Nghiên cứu ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng đến sự phát sinh cơ quan của lan thiên nga (cycnoches chlorochỉon) giai đoạn in vitro

TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN -*** - TRƢƠNG NGỌC TUẤN NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƢỞNG ĐẾN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN CỦA LAN THIÊN NGA (Cycnoches chlorochiron) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sƣ phạm Sinh học PHÚ THỌ, 2019 TRƢỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƢƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN -*** - TRƢƠNG NGỌC TUẤN NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƢỞNG ĐẾN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN CỦA LAN THIÊN NGA (Cycnoches chlorochiron) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sƣ phạm Sinh học Giáo viên hƣớng dẫn: TS Trần Trung Kiên PHÚ THỌ, 2019 LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu hồn thành khóa luận, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo hƣớng dẫn TS Trần Trung Kiên hƣớng dẫn tận tình, quan tâm động viên em hồn thành khóa luận Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến thầy (cô) Trung tâm nghiên cứu Công nghệ sinh học trƣờng Đại học Hùng Vƣơng toàn thể thầy cô giáo Khoa Khoa học Tự nhiên, Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng tạo điều kiện giúp đỡ để em thực hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, ngƣời bên cạnh động viên, giúp đỡ em suốt trình thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! Phú Thọ, ngày tháng 05 năm 2019 Sinh viên Trƣơng Ngọc Tuấn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu khóa luận tơi, kết nghiên cứu đƣợc trình bày khóa luận trung thực Mọi giúp đỡ cho việc thực khóa luận đƣợc cảm ơn thơng tin trích dẫn khóa luận đƣợc rõ nguồn gốc đƣợc phép công bố Phú Thọ, ngày tháng 05 năm 2019 Sinh viên Trƣơng Ngọc Tuấn DANH MỤC VIẾT TẮT BAP : Benzylamino purinne CT : Công thức ĐC : Đối chứng MS : Môi trƣờng Murashige & Skoog MT : Môi trƣờng NAA : Naphthtalen acetic acid DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hƣởng BAP đến phát triển thân, rễ in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 23 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng BAP đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 26 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng BAP đến hệ số nhân, đặc điểm chồi in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 27 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 29 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng NAA đến phát sinh in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 31 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng NAA đến hệ số nhân chồi 33 Bảng 3.7 Tỉ lệ sống sót 34 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Ảnh hƣởng BAP đến phát triển thân,rễ in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 24 Hình 3.2 Ảnh hƣởng BAP đến phát triển thân 24 Hình 3.3 Ảnh hƣởng BAP đến phát sinh rễ 25 Hình 3.4 Ảnh hƣởng BAP đến phát sinh 26 Hình 3.5 Ảnh hƣởng BAP đến hệ số nhân chồi 28 Hình 3.6 Ảnh hƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển thân, rễ in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 29 Hình 3.7 Ảnh hƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển thân 30 Hình 3.8 Ảnh hƣởng NAA đến phát sinh rễ 31 Hình 3.9 Ảnh hƣởng NAA đến phát sinh 32 Hình 3.10 Ảnh hƣởng NAA đến hệ số nhân chồi 33 Hình 3.11 Rễ sau tuần 35 MỤC LỤC PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần II: NỘI DUNG CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung chi Thiên nga (Cycnoches ) 1.1.1 Vị trí phân loại phân bố 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3.Lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) 1.2 Kĩ thuật nhân giống nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Lịch sử phát triển kỹ thuật nhân giống nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.3 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.4 Các giai đoạn kỹ thuật nhân giống in vitro 1.2.5 Các điều kiện nuôi cấy in vitro 10 1.2.6 Môi trường nuôi cấy in vitro .11 1.2.7 Tầm quan trọng phương pháp nuôi cấy mô - tế bào thực vật 15 1.3 Tình hình nghiên cứu lan Thiên nga 15 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 16 1.4 Các chất điều hòa sinh trƣởng 18 1.4.1 BAP ( 6- Benzylaminopurine) 18 1.4.2 NAA ( Naphthalene Acetic Acid) 18 1.5 Giá thể lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) .18 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP .19 NGHIÊN CỨU 19 2.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu .19 2.2 Nội dung nghiên cứu .19 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp luận 19 2.3.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 19 2.3.3 Phương pháp thu thập số liệu 21 2.3.4 Phương pháp xử lý liệu .22 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 23 3.1 Ảnh hƣởng BAP đến phát sinh hình thái in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 23 3.1.1 Ảnh hưởng BAP đến phát sinh thân, rễ in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) 23 3.1.2 Ảnh hưởng BAP đến sinh trưởng phát triển in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 26 3.1.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP đến phát sinh chồi in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 27 3.2 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) 28 3.2.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA đến sinh trưởng phát triển thân, rễ in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) 28 3.2.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA đến phát sinh in vitro lan Thiên nga (Cycnocheschlorochiron) 31 3.2.3 Ảnh hưởng NAA đến hệ số nhân chồi, đặc điểm chồi in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 33 3.3 Ảnh hƣởng giá thể đến tỉ lệ sống sót lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 34 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36 Kết luận 36 Kiến nghị 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO 37 25 phát sinh chồi, đóng vai trị quan trọng giai đoạn phát triển thân nhân nhanh chồi trình ni cấy in vitro Qua bảng 3.1, hình 3.1 hình 3.2 tơi nhận thấy sinh trƣởng phát triển thân tốt CT3 nồng độ BAP 1mg/lít với chiều cao thân trung bình đạt đƣợc 34,2 mm, đạt 5,68g Khi tăng nồng độ BAP lên đến 2mg/lít xuống 0,5mg/lít sinh trƣởng chiều cao thân trọng lƣợng giảm xuống lần lƣợt 30,36 mm 4,02 g 28,8 mm, 3,41g Tất cao so với sinh trƣởng chiều cao thân tƣơng đối CT đối chứng Hình 3.3 Ảnh hƣởng BAP đến phát sinh rễ - Ở thí nghiệm dù khơng đƣợc bổ auxin nhƣng tỉ lệ rễ đạt 100% Tuy nhiên nhận thấy CT3 với nồng độ BAP 1mg/lít có số lƣợng rễ đƣợc phát sinh vƣợt trội hẳn CT lại cụ thể là 5.2 rễ Khi giảm nồng độ BAP xuống 0,5mg/lít số rễ giảm xuống cịn 4,2 rễ.Khi tăng lên nồng độ 1,5mg/lít 2mg/lít số rễ giảm xuống đáng kể 3,6 rễ Ở CT ĐC số rễ đạt đƣợc 3,4 rễ thấp chút so với số rễ tạo nồng độ BAP cao CT1 CT2 26 3.1.2 Ảnh hƣởng BAP đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) - BAP chất điều hịa sinh trƣởng có ảnh hƣởng lớn đến sinh trƣởng phát triển thân Sau thời gian tuần nuôi cấy thu đƣợc kết sau Bảng 3.2 Ảnh hƣởng BAP đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Công thức Số (lá) Chiều dài (mm) ĐC 4,8 ± 0,07 40,36 ± 1,26 CT1 5,6 ± 0,12 48,87 ± 1,42 CT2 5,8± 0,11 44,04 ± 1,25 CT3 6,6 ± 0,09 49,98 ± 2,56 CT4 5,4 ± 0,14 46,91 ± 1,38 Hình 3.4 Ảnh hƣởng BAP đến phát sinh Qua bảng 3.2 hình 3.4 tơi nhận thấy: Ở giai đoạn tuần nuôi cấy bổ sung BAP với nồng độ khác có phát triển khác nhau, hầu 27 nhƣ phát triển tƣơng đối tốt Ở CT3 có phát triển vƣợt trội so với CT khác cụ thể CT3 đạt tới 6,6 lá, chiều dài đạt đƣợc 49,98 mm cao nhiều so với CT ĐC 4,8 lá, chiều dài 40,36 mm Ở nồng độ khác số đƣợc tạo chênh lệch không nhiều, tăng nồng độ BAP lên tới 1,5mg/lít 2mg/lít CT1 CT2 lần lƣợt 5,6 5,8 chiều dài đạt đƣợc 48,87 44,04 mm , giảm nộng độ BAP xuống 0,5mg/lít số đƣợc tạo 5,4 chiều dài 46,91 mm Các CT đƣợc bổ sung BAP cho số nhiều so với CT ĐC 3.1.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP đến phát sinh chồi in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Để tìm mơi nồng độ BAP thích hợp để nhân nhanh chồi phát triển chiều cao chồi tốt nhất, tiến hành thí nghiệm ni cấy MT MS có bổ sung 100g khoai tây/lít, 100ml nƣớc dừa/lít, 30g saccarozơ/lít, 6g agar/lít, 0,5g than hoạt tính/lít, pH 5,6 với nồng độ BAP theo CT nêu Sau tiến hành đánh giá CT để lựa chọn với nồng độ thích hợp in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Sau tuần nuôi cấy thu đƣợc kết sau: Bảng 3.3 Ảnh hƣởng BAP đến hệ số nhân, đặc điểm chồi in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) CT tuần tuần Đặc điểm chồi ĐC 1,74±0,08 2,87±0,09 Chồi xanh, thƣa, nhỏ CT1 2,45±0,11 3,62±0,12 Chồi xanh, đều, nhỏ CT2 2,78±0,15 3,91±0,17 Chồi xanh, đều, nhỏ CT3 3,47±0,12 6,15±0,13 Chồi xanh, đều, mập CT4 2,23±0,09 3,52±0,11 Chồi xanh,thƣa, nhỏ 28 Hình 3.5 Ảnh hƣởng BAP đến hệ số nhân chồi Chất điều hòa sinh trƣởng BAP có tác dụng mạnh mẽ việc tạo chồi giai đoạn in vitro.Dựa vào bảng 3.3 hình 3.5 tơi nhận thấy nồng độ khác có khác biệt rõ rệt số lƣợng chồi hình thái chồi cụ thể CT3 cho hệ số nhân chồi cao 6.15, chồi xanh, mọc mập mạp sau tuần nuôi cấy, CT2 cho hệ số nhân chồi cao thứ với 3,91 chồi sau tuần, chồi xanh, mọc đều, nhỏ Khi tăng nộng độ BAP lên 2mg/lít hay xuống 0,5mg/lít số lƣợng chồi tạo tƣơng đƣơng lần lƣợt 3,62 3,5 chồi sau tuần, chồi xanh, mọc thƣa nhỏ Ở CT ĐC khơng đƣợc bổ sung BAP nên hệ số nhân chồi thấp đạt 2,87 chồi sau tuần, chồi mọc thƣa nhỏ 3.2 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) 3.2.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA đến sinh trưởng phát triển thân, rễ in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) Để tìm nồng độ thích hợp chất điều hịa sinh trƣởng NAA ảnh hƣởng đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga tiến hành ni cấy mơi trƣờng MS có bổ sung 100g khoai tây/lít, 100ml nƣớc dừa/lít, 30g saccarozơ/lít, 6g agar/lít, 0,5g than hoạt tính/lít, pH 5,6 với 29 nồng độ NAA khác Sau tiến hành đánh giá xem với MT MS nồng độ chất điều hịa sinh trƣởng NAA có tác dụng mạnh đến sinh trƣởng, phát triển in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Bảng 3.4 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Chiều dài Tỉ lệ rễ Khối lƣợng rễ (mm) (%) tƣơi (g) 25,75±1,32 3.4±0,14 24.91±1,52 100% 1,84±0,57 CT1 33,81±0,91 4,2±0,17 29.29±1,29 100% 2,84±0,62 CT2 32,36±1,54 4,6±0,22 34,35±1,47 100% 4,74±0,45 CT3 37,29±1,27 33,58±1,36 100% 6,24±0,37 CT4 46,76±1,21 6,6±0,19 29,23±1,22 100% 10,41±0,41 Công Chiều cao thức thân (mm) ĐC Số rễ 5±0,1 Hình 3.6 Ảnh hƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển thân, rễ in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) 30 Hình 3.7 Ảnh hƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển thân Chất điều hịa sinh trƣởng NAA có tác dụng kích thích sinh trƣởng giãn tế bào nên có tác dụng đến sinh trƣởng phát triển thân giai đoạn in vitro Dựa vào bảng 3.3 hình 3.5, hình 3.6 tơi nhận thấy CT đƣợc bổ sung NAA sinh trƣởng phát triển tốt, nhiên với nồng độ khác có thay đổi rõ rệt chiều cao thân, cụ thể CT4 với nồng độ NAA đƣợc bổ sung 0,5mg/lít có khối lƣợng tƣơi đạt tới 10,41g chiều cao thân 46,76 mm cao vƣợt trội so với công thức khác Ở CT3 chiều cao thân đạt đƣợc 37,29 mm cao thứ CT, nồng độ NAA tăng lên cao từ 1,5mg/lít đến 2mg/lít chiều cao thân CT tƣơng đƣơng lần lƣợt 32,36 33,81 mm Ở CT đối chứng không đƣợc bổ sung NAA nên chiều cao thân đạt đƣợc 27,75 mm, khối lƣợng tƣơi 1,84g nhỏ nhiều so với CT đƣợc bổ sung NAA 31 Hình 3.8 Ảnh hƣởng NAA đến phát sinh rễ - Trong giai đoạn in vitro chất điều hịa sinh trƣởng NAA có tác dụng mạnh mẽ đến trình phát sinh rễ - Qua số liệu bảng 3.3 hình 3.6, hình 3.7 tơi nhận thấy CT đƣợc bổ sung NAA sinh trƣởng phát triển trƣơng đối tốt, nhiên với nồng độ NAA khác phát sinh rễ CT có thay đổi, cụ thể CT4 đƣợc bổ sung NAA với nồng độ 0,5mg/lít cho tỉ lệ rễ cao 6,6 rễ, nồng độ NAA tăng dần từ 1mg/lít đến 2mg/lít tỉ lệ rễ giảm dần lần lƣợt rễ 4,2 rễ Ở CT đối chứng số rễ đƣợc tạo 3,4 rễ thấp nhiều so với CT đƣợc bổ sung NAA 3.2.2 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng NAA đến phát sinh in vitro lan Thiên nga (Cycnocheschlorochiron) Chất điều hòa sinh trƣởng NAA có tác dụng quan trọng q trình sinh trƣởng phát triển giai đoạn nuôi cấy in vitro Sau tuần nuôi cấy thu đƣợc kết nhƣ sau: 32 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng NAA đến phát sinh in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Chiều dài Công thức Số (lá) ĐC 5,6±0,17 40,36±1,26 CT1 5,8±0.15 43,89±1,18 CT2 6±0,11 39,92±1,25 CT3 6,2±0.16 46,13±1,32 CT4 6,4±0,13 50,5±1,21 (mm) Hình 3.9 Ảnh hƣởng NAA đến phát sinh Dựa vào số liệu bảng 3.4 hình 3.9 tơi nhận thấy CT đƣợc bổ sung NAA có sinh trƣởng phát triển tƣơng đối tốt, nhiên số cơng thức có thay đổi rõ rệt tùy thuộc vào nồng độ NAA Đối với CT4 đƣợc bổ sung NAA với nồng độ 0,5mg/lít cho số cao 6,4 cao vƣợt trội so với CT lại, nồng độ NAA tăng dần từ 1mg/lít đến 2mg/lít số 33 đƣợc tạo giảm dần, cụ thể CT3 số đƣợc tạo 6,2 lá, CT2 lá, CT1 5,8 Ở CT ĐC số tạo 5,8 thấp hẳn so với CT đƣợc bổ sung NAA 3.2.3 Ảnh hƣởng NAA đến hệ số nhân chồi, đặc điểm chồi in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Bảng 3.6 Ảnh hƣởng NAA đến hệ số nhân chồi CT tuần tuần Đặc điểm chồi ĐC 1,74±0.08 2,87±0,09 Chồi xanh, thƣa, nhỏ CT1 2,32±0,17 3,56±0,18 Chồi xanh, thƣa, nhỏ CT2 2,67±0,11 3,73±0,12 Chồi xanh, đều, nhỏ CT3 2,79±0,13 3,85±0,15 Chồi xanh, đều, nhỏ CT4 3,27±0,09 5,11±0,11 Chồi xanh, đều, mập Hình 3.10 Ảnh hƣởng NAA đến hệ số nhân chồi Dựa vào số liệu bảng 3.6 hình 3.10 tơi nhận thấy CT đƣợc bổ sung NAA sinh trƣởng phát triển tƣơng đối tốt, CT4 cho hệ số nhân chồi 34 cao 5,11 sau tuần nuôi cấy chồi, chồi mọc đều, xanh, mập Ở CT3 CT2 CT1 nồng độ NAA tăng dần hệ số nhân chồi giảm dần từ 3,85 chồi CT3 đến 3,56 chồi CT1, chồi mọc thƣa, màu xanh, nhỏ Ở CT ĐC cho tỉ lệ chồi thấp 2,87 chồi, chồi mọc thƣa, xanh, nhỏ khơng đƣợc bổ sung NAA Nhƣ sau tuần ni cấy in vitro lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) sinh trƣởng phát triển tốt môi trƣờng MS đƣợc bổ sung thêm 100ml nƣớc dừa/lít, 100g khoai tây/lít, 30g saccarozơ/lít, 6g agar/lít, 0,5g than hoạt tính/lít, pH 5,6 chất điều hịa sinh trƣởng BAP nồng độ 1mg/lít NAA 0,5mg/lít 3.3 Ảnh hƣởng giá thể đến tỉ lệ sống sót lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) Sau thời gian nuôi cấy đạt đủ tiêu rễ, thân, đƣợc đƣa ngồi mơi trƣờng để huấn luyện Để lựa chọn đƣợc giá thể tốt cho tiến hành trồng thử nghiệm 30 CT với thành phần khác nhƣ sau: + CT1: 100% dớn trắng ( ngâm sát khuẩn) + CT2: 100% mụn sơ dừa ( ngâm sát khuẩn) + CT3: 50% mụn sơ dừa + 50% đá perlit ( ngâm nƣớc vôi qua đêm ) + CT4: 70% mụn sơ dừa + 30% đá perlit ( ngâm nƣớc vôi qua đêm) Sau ngày thu đƣợc kết nhƣa sau: Bảng Tỉ lệ sống sót Cơng thức Tỉ lệ sống sót (%) Số chết CT1 86,67% CT2 90% CT3 83,33% CT4 100% 35 CT4 Hình 3.11 Rễ sau tuần Dựa vào bảng 3.5 nhận thấy CT4 có tỉ lệ sống sót cao 100% tỉ lệ 70% mụn sơ dừa kết hợp với 30% đá perlit giúp cho giá thể không khô không ẩm giúp cho rễ lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) phát triển tốt Đối với CT1 CT2 100% giá thể dớn trắng mụn sơ dừa giữ nƣớc tốt nên khiến bị thối rễ chết tỉ lệ sống sót CT đạt 86,67% 90% Đối với CT5 tỉ lệ đá perlit cao nên khiến giá thể bị khơ khó giữ nƣớc nên tỉ lệ chết cao, tỉ lệ sống sót đạt 83,33% Hình 3.11 hình ảnh thực tế đƣợc trồng CT3 với điều kiện giá thể hợp lí rễ phát triển nhanh nên tỉ lệ sống sót cao 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Khi tiến hành nghiên cứu nuôi cấy in vitro lan Thiên nga môi trƣờng MS đƣợc bổ sung thêm 100g khoai tây/lít, 100ml nƣớc dừa/lít, 30g saccarozơ/lít, 6g agar/lít, 0,5g than hoạt tính/lít, pH 5,6 chất điều hịa sinh trƣởng BAP NAA với nồng độ khác Tôi thu đƣợc kết nhƣ sau: Đối với BAP nồng độ 1ml/lít cho tác dụng tốt đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) đặc biệt có tác dụng kéo dài thân, phát triển lá, kích thích phát sinh chồi tốt so với nồng độ lại Chiều cao thân đạt đƣợc 34,2mm, số tạo 6,6 với chiều dài tƣơng đối 48,98mm, hệ số nhân chồi 6,15 Ở nồng độ BAP 1ml/lít khả phát sinh rễ cao so với công thức đƣợc bổ sung BAP nồng độ khác Đối với NAA nồng độ 0,5ml/lít cho tác dụng mạnh đến sinh trƣởng phát triển của rễ in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) cụ thể tỉ lệ rễ cao 6,6 rễ, khối lƣợng tƣơi nặng 10,41g, chiều dài rễ 29,23mm hệ số nhân chồi 5,11 Sự phát triển thân nồng độ đạt kết cao so với nồng độ NAA lại Đối với giá thể CT4 với tỉ lệ 70% dớn trắng 30% mụn sơ dừa đƣợc ngâm nƣớc vôi qua đêm cho tỉ lệ sống xót cao 100% Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng BAP , NAA nghiên cứu công thức phối hợp BAP với NAA giai đoạn khác trình nhân giống in vitro loài lan 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bùi Danh Chung (2015) “Nghiên cứu nhân giống in vitro loài lan Hoàng thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum)” Luận văn Thạc sĩ khoa Nông nghiệp trƣờng Học viện Nông nghiệp Việt Nam [2] Trần Hợp (1990), Phong lan Việt Nam, Nhà xuất kỹ thuật Hà Nội [3] Dƣơng Đức Huyến (2007), Thực vật chí Viiệt Nam (Flora of Vietnam) Tập 9, Họ Lan - Orchidaceae Juus (Chi thiên nga – Cycnoches chlorochiron) Khoa học kỹ thuật [4] Vũ Kim Dung, Nguyễn Văn Việt Bùi Văn Thắng (2016) “Nhân giống lan Hoàng thảo Ý thảo ba màu (Dendrobium gratiosissimum reichenb.f) kĩ thuật nuôi cấy in vitro” Tạp chí Khoa học cơng nghệ lâm nghiệp, số 6-2016 [5] Vũ Thanh Sắc, Nguyễn Thị Thu Huyền, Lê Thị Lý (2012),” Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng thảo trầm trắng (D anosmum var.alba)”, Tạp chí khoa học cơng nghệ, Đại học Thái Ngun, 93(05), tr 131-135 [6] Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh Nguyễn Thị Phƣơng Thảo, (2005), Giáo trình cơng nghệ sinh học nông nghiệp, NXB Nông Nghiệp [7] Nguyễn Thanh Tùng cộng (2010) “Áp dụng phƣơng pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào nhân giống in vitro cấy lan Hồng Thảo (Dendrobium aduncum)”.Tạp chí Cơng nghệ sinh học [8] Nguyễn Văn Vinh, Nguyễn Hữu Lễ (2009), Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng thực vật lên phát sinh chồi rễ Phong lan giả hạt D anosmum, Tạp chí khoa học cơng nghệ, tập 47, số 5, 2009 Tr 99 - 10 [9] Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp, (2005), Công nghệ sinh học tế bào, tập 2, NXB Giáo dục, Hà Nội Tài liệu tham khảo nước [10] Stephen R Batchelor “Catasetum and cycnoches – Culture influenced by Growth Cycle” [11] Ned Nash “ Catasetum and cycnoches – Problems Commonly Encountered” 38 [12] Shivani Vyas, Satyakam Guha (2009), “Rapid regeneration of plants of Dendrobium lituiflorum Lindl (Orchidaceae) by using banana extract” Scientia Horticulturae 121 (2009): 32–37 [13] M Maridass R Mahesh, G.Raju, A.Benniamin and K.Muthuchelian In vitro Propagation of Dendrobium nanum through rhizome bud culture International Journal of Biological Technology (2010):1(2):50-54 [14] Tuhuteru S (2012), “Growth and development of D anosmum orchid on in vitro culture media with several coconut water concentrations”, Agrologia, Vol 1, No 1, April 2012, hal.1-12 39 Phú Thọ, ngày tháng 05 năm 2019 Ý kiến giảng viên hƣớng dẫn Sinh viên thực (Kí ghi rõ họ tên) (Kí ghi rõ họ tên) TS Trần Trung Kiên Trƣơng Ngọc Tuấn ... 3.2.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA đến sinh trưởng phát triển thân, rễ in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) 28 3.2.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA đến phát sinh in. .. tài “ Nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến phát sinh quan lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron) giai đoạn in vitro? ?? Mục tiêu đề tài Đánh giá đƣợc nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng... nhỏ 3.2 Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng NAA đến sinh trƣởng phát triển in vitro lan Thiên nga ( Cycnoches chlorochiron) 3.2.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng NAA đến sinh trưởng phát triển