NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu
- Đối tƣợng: Cây lan Thiên nga (Cycnoches chlorochilon) in vitro, và các chất điều hòa sinh trƣởng BAP, NAA
- Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu sự phát sinh cơ quan của loài lan Thiên nga thông qua việc bổ sung các chất điều hòa sinh trƣởng với các nồng độ khác nhau.
- Địa điểm nghiên cứu: Các thí nghiệm đƣợc thực hiện tại Trung tâm nghiên cứu công nghệ sinh học – Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng – thành phố Việt Trì – Tỉnh Phú Thọ.
2.2. Nội dung nghiên cứu
Nghiên cứu ảnh hƣởng của các chất điều hòa sinh trƣởng đến sự hình thành các cơ quan của cây lan Thiên nga giai đoạn in vitro.
2.3. Phƣơng pháp nghiên cứu
2.3.1. Phương pháp luận
- Các nhân tố chỉ tiêu nghiên cứu phải chia thành các công thức khác nhau. - Các nhân tố không phải chỉ tiêu nghiên cứu phải đảm bảo tính đồng nhất giữa các công thức thí nghiệm.
- Số lƣợng mẫu của mỗi công thức thí nghiệm phải đủ lớn (≥15). - Phải tuân thủ nguyên tắc lặp lại (số lần lặp lại ≥ 3)
2.3.2. Phương pháp bố trí thí nghiệm
- Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hƣởng của chất điều hòa sinh trƣởng BAP
lên sự phát sinh cơ quan cây in vitro loài lan Thiên nga(Cycnoches chlorochilon).
+ Vật liệu ban đầu: Chồi in vitro có 3 lá với chiều dài lá 2cm đƣợc nuôi cấy trong môi trƣờng nền là môi trƣờng MS (Murashige & Skoog) bổ sung: 100g
khoai tây/ lít, 100ml nƣớc dừa/ lít, 30g saccarozo/ lít, 6g agar/ lít, 0,5g than hoạt tính/ lít, pH 5,6 + Các công thức (CT): ĐC : MS + BAP 0mg/lít (đối chứng) CT1: MS + BAP 2mg/lít CT2: MS + BAP 1,5mg/lít CT3: MS + BAP 1mg/lít CT4: MS + BAP 0,5mg/lít + Chỉ tiêu đánh giá: Số lƣợng chồi. Chiều dài lá, số lá. Chiều dài rễ, số rễ. Khối lƣợng tƣơi. Hình thái chồi.
+ Thời gian thu thập: sau 4 tuần nuôi cấy một lần.
- Thí ngiệm 2: Nghiên cứu sự ảnh hƣởng của chất điều hòa sinh trƣởng NAA tới sự phát sinh cơ quan cây in vitro loài Thiên nga (Cycnoches
chlorochilon).
+ Vật liệu ban đầu: Chồi in vitro có 3 lá với chiều dài lá 2cm đƣợc nuôi cấy trong môi trƣờng nền là môi trƣờng MS bổ sung: 100g khoai tây/ lít, 100ml nƣớc dừa/ lít, 30g saccarozo/ lít, 6g agar/ lít, 0,5g than hoạt tính/ lít, pH 5,6.
+ Các công thức: ĐC : MS + NAA 0mg/lít (đối chứng) CT1: MS + NAA 2mg/lít CT2: MS + NAA 1,5mg/lít CT3: MS + NAA 1mg/lít CT4: MS + NAA 0,5mg/ lít + Chỉ tiêu đánh giá: Số lƣợng chồi
Chiều dài lá, số lá. Chiều dài rễ, số rễ. Khối lƣợng tƣơi. Hình thái chồi.
+ Thời gian thu thập sau 4 tuần nuôi cấy
- Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hƣởng của giá thể đến tỉ lệ sống xót khi ra cây loài lan Thiên nga (Cycnoches chlorochiron)
- Vật liệu là dớn trắng, mụn sơ dừa, đá perlit. - Các công thức:
+ CT1: 100% dớn trắng (đã ngâm sát khuẩn) + CT2: 100% mụn sơ dừa (đã ngâm sát khuẩn)
+ CT3: 50% mụn sơ dừa + 50% đá perlit ( ngâm nƣớc vôi trong qua đêm) + CT4: 70% mụn sơ dừa + 30% đá perlit ( ngâm nƣớc vôi trong qua đêm)
- Thời gian thu thập sau 1 tuần ra cây.
2.3.3. Phương pháp thu thập số liệu
- Chỉ tiêu thu thập:
+ Hệ số nhân chồi (lần) = Tổng số chồi Số chồi ban đầu
+ Số lá/chồi (lá) =
+ Chiều dài lá (mm) =
+ Số rễ (rễ) =
+ Chiều dài rễ (mm) =
+ Khối lƣợng tƣơi (g): Cân tổng khối lƣợng mỗi cây. - Thời gian thu thập: cứ 4 tuần thống kê các chỉ tiêu 1 lần.
2.3.4. Phương pháp xử lý liệu
Các số liệu đƣợc tính toán theo phƣơng pháp phân tích thống kê toán học. Qúa trình xử lý số liệu đƣợc thực hiên trên máy tính của chƣơng trình Excel.