Nghiên cứu ảnh hưởng bổ sung của các chất hữu cơ đến sự phát sinh cơ quan của loài lan hoàng thảo kèn (dendrobium lituiflorum) giai đoạn in vitro

TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THÙY LINH NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT BỔ SUNG HỮU CƠ ĐẾN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN CỦA LOÀI LAN HOÀNG THẢO KÈN (Dendrobium lituiflorum) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sư phạm Sinh học Phú Thọ, 2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THÙY LINH NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT BỔ SUNG HỮU CƠ ĐẾN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN CỦA LOÀI LAN HỒNG THẢO KÈN (Dendrobium lituiflorum) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: Sư phạm Sinh học NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS TRẦN TRUNG KIÊN Phú Thọ, 2018 i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu hồn thành khóa luận, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo hƣớng dẫn TS Trần Trung Kiên hƣớng dẫn tận tình, quan tâm động viên em hồn thành khóa luận Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến thầy (cô) Trung tâm nghiên cứu Công nghệ sinh học trƣờng Đại học Hùng Vƣơng tồn thể thầy giáo Khoa Khoa học Tự nhiên, Trƣờng Đại học Hùng Vƣơng tạo điều kiện giúp đỡ để em thực hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, ngƣời bên cạnh động viên, giúp đỡ em suốt q trình thực hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn! Phú Thọ, ngày tháng 05 năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thùy Linh ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu khóa luận tơi, kết nghiên cứu đƣợc trình bày khóa luận trung thực Mọi giúp đỡ cho việc thực khóa luận đƣợc cảm ơn thơng tin trích dẫn khóa luận đƣợc rõ nguồn gốc đƣợc phép công bố Phú Thọ, ngày tháng 05 năm 2018 Sinh viên Nguyễn Thùy Linh iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AC : Than hoạt tính BAP : Benzylamino purine ĐC : Đối chứng IAA : Indole acetic acid KC : Knudson C NAA : Naphthalen acetic acid MS : Môi trƣờng Murashige & Skoog MT : Môi trƣờng PLSs : Protocorom iv DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng đến hệ số nhân, đặc điểm chồi in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 27 Bảng 3.2 Ảnh hƣởng chuối lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 28 Bảng 3.3 Ảnh hƣởng chuối lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 30 Bảng 3.4 Ảnh hƣởng nƣớc dừa lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 32 Bảng 3.5 Ảnh hƣởng nƣớc dừa lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 35 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng khoai tây lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 36 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng khoai tây lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 39 Bảng 3.8 Ảnh hƣởng pepton lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 41 Bảng 3.9 Ảnh hƣởng pepton lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 43 v DANH MỤC BẢNG Hình 3.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng đến hệ số nhân chồi 28 Hình 3.2 Ảnh hƣởng chuối đến lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 29 Hình 3.3 Ảnh hƣởng chuối đến chiều cao thân 29 Hình 3.4 Ảnh hƣởng chuối đến số rễ 30 Hình 3.5 Ảnh hƣởng chuối đến số 31 Hình 3.6 Ảnh hƣởng nƣớc dừa đến lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 33 Hình 3.7 Ảnh hƣởng nƣớc dừa đến chiều cao thân 33 Hình 3.8 Ảnh hƣởng nƣớc dừa đến số rễ 34 Hình 3.9 Ảnh hƣởng nƣớc dừa đến số 35 Hình 3.10 Ảnh hƣởng khoai tây đến lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 37 Hình 3.11 Ảnh hƣởng khoai tây đến chiều cao thân 37 Hình 3.12 Ảnh hƣởng khoai tây đến số rễ 38 Hình 3.13 Ảnh hƣởng khoai tây đến số 39 Hình 3.14 Ảnh hƣởng pepton đến lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 41 Hình 3.15 Ảnh hƣởng pepton đến chiều cao thân 42 Hình 3.16 Ảnh hƣởng pepton đến số rễ 42 Hình 3.17 Ảnh hƣởng pepton đến số 43 vi MỤC LỤC Phần I: MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần II: NỘI DUNG CHƢƠNG TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung chi Hoàng Thảo (Dendrobium) 1.1.1 Vị trí phân loại phân bố 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 1.2 Kĩ thuật nhân giống nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Lịch sử phát triển kỹ thuật nhân giống nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.3 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô - tế bào thực vật 1.2.4 Các giai đoạn kỹ thuật nhân giống in vitro 1.2.5 Các điều kiện nuôi cấy in vitro 11 1.2.6 Môi trƣờng nuôi cấy in vitro 12 1.2.7 Tầm quan trọng phƣơng pháp nuôi cấy mô - tế bào thực vật 16 1.3 Tình hình nghiên cứu lan Hồng Thảo 17 1.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 17 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nƣớc 18 1.4 Các chất bổ sung hữu 20 1.4.1 Chuối 20 1.4.2 Nƣớc dừa 20 1.4.3 Khoai tây 21 vii 1.4.4 Peptone 21 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP 22 NGHIÊN CỨU 22 2.1 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.3.1 Phƣơng pháp luận 22 2.3.2 Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm 22 2.3.3 Phƣơng pháp thu thập số liệu 25 2.3.4 Phƣơng pháp xử lý số liệu 26 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng đến khả nhân nhanh cụm chồi in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 27 3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng chuối lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 28 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng chuối lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 28 3.2.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng chuối lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 30 3.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng nƣớc dừa lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 32 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng nƣớc dừa lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 32 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng nƣớc dừa lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 34 3.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng khoai tây lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 36 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng khoai tây lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 36 viii 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng khoai tây lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 38 3.5 Nghiên cứu ảnh hƣởng peptone lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 40 3.5.1 Nghiên cứu ảnh hƣởng pepton lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 40 3.5.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng pepton lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 43 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 45 1.Kết luận 45 2.Kiến nghị 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO 46 Tài liệu tham khảo tiếng việt 46 Tài liệu tham khảo nƣớc 47 35 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nước dừa lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) Công thức Số (lá) Chiều dài (mm) ĐC 4,33 ± 0,12 25,22 ± 0,72 BS6 4,60 ± 0,32 28,86 ± 1,32 BS7 3,47 ± 0,22 25,62 ± 1,74 BS8 3,03 ± 0,44 22,36 ± 1,22 BS9 2,87 ± 0,35 23,65 ± 0,88 4,33 4,60 3,47 Số (lá) 3,03 2,87 ĐC BS6 BS7 BS8 BS9 Cơng thức thí nghiệm Hình 3.9 Ảnh hưởng nước dừa đến số Qua bảng 3.5 hình 3.9, giống nhƣ phát triển rễ số công thức bổ sung nƣớc dừa nồng độ từ 100 - 400 ml/l Sự phát triển cao nồng độ 100 ml/l đạt giá trị trung bình 4,6 chiều dài 28,86 mm màu xanh mập mạp Ở công thức 200 - 400 ml/l số chiều dài giảm cụ thể số 3,47 lá; 3,03 lá; 2,87 thấp so với đối chứng 4,33 Lá ở cơng thức 200 - 300 ml/l có tƣợng úa vàng mỏng sinh trƣởng so với công thức bổ sung khác Kết 36 phù hợp với nghiên cứu Abdullahil cộng (2011) nhận thấy hàm lƣợng nƣớc dừa cao làm giảm tăng trƣởng gây bất thƣờng hình thái học chồi [12] Nhƣ vậy, sau tuần ni cấy, lan Hồng Thảo Kèn sinh trƣởng phát triển tốt mơi trƣờng KC có bổ sung 100 ml/l nƣớc dừa; 6,5 g/l agar; 20 g/l đƣờng; 0,5 g/l than hoạt tính 3.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng khoai tây lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 3.4.1 Nghiên cứu ảnh hưởng khoai tây lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) Để tìm mơi trƣờng thích hợp cho phát sinh quan sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối tốt nhất, nghiên cứu tiến hành thí nghiệm bổ sung khoai tây với nồng độ khác nhau: 50 g/l, 100 g/l, 150 g/l, 200 g/l, 250 g/l vào mơi trƣờng ni cấy Sau tiến hành đánh giá để xác định đƣợc lƣợng khoai tây thích hợp cho phát sinh quan Bảng 3.6 Ảnh hưởng khoai tây lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hồng Thảo Kèn (D lituiflorum) Cơng Chiều cao Khối lƣợng Tỉ lệ Số rễ Chiều dài rễ thức thân (mm) tƣơi (mg) rễ (%) (rễ) (mm) ĐC 28,23 ± 1,26 0,38 ± 0,02 100 3,93 ± 0,11 18,80 ± 0,45 BS10 42,60 ± 1,45 1,72 ± 0,37 100 4,40 ± 0,26 22,52 ± 1,22 BS11 51,44 ± 2,74 2,95 ± 0,12 100 4,77 ± 0,34 20,16 ± 2,10 BS12 58,25 ± 1,47 3,12 ± 0,62 100 6,47 ± 0,21 28,10 ± 2,16 BS13 48,18 ± 2,34 2,33 ± 0,56 100 4,93 ± 0,16 19,45 ± 1,54 BS14 45,78 ± 3,74 2,07 ± 0,44 100 5,13 ± 0,11 22,99 ± 0,72 37 Hình 3.10 Ảnh hưởng khoai tây đến lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 58,25 Chiều cao thân (mm) 60 51,44 50 40 48,18 42,60 45,78 28,23 30 20 10 ĐC BS10 BS11 BS12 BS13 BS14 Cơng thức thí nghiệm Hình 3.11 Ảnh hưởng khoai tây đến chiều cao thân Về đặc điểm tăng trƣởng chiều cao chịu ảnh hƣởng rõ rệt việc thay đổi nồng độ khoai tây Sự sinh trƣởng chiều cao đạt kết tốt nồng độ 38 50 g/l, 100 g/l, 150 g/l (BS10, BS11, BS12) Sự sinh trƣởng chiều cao đạt giá trị cao 58,25 mm nồng độ khoai tây 150 g/l thấp công thức đối chứng với chiều cao tƣơng đối 28,23 mm Sự sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối tăng dần tăng nồng đ ộ khoai tây lên 50 g/l, 100 g/l 150 g/l Khi tăng nồng độ khoai tây cao so với 150 g/l sinh trƣởng chiều cao tƣơng đối có xu hƣớng giảm dần Khối lƣơng tƣơi nồng độ 150 g/l cho Số rễ (rễ) kết cao 3,12 g cao gấp lần so với công thức đối chứng 6,47 3,93 ĐC 4,40 BS10 4,93 4,77 BS11 BS12 BS13 5,13 BS14 Cơng thức thí nghiệm Hình 3.12 Ảnh hưởng khoai tây đến số rễ Cũng nhƣ thí nghiệm chuối thí nghiệm ta thấy có phát sinh rễ đạt tỉ lệ 100% sau tuần nghiên cứu Cụ thể số rễ trung bình tăng từ 3,93 rễ đến 6,47 rễ mơi trƣờng ni cấy có thay đổi nồng độ khoai tây từ g/l (ĐC) đến 150 mg/l (BS12) Số rễ trung bình chiều dài rễ đạt giá trị lớn 6,47 rễ, 28,10 mm mơi trƣờng ni cấy có bổ sung 150 g/l khoai tây, nồng độ khoai tây vƣợt 150 g/l ta thấy giá trị số rễ trung bình cơng thức 200 g/l (BS13) 250 g/l (BS14) giảm đáng kể Điều bột khoai tây bổ sung vào môi trƣờng cao làm đặc môi trƣờng nuôi cấy nên ảnh hƣởng đến trình sinh trƣởng 3.4.2 Nghiên cứu ảnh hưởng khoai tây lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) Số sau tuần có chênh lệch đáng kể tăng giảm không ổn 39 định mơi trƣờng có nồng độ khoai tây khác Dƣới bảng số liệu biểu đồ thể số chiều dài sau tuần nuôi cấy: Bảng 3.7 Ảnh hưởng khoai tây lên phát triển in vitro loài lan Hồng Thảo Kèn (D lituiflorum) Cơng thức Số (lá) Chiều dài (mm) ĐC 4,33 ± 0,28 25,22 ± 0,45 BS10 5,27 ± 0,45 27,44 ± 1,21 BS11 5,46 ± 0,26 33,33 ± 2,07 BS12 5,73 ± 0,67 36,40 ± 1,15 BS13 5,33 ± 0,43 29,46 ± 0,91 BS14 4,60 ± 0,31 27,32 ± 1,68 Số (lá) 5,27 5,46 5,73 5,33 4,60 4,33 ĐC BS10 BS11 BS12 BS13 Công thức thí nghiệm BS14 Hình 3.13 Ảnh hưởng khoai tây đến số Từ bảng 3.7 thấy rằng, ln có tăng lên số lƣợng chiều dài sau tuần Khả tăng trƣởng số lá, chiều dài cao công thức 40 BS12, số đạt từ 5,73 chiều dài 36,4 mm tuần thứ Khi tăng nồng độ khoai tây lên cao 150 g/l số có giá trị thấp (BS10, BS11, BS12) Và công thức đối chứng ta thấy số có giá trị nhỏ so với mơi trƣờng khác có bổ sung khoai tây số chiều dài Kết phù hợp với nghiên cứu Norhayati cộng bổ sung 100 - 150 g/l khoai tây gia tăng hệ số nhân lên gấp lần đối tƣợng Celosia sp [18] nghiên cứu Phùng Văn Phê cộng (2010) bổ sung 100 g/l khoai tây vào môi trƣờng nuôi cấy lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghi), kết hệ số nhân nhanh chồi in vitro sau tuần nuôi cấy tăng gấp 5,5 lần [5] Nhƣ vậy, sau tuần nuôi cấy, lan Hoàng Thảo Kèn sinh trƣởng phát triển tốt mơi trƣờng KC có bổ sung 150 g/l khoai tây; 6,5 g/l agar; 20 g/l đƣờng; 0,5 g/l than hoạt tính 3.5 Nghiên cứu ảnh hƣởng peptone lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 3.5.1 Nghiên cứu ảnh hưởng pepton lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) Trong thí nghiệm có bổ sung pepton nồng độ từ - g/l để so sánh với công thức đối chứng không đƣợc bổ sung pepton điều kiện môi trƣờng Kết thu đƣợc bảng dƣới đây: 41 Bảng 3.8 Ảnh hưởng pepton lên phát triển thân, rễ in vitro lồi lan Hồng Thảo Kèn (D lituiflorum) Cơng Chiều cao Khối lƣợng Tỉ lệ Số rễ Chiều dài rễ thức thân (mm) tƣơi (mg) rễ (%) (rễ) (mm) ĐC 28,23 ± 0,94 0,38 ± 0,02 100 3,93 ± 0,12 18,8 ± 1,22 BS15 29,50 ± 0,44 1,37 ± 0,12 100 4,60 ± 0,33 17,17 ± 2,01 BS16 32,18 ± 1,01 2,89 ± 0,05 100 4,27 ± 0,14 15,48 ± 2,31 BS17 34,41 ± 1,17 3,04 ± 0,12 100 5,33 ± 0,26 18,69 ± 2,67 BS18 26,61 ± 0,76 1,05 ± 0,92 100 3,60 ± 0,15 10,05 ± 1,84 BS19 23,43 ± 0,56 0,21 ± 0,35 100 2,87 ± 0,22 8,84 ± 0,67 Hình 3.14 Ảnh hưởng pepton đến lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 42 35 Chiều cao thân (mm) 34,41 32,18 29,50 28,23 26,61 30 23,43 25 20 15 10 ĐC BS15 BS16 BS17 BS18 BS19 Cơng thức thí nghiệm Hình 3.15 Ảnh hưởng pepton đến chiều cao thân Qua kết bảng 3.8 nhận thấy có chênh cơng thức đối chứng cơng thức có bổ sung pepton Về chiều cao tƣơng đối thân thấy bổ sung pepton từ nồng độ g/l (BS15), g/l (BS16), g/l (BS17) có chiều cao tƣơng đối thân tƣơng ứng 29,25 mm; 32,18 mm; 34,41 mm cao so với công thức đối chứng (ĐC) có 28,23 mm nhiên không đáng kể Ở công thức g/l (BS18) g/l (BS19) chiều cao tƣơng đối thân thấp so với công thức đối chứng cụ thể chiều cao tƣơng ứng 26,61 mm 23,43 mm Về khối lƣợng tƣơi công thức g/l pepton cho kết tốt 3,04 g cao nhiều so với đối chứng có khối lƣợng 0,38 g 5,33 Số rễ (rễ) 4,60 4,27 3,93 3,60 2,87 ĐC BS15 BS16 BS17 BS18 BS19 Cơng thức thí nghiệm Hình 3.16 Ảnh hưởng pepton đến số rễ 43 Cũng giống nhƣ thí nghiệm trƣớc, phát sinh rễ đạt tỉ lệ 100% thông qua hình 3.16, số rễ cơng thức g/l pepton cho kết cao 5,33 rễ chiều dài rễ đạt 18,69 mm Thấp phát triển rễ cơng thức g/l pepton có số rễ 2,87 rễ chiều dài 8,84 mm thấp so với đối chứng 3.5.2 Nghiên cứu ảnh hưởng pepton lên phát triển in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) Số chiều dài có khác biệt công thức nồng độ khác Dƣới bảng số liệu hình: Bảng 3.9 Ảnh hưởng pepton lên phát triển in vitro lồi lan Hồng Thảo Kèn (D lituiflorum) Cơng thức Số (lá) Chiều dài (mm) ĐC 4,33 ± 0,23 25,22 ± 0,67 BS15 3,40 ± 0,38 19,96 ± 1,21 BS16 4,13 ± 0,67 20,87 ± 1,56 BS17 5,60 ± 0,55 23,47 ± 0,78 BS18 3,47 ± 0,41 18,18 ± 0,85 BS19 2,73 ± 0,28 18,14 ± 0,45 5,60 Số (lá) 4,33 4,13 3,47 3,40 2,73 ĐC BS15 BS16 BS17 BS18 BS19 Cơng thức thí nghiệm Hình 3.17 Ảnh hưởng pepton đến số 44 Qua bảng 3.9 hình 3.17, ta nhận thấy cơng thức g/l (BS17) cho số chiều dài cao 5,60 23,47mm cao gấp 1,29 lần so với công thức đối chứng tăng nồng độ pepton lên g/l g/l mơi trƣờng số chiều dài giảm cụ thể g/l (BS18) có số 3,47 chiều dài 18,18 mm; g/l (BS19) số 2,73 chiều dài 18,14 mm thấp so với công thức đối chứng Nhƣ vậy, sau tuần ni cấy, lan Hồng Thảo Kèn sinh trƣởng phát triển tốt mơi trƣờng KC có bổ sung g/l pepton; 6,5 g/l agar; 20 g/l đƣờng; 0,5 g/l than hoạt tính 45 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Khi tiến hành nghiên cứu mơi trƣờng khác nhau: KC, MS, ½ MS in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) Nhận thấy môi trƣờng KC cho hệ số nhân chồi cao 4,15 lần sau tuần nuôi cấy Khi tiến hành nghiên cứu chất bổ sung hữu nồng độ khác thu đƣợc kết nhƣ sau: Đối với chất bổ sung chuối cho kết tốt nồng độ 100 g/l, chiều cao đạt 37,13 mm, khối lƣợng tƣơi đạt 2,48 g Sự phát triển rễ, đạt kết cao Đối với chất bổ sung nƣớc dừa cho kết tốt nồng độ 100 ml/l chiều cao tƣơng đối thân đạt 33,34 mm, 4,19 rễ 4,6 Khi bổ sung khoai tây vào môi trƣờng nuôi cấy từ 50 - 250 g/l cho kết tốt nồng độ 150 g/l chiều cao đạt 58,25 mm; 6,47 rễ 5,73 Trong nồng độ pepton tiến hành nghiên cứu, cho kết tốt nồng độ g/l môi trƣờng chiều cao đạt 34,41 mm; 5,33 rễ 18,89 rễ So sánh tất công thức chất bổ sung hữu nhận thấy khoai tây nồng độ 150 g/l cho kết phát triển chiều cao, số rễ, số tốt Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu chất bổ sung hữu khác giai đoạn để hồn thiện quy trình nhân giống in vitro lồi lan 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng việt [1] Bùi Danh Chung (2015) “Nghiên cứu nhân giống in vitro loài lan Hoàng thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum)” Luận văn Thạc sĩ khoa Nông nghiệp trƣờng Học viện Nông nghiệp Việt Nam [2] Vũ Kim Dung, Nguyễn Văn Việt Bùi Văn Thắng (2016) Nhân giống lan Hoàng thảo Ý thảo ba màu (Dendrobium gratiosissimum reichenb.f) kĩ thuật ni cấy in vitro” Tạp chí Khoa học công nghệ lâm nghiệp, số 6-2016 [3] Trần Hợp (1990), Phong lan Việt Nam, Nhà xuất kỹ thuật Hà Nội [4] Dƣơng Đức Huyến (2007), Thực vật chí Viiệt Nam (Flora of Vietnam) Tập 9, Họ Lan - Orchidaceae Juus (Chi hoàng thảo - Dendrobium Sw) Khoa học kỹ thuật [5] Phùng Văn Phê, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Trung Thành - Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi in vitro loài Lan kim tuyến Anoectochilus roxburghii, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 26 (2010) 248-253 [6] Vũ Thanh Sắc, Nguyễn Thị Thu Huyền, Lê Thị Lý (2012), Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng thảo trầm trắng (D anosmum var.alba), Tạp chí khoa học cơng nghệ, Đại học Thái Nguyên, 93(05), tr 131-135 [7] Nguyễn Văn Song cộng (2011), Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dendrobium Chrysotoxum) - Một lồi lan rừng có nguy tuyệt chủng, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 64 [8] Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh Nguyễn Thị Phƣơng Thảo, (2005), Giáo trình cơng nghệ sinh học nông nghiệp, NXB Nông Nghiệp 47 [9] Nguyễn Thanh Tùng cộng (2010) “Áp dụng phƣơng pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào nhân giống in vitro cấy lan Hồng Thảo (Dendrobium aduncum)”.Tạp chí Cơng nghệ sinh học [10] Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp, (2005), Công nghệ sinh học tế bào, tập 2, NXB Giáo dục, Hà Nội [11] Nguyễn Văn Vinh, Nguyễn Hữu Lễ (2009), Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng thực vật lên phát sinh chồi rễ Phong lan giả hạt D anosmum, Tạp chí khoa học công nghệ, tập 47, số 5, 2009 Tr 99 - 10 Tài liệu tham khảo nƣớc [12] Abdullahil B M., Shin Y K., Elshmari T., Lee E J., Paek K Y (2011) Effect of light quality, sucrose and coconut water concentration on the microporpagation of Calanthe hybrids („Bukduseong‟ × „Hyesung‟ and „Chunkwang‟ × „Hyesung‟), Aust J Cro Sci (10) 1247-1254 [13] Aktar S., Nasiruddin K M., Hossain K (2008) Effects of different media and organic additives interaction on in vitro regeneration of Dendrobium orchid, J Agr Rural Dev 69-74 [14] George E F., Hall M A., and De Klerk G J (2008) Plant Propagation by Tissue Culture Springer, Dordrecht, The Netherlands 501 [15] J Chang, XY Ding, SL Bao, DY Liu , J He (2004) “Studies on tissue culture of Dendrobium lituiflorum” China Journal of Chinese Materia Medica, 29 (4) :313 [16] M Maridass R Mahesh, G.Raju, A.Benniamin and K.Muthuchelian (2010) In vitro Propagation of Dendrobium nanum through rhizome bud culture International Journal of Biological Technology 1(2):50-54 [17] Mohamed M A H., Alsadon A A., Al Mohaidib M S (2010) Corn and potato starch as an agar alternative for Solanum tuberosum micropropagation, Afr J Biotechnol (1) 12-16 [18] Norhayati D., Rosna M T., Nor N M N., Hasimah A (2011) Provision 48 of low cost media options for in vitro culture of Celosia sp, Afr J Biotechl 10 (80) 18349-18355 [19] Nhut D T., Thi N N., Khiet B L T., Luan V Q (2008) Peptone stimulates in vitro shoot and root regeneration of avocado (Persea americana Mill.), Sci Hort 115 124-128 [20] Overbeek van J., Conklin M E., Blakeslee A F (1941) Factors in coconut milk essential for growth and development of very young Datura embryos, Science 94 350-351 [21] Pavallekoodi G., Xavier R., Uma R S., Sreeramanan S (2010) A study on the use of organic additives on the protocorm-like bodies (plbs) growth of phalaenopsis violacea orchid, J Phycol (1) 029-033 [22] P Kapoor-Pandey1, S Vyas1 S.Guha1 I Usha Rao (2011), “Synchronous Plantlet Formation by Using Banana Extract and In vitro Hardening in Orchid, Dendrobium lituiflorum Lindl” Journal of Ornamental and Horticultural Plants, 1(3): 175-184, December, 2011 [23] Pierik R L M (1988) In vitro culture of higher plants as a tool in the propagation of horticultural crops, Acta Hortic 226 25-40 [24] Saranjeet K., Bhutani K K (2012) Organic growth supplement stimulants for in vitro multiplication of Cymbidium pendulum, HortScince (1) 47-52 [25] Shantz E M., Steward F C (1952) Coconut milk factor: The growth promoting substance in coconut milk, J Amer Chem Soc 74 6133-6135 [26] Seyring M (2005), Einfluss von pepton auf die differenzierung und keimungsomatischer embryonen von cyclamen persicum Mill, BHGLSchriften-reihe 23 119 [27] Yong J W H., Ge L., Ng Y F., Tan S N (2009) Thechemicalcomposition abd biology properties of coconut (Cocos mucifera L.) water, Molecules 14 5144-5164 49 Phú Thọ, ngày tháng 05 năm 2018 Ý kiến giảng viên Sinh viên thực hƣớng dẫn (Kí ghi rõ họ tên) (Kí ghi rõ họ tên) TS Trần Trung Kiên Nguyễn Thùy Linh ... - NGUYỄN THÙY LINH NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT BỔ SUNG HỮU CƠ ĐẾN SỰ PHÁT SINH CƠ QUAN CỦA LOÀI LAN HOÀNG THẢO KÈN (Dendrobium lituiflorum) GIAI ĐOẠN IN VITRO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP... 3.2 Nghiên cứu ảnh hƣởng chuối lên phát sinh quan in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum) 3.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng chuối lên phát triển thân, rễ in vitro loài lan Hoàng Thảo Kèn (D lituiflorum). .. vi nghiên cứu - Đối tƣợng: Cây lan Hoàng Thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum) in vitro - Phạm vi nghiên cứu: Nghiên cứu phát sinh quan loài lan Hoàng Thảo Kèn thông qua việc bổ sung với nồng độ chất