cộng phổ rõ ràng hai bước sóng 199 nm 228 nm 199 nm 228 nm 1,057 0,146 1,203 1,203 0,279 0,053 0,332 0,332 Từ định luật Lambert - Beer, A = .l.C, ta tìm hệ số hấp thu  chất bước sóng sau: 196 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Hệ số hấp thu mol amoxicillin có nồng độ 10,072 mg/l bước sóng 199 nm là: 199 𝑎𝑚𝑜𝑥 = 1,057.365,4 10,072.10−3 Hệ số hấp thu mol amoxicillin có nồng độ 10,072 mg/l bước sóng 228 nm là: 228 𝑎𝑚𝑜𝑥 = 0,279.365,4 10,072.10−3 Hệ số hấp thu mol clavulanat kali có nồng độ mg/l bước sóng 199 nm là: 0,146.237,3 3.10−3 228 𝑃𝐶 = 0,053.237,3 3.10−3 = 4192,3 (l/mol.cm-1) Ta hệ phương trình tn theo tính cộng phổ định luật Lambert Beer sau: A199 = 38346,6839x + 11548,6y A228 = 10121,7832x + 4192,3y = 10121,7832 (l/mol.cm-1) 199 𝑃𝐶 = Hệ số hấp thu mol clavulanat kali có nồng độ mg/l bước sóng 228 nm là: = 38346,6839 (l/mol.cm-1) Số 14 - 2022 Bằng việc đo độ hấp thu mẫu thử bước sóng 199 nm 228 nm, ta có hệ phương trình ẩn số, tìm x y = 11548,6 (l/mol.cm-1) 3.3 Độ đặc hiệu Hình Phổ hấp thu mẫu giả định, mẫu thử, mẫu chuẩn mẫu placebo 197 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 14 - 2022 mg/L PC (1,2 - 4,5 mg/L) thu kết trình bày Bảng 3.4 Khảo sát tính tuyến tính Tiến hành xây dựng phương trình hồi quy tuyến tính cho AT (4,029 - 15,107 Bảng Kết khảo sát tương quan hồi quy tuyến tính amoxicillin clavulanat kali bước sóng 199 nm 228 nm Bước sóng (nm) 199 228 Amox (4,029 - 15,107 mg/l) Hệ số tương Phương trình hồi quy quan R y = 0,104121x + 0,9999 0,0117763 y = 0,0278482x + 0,9999 7,1664.10-4 Potassium Clavulanate (1,2 - 4,5 mg/l) Hệ số tương Phương trình hồi quy quan R y = 0,0486186x + 0,9999 2,93535.10-4 y = 0,0184288x – 0,9999 0,00217162 độ 10%, 20%, 30% để khảo sát giới hạn định lượng Kết trình bày Bảng 3.5 Giới hạn định lượng Chất chuẩn amoxicillin clavulanat kali pha loãng với mức nồng Bảng Kết khảo sát giới hạn định lượng 10% đo (a) 10% tính theo phương trình tuyến tính (b) Lệch(1- a/b)% 20% đo (c) 20% tính theo phương trình tuyến tính (d) Lệch(1- c/d)% 199 nm Potassium Amox Clavulanate 0,105 0,015 228 nm Potassium Amox Clavulanate 0,027 0,005 0,116 0,014 0,028 0,003 9,64% 0,217 2,74% 0,029 5,93% 0,057 47,06% 0,009 0,220 0,029 0,056 0,008 1,36% 0,34% 0,53% 1,12% Từ kết cho thấy, mức nồng độ 10%, độ hấp thu đo mỗi chất bước sóng khơng thỏa phương tình tuyến tính dựng (chênh lệch lớn 2%) với mức nồng độ 20% mỗi chất, cho độ hấp thu đo cịn tn theo phương trình tuyến tính mỡi chất (chênh lệch không 2%) Vậy, 20% nồng độ khảo sát: 2,014 mg/L amoxicillin 0,60 mg/l clavulanat kali giới hạn định lượng phương pháp 198 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 14 - 2022 3.7 Định lượng mẫu thử 3.6 Giới hạn phát Đối với amoxicillin LOD = LOQ/3,3 = 2,014/3,3 = 0,61 mg/l, Đối với clavulanat kali: LOD = LOQ/3,3 = 0,6/3,3 = 0,18 mg/L Mẫu thử chuẩn bị mục 2.3 Bảng Kết đo độ hấp thu mẫu thử Bước sóng Độ hấp thu Mẫu thử Tiến hành đo độ hấp thu mẫu thử bước sóng 199 nm 228 nm Từ hệ phương trình (*) mục 4.1.2, ta có hệ phương trình sau: 1,154 = 38346,6839x + 11548,6y 0,319 = 10121,7832x + 4192,3y x = 2,6304.10-5 mol/l y = 1,2584.10-5 mol/l Vậy hàm lượng của: - Amoxicillin 0,4772 g ứng với 95,44% so với hàm lượng nhãn - Acid clavulanic 0,1244 g ứng với 99,52% so với hàm lượng nhãn Vậy kết định lượng mẫu thử (viên nén Augmentin) đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam V (Bộ Y tế, 2018) THẢO LUẬN Kết thực nghiệm cho thấy phương pháp đo quang hỗn hợp nhiều bước sóng định lượng đồng thời amoxicillin acid clavulanic hỗn hợp mà không cần chiết tách thành phần riêng rẽ Cần thiết 199 nm 228 nm 1,154 0,319 pha loãng mẫu thử l để tìm nồng độ hoạt chất có hỡn hợp Ngồi ra, việc sử dụng nước cất làm dung môi ưu điểm bật phương pháp Trong phương pháp thí nghiệm, yếu tố quan trọng để định có định lượng đồng thời chất hay khơng dung mơi hịa tan mẫu lựa chọn bước sóng thích hợp Vì amoxicillin acid clavulanic dễ bị ảnh hưởng nhiệt độ ánh sáng nên việc lựa chọn dung mơi thích hợp để khơng phá hỏng hoạt chất hịa tan quan trọng.Thực tế, amoxicillin khó tan nước tan (1g/370 ml), clavulanat kali tan tốt nước nên điều kiện thuận lợi cho việc hòa tan mẫu Tuy nhiên, cần phải có mơi trường tiến hành định lượng ổn định, thao tác tiến hành định lượng cần cẩn thận để giảm đến mức thấp ảnh hưởng yếu tố nhiệt độ ánh sáng Qua khảo sát, bước sóng lựa chọn để định lượng theo phương pháp 199 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô đo quang hỗn hợp 199 nm clavulanat kali 228 nm amoxicillin - Đối với clavulanat kali, có cực đại hấp thu chọn 199 nm 193 nm Tuy nhiên, ta chọn 199 nm 193 nm gần với bước sóng nhỏ quét phổ (từ 190 nm đến 400 nm) - Đối với amoxicillin, chọn bước sóng 272 nm, 258 nm, 219 nm để định lượng Tuy nhiên, độ hấp thu amoxicillin 272 nm 259 nm nhỏ, dẫn đến hệ số hấp thu mol  nhỏ, phép đo quang không nhạy Giữa bước sóng 219 nm 228 nm ta chọn 228 nm bước sóng cách xa bước sóng chọn cho clavulanat kali Việc chọn bước sóng 199 nm 228 nm cho phương pháp điểm khác so với tài liệu tham khảo (Trần Trúc Bình Trần Thị My, 2015), khác cách xử lý phổ máy đo quang sử dụng Với phương pháp định lượng đồng thời này, tính ổn định mẫu chuẩn xác định tiến hành lặp lại khảo sát tính cộng phổ mẫu chuẩn Kết thẩm định phương pháp định lượng cho thấy, phương pháp có độ cao (tỷ lệ phần trăm tìm lại khoảng 98 - 102%), độ lặp lại cao Từ kết nghiên cứu cho thấy cần định lượng chế phẩm có dạng bào chế tương tự (chứa hàm lượng amoxicillin acid clavulanic với tỷ lệ 500/125), cần tính tốn lượng cân thích hợp đo độ hấp thu bước sóng 199 nm 228 nm, xác định Số 14 - 2022 hàm lượng amoxicillin acid clavulanic chế phẩm Với phát triển công nghiệp sản xuất bào chế thuốc cho phép kết hợp nhiều thành phần hoạt chất vào chế phẩm để đạt nhiều mục đích điều trị Việc định lượng xác thành phần chế phẩm quan trọng hàm lượng tỷ lệ hàm lượng thành phần có vai trị định hiệu sử dụng Hiện nay, đa số chế phẩm định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), có độ chọn lọc cao, cho kết ổn định Tuy nhiên, với phương pháp đòi hỏi thiết bị đắt tiền, chi phí dung mơi tốn mà sở đủ điều kiện để tiến hành Vì vậy, hoạt chất có chế phẩm cần định lượng phù hợp với phương pháp sử dụng máy quang phổ UV - Vis thử nghiệm để tiến hành định lượng cách đơn giản, tiết kiệm chi phí cho kết hợp lý KẾT LUẬN Quy trình định lượng đồng thời xây dựng với công thức để tính hàm lượng hoạt chất Dung mơi để tiến hành định lượng đồng thời amoxicillin acid clavulanic viên nén nước; khoảng nồng độ phân tích amoxicillin 4,029 - 15,107 mg/l, clavulanat kali 1,2 - 4,5 mg/l; với bước sóng phân tích 199 nm 228 nm Thẩm định quy trình xây dựng qua định lượng chế phẩm chứa thành phần amoxicillin acid clavulanic, cho kết đạt tiêu chuẩn 200 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Dược điển Việt Nam V Quy trình phân tích theo ICH với tiêu độ đặc hiệu; độ có tỷ lệ thu hồi nằm khoảng 97 - 103%; độ lặp lại với RSD < 2%; giới hạn định lượng: 2,014 mg/l amoxicillin 0,60 mg/l clavulanat kali; giới hạn phát hiện: 0,61 mg/l amoxicillin 0,18 mg/l clavulanat kali TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế, 2013 Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc, phụ lục Nxb Y học 92 trang Số 14 - 2022 Lê Quan Nghiệm Huỳnh Văn Hóa, 2007 Bào chế sinh dược học, tập Nxb Giáo dục Việt Nam 445 trang Lê Minh Trí, 2009 Hóa Dược 1.Nxb Giáo dục Việt Nam 517 trang O.Haidar, 2015 Simple indirect spectrophotometric determination of amoxicillin in pharmaceutical preparations Journal of Natural Sciences Research, Vol - No 16 pages Trần Đức Hậu, 2007 Hóa Dược, tập Nxb Y học 276 trang Đặng Văn Hòa Vĩnh Định, 2011 Kiểm nghiệm thuốc Nxb Giáo dục Việt Nam 367 trang ICH Harmonised tripartite guideline, 2005 Validation of analytical procedures: text and methodology.17 pages Trần Trúc Bình Trần Thị My, 2015 Xác định đồng thời amoxicillin kali clavulanat dược phẩm phương pháp trắc quang - chemometrics Tạp chí Hóa, Lý Sinh học 1: 120 129 201 Tạp chí Nghiên cứu khoa học Phát triển kinh tế Trường Đại học Tây Đô Số 14 - 2022 SIMULTANEOUS DETERMINATION OF POTASSIUM CLAVULANATE AND AMOXICILLIN BY USING UV-VIS SPECTROPHOTOMETRY Nguyen Chi Toan* and Tao Viet Ha Tay Do University (*Email: nctoan@tdu.edu.vn) ABSTRACT Currently, the combination of amoxicillin and clavulanic acid is widely used to treat infections caused by bacteria that produced β - lactamases resistant to amoxicillin, so it is necessary to have a method to simultaneously quantify these two active ingredients In the same composition, HPLC method is commonly used for giving highly accurate results, but it requires pure chemical solvents and expensive equipment This study introduces a simple, easy-to-implement, cost-effective method using a UV-Vis spectrophotometer to quantify amoxicillin and clavulanic acid all at once The analytical wavelengths of the method are 199 nm and 228 nm The method is linear in the concentration range of 1,2 – 4,5 mg/l for clavulanate potassium and 4,03 – 15,2 mg/l for amoxicillin This method has been validated with the following criteria: Specificity, with an accuracy of the recovery rate in the range of 97 - 103%, a repeatability with RSD < 2%, with the limit of quantification and limit of detection for amoxicillin are at 2,0144 mg/l and 0,61 mg/l; and for clavulanate potassium they are 0,6 mg/l and 0,18 mg/l, By using this method, amoxicillin and clavulanic acid were simultaneously quantified in Augmentin tablets that meet the standards of Vietnamese Pharmacopoeia Keywords: amoxicillin, clavulanic acid, simultaneous determination method, UV-Vis spectrophotometer 202 ... acid clavulanic phương pháp quang phổ Ứng dụng phương pháp xây dựng để thẩm định định lượng đồng thời amoxicillin acid clavulanic viên nén Augmentin PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương pháp nghiên cứu... máy quang Số 14 - 2022 phổ UV-Vis để định lượng đồng thời hai chất Vì mục tiêu nghiên cứu nhằm thử nghiệm xây dựng quy trình định lượng đồng thời hỡn hợp hai thành phần amoxicillin acid clavulanic. .. này, cần có phương pháp định lượng đồng thời hoạt chất chế phẩm Phương pháp phổ biến để định lượng đồng thời chế phẩm có kết hợp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Ưu điểm phương pháp có tính đặc hiệu,