ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM ĐÀM VĂN THƢỢNG NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƢỞNG VÀ CHẤT HỮU CƠ ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH, RA RỄ VÀ GIAI ĐOẠN NGO[.]
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - ĐÀM VĂN THƢỢNG NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƢỞNG VÀ CHẤT HỮU CƠ ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH, RA RỄ VÀ GIAI ĐOẠN NGOÀI VƢỜN ƢƠM CÂY LAN HỒNG THẢO (Dendrobium) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Chuyên ngành: Cơng nghệ Sinh học Khoa: CNSH-CNTP Khóa học: 2011-2015 Thái nguyên 2015 c ii ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - ĐÀM VĂN THƢỢNG NGHIÊN CỨU ẢNH HƢỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH SINH TRƢỞNG VÀ CHẤT HỮU CƠ ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN NHANH, RA RỄ VÀ GIAI ĐOẠN NGOÀI VƢỜN ƢƠM CÂY LAN HOÀNG THẢO (Dendrobium) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo: Chính quy Chun ngành: Cơng nghệ Sinh học Khoa: CNSH-CNTP Khóa học: 2011-2015 Giảng Viên Hƣớng Dẫn: ThS Lƣơng Thị Thu Hƣờng Thái nguyên 2015 c iii LỜI CẢM ƠN Đƣợc trí Ban giám hiệu nhà trƣờng, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm thời gian thực tập tốt nghiệp thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng chất hữu đến khả nhân nhanh rễ giai đoạn vườn ươm lan Hoàng Thảo” Qua tháng thực tập phịng ni cấy mơ khoa Cơng nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm đến hoàn thành đề tài Để đạt đƣợc kết nhƣ ngày hôm xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trƣờng, Ban chủ nhiệm Khoa thầy cô giáo môn tạo điều kiện giúp đỡ suốt thời gian qua Tôi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc tới Cơ giáo ThS Lƣơng Thị Thu Hƣờng ThS Nguyễn Thị Tình tận tình bảo, hƣớng dẫn tơi thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn K.S Lã Văn Hiền tận tình hƣớng dẫn nhƣ tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành khóa luận suốt thời gian thực tập phịng thí nghiệm Cuối cùng, tơi xin chân thành cảm ơn gia đình, bạn bè hết lịng động viên, giúp đỡ tạo điều kiện vật chất tinh thần cho tơi q trình học tập nghiên cứu Do trình độ thời gian thực đề tài có giới hạn nên đề tài khơng thể tránh khỏi sai sót Tơi mong nhận đƣợc đóng góp ý kiến thầy bạn để đề tài tơi đƣợc hồn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 20 tháng năm 2015 Sinh viên thực Đàm Văn Thượng c iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Các cơng thức thí nghiệm có bổ sung dịch chiết khoai tây cà rốt 18 Bảng 2: Các công thức thí nghiệm tốt thí nghiện kết hợp với nƣớc dừa 19 Bảng 3: Các cơng thức thí nghiệm có bổ sung nƣớc dừa 70ml kết hợp với nồng độ Kinetine khác 20 Bảng 4: Các cơng thức thí nghiệm có bổ sung hàm lƣợng khoai tây khác kết hợp với nồng độ BA khác 20 Bảng 5: Các cơng thức thí nghiệm thay đổi nồng độ than hoạt tính khác 21 Bảng 6: Các cơng thức thí nghiệm có bổ sung nồng độ NAA khác 22 Bảng 7: Các công thức thí nghiệm có bổ sung GA3 với nồng độ khác 22 Bảng 4.1 Tổng số chồi thu đƣợc hệ số nhân chồi lan Hoàng Thảo đƣợc ni cấy mơi trƣờng MS có bổ xung dịch chiết khoai tây cà rốt ứng với (CT) thí nghiệm 25 Bảng 4.2 Tổng số chồi thu đƣợc, hệ số nhân hình thái chồi Lan Hồng thảo sau tuần ni cấy mơi trƣờng có bổ xung dịch chiết khoai tây 50g/l + cà rốt 20g/l kết hợp với hàm lƣợng nƣớc dừa ứng với (CT) thí nghiệm 27 Bảng 4.3 Tổng số chồi thu đƣợc, hệ số nhân chồi hình thái chồi lan Hồng Thảo đƣợc ni cấy mơi trƣờng MS +70ml nƣớc dừa kết hợp với nồng độ Kinetine ứng với Công thức 29 Bảng 4.5 tổng số rễ thu đƣợc, tỷ lệ tạo rễ chất lƣợng rễ sau tuần nuôi cấy mơi trƣờng bổ sung hàm lƣợng than hoạt tính ứng với (CT): 33 Bảng 4.6 Số rễ thu đƣợc, tỷ lệ tạo rễ chất lƣợng rễ sau tuần ni cấy mơi trƣờng có bổ sung NAA với nồng độ khác 34 Bảng 4.7 Số thu đƣợc, tỷ lệ sống chất lƣợng thu đƣợc sau tuần ni cấy có bổ sung GA3 với nồng độ khác 36 c v DANH MỤC HÌNH Hình 4.1 Biểu đồ hệ số nhân lan Hồng Thảo bổ xung dịch chiết khoai tây cà rốt vào môi trƣờng nuôi cấy 26 Hình 4.2 Hệ số nhân chồi Lan Hồng thảo sau tuần nuôi cấy môi trƣờng bổ sung hàm lƣợng nƣớc dừa kết hợp với khoai tây 50g/l+ cà rốt 20g/l 28 Hình 4.3 Hệ số nhân chồi Lan Hoàng Thảo sau tuần nuôi cấy môi trƣờng bổ sung nƣớc dừa kết hợp với nồng độ Kinetine khác 30 Bảng 4.4 Tổng số chồi thu đƣợc, hệ số nhân chồi hình thái chồi sau tuần ni cấy môi trƣờng bổ sung hàm lƣợng khoai tây khác kết hợp với nồng độ BA 31 Hình 4.4 Hệ số chồi Lan Hồng Thảo sau tuần ni cấy môi trƣờng bổ sung khoai tây kết hợp BA 32 Hình 4.5 thể tỷ lệ tạo rễ sau tuần ni cấy có bổ sung than hoạt tính 33 Hình 4.6 Ảnh hƣởng NAA đến khả rễ (sau tuần theo dõi) 35 Hình 4.7 Ảnh hƣởng GA3 đến khả sinh trƣởng phát triển lan Hoàng Thảo ( sau tuần theo dõi) 36 c vi DANH MỤC CỤM TỪ VIẾT TẮT DNA Deoxyribonucleic Acid CT Công thức BA Benzyladenin Đ/C Đối chứng K Kinetin (6- Furfurylaminopurine) THT Than hoạt tính KT Khoai tây CR Cà rốt c vii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC CỤM TỪ VIẾT TẮT vi MỤC LỤC vii PHẦN 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa đề tài PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.1 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.2 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1.3 Tính tồn tế bào 2.1.4 Phân hóa phản phân hóa tế bào 2.2 Gới thiệu hoa lan Hoàng thảo (Dendrobium) 2.2.1 Nguồn gốc phân bố 2.2.2 Đặc điểm thực vật học lan Hoàng Thảo (Dendrobium) 2.2.3 Đặc điểm thực vật học chi lan Hoàng Thảo (Dendrobium) 11 2.3 Tình hình nghiên cứu nƣớc ngồi nƣớc 12 2.3.1 Tình hình nghiên cứu sản xuất hoa lan việt nam 12 2.3.2 Tình hình nghiên cứu lan giới 14 PHẦN 3: VẬT LIỆU NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Đối tƣợng (vật liệu) phạm vi nghiên cứu 16 3.2 Đối tƣợng nghiên cứu 16 3.3 Phạm vi nghiên cứu 16 3.4 Hóa chất thiết bị 16 c viii 3.4.1 Hóa chất 16 3.4.2 Thiết bị 16 3.5 Điều kiện nuôi cấy 17 3.6 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 17 3.7 Nội dung nghiên cứu phƣơng pháp nghiên cứu 17 3.7.1 Nội dung nghiên cứu 17 3.7.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 3.7.3 Phƣơng pháp thu thập, sử lý số liệu tiêu đánh giá 23 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 25 4.1 Kết ảnh hƣởng dịch chiết khoai tây, cà rốt nƣớc dừa có bổ xung chất kích thích sinh trƣởng Kinetine, BA đến khả nhân nhanh Lan Hoàng Thảo 25 4.1.1 Ảnh hƣởng dịch chiết khoai tây cà rốt đến khả nhân nhanh Lan Hoàng Thảo 25 4.1.2 Ảnh hƣởng hàm lƣợng khoai tây + cà rốt tốt kết hợp với nƣớc dừa đến khả nhân nhanh Lan Hoàng Thảo 27 4.1.3 Ảnh hƣởng hàm lƣợng nƣớc dừa kết hợp với Kinetine đến khả nhân nhanh lan Hoàng Thảo 29 4.1.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng khoai tây khác kết hợp với BA 31 4.2 Kết nội dung 33 4.2.1 Kết ảnh hƣởng hàm lƣợng than hoạt tính đến khả rễ 33 4.2.2 Kết ảnh hƣởng NAA đến khả rễ 34 4.2.3 Kết ảnh hƣởng GA3 đến giai đoạn sinh trƣởng phát triển Lan Hoàng Thảo 36 PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 5.1 Kết luận 38 5.2 Kiến nghị 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 Tài liệu tiếng việt 40 c ix Tài Liệu Tiếng Anh 41 c PHẦN MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Trong giới lồi hoa nói hoa lan lồi hoa đẹp quyến rũ mê hồn màu sắc hƣơng thơm, đặc biệt đƣờng nét hoa thật cầu kỳ, sắc sảo, thêm vào hoa lan có đặc tính bền tƣơi lâu giá trị làm cảnh trang trí, hoa lan cịn đƣợc sử dụng với nhiều mục đích khác nhƣ: Dùng làm thực phẩm (giống Orchis), rau xanh (giống Anoetochilus), trà uống (loài Jumellea fragrans), hƣơng liệu (Vannila plannifolia) đặc biệt lan đƣợc dùng làm dƣợc liệu, có tác dụng chữa bệnh nhƣ số loài lan thuộc chi Orchis, Platanthera, Gymnadenda, Dactylorhiza đặc biệt chi Lan Hoàng Thảo (Dendrobium nobile, Caulis Dendrobium, dendrobium loddgesii, Dendrobium Chrysanthum, Dendrobium fimbriatum, Dendrobium nobile Lindi) (Đỗ Huy Bích, 2004) [1] (Dƣơng Đức Huyến cs, 1989) [2] Tuy nhiên trình phát triển kinh tế, xã hội nguyên nhân khác nhiều loài lan Hoàng Thảo nƣớc ta bị tuyệt chủng bị đe dọa tuyệt chủng (Vũ Ngọc Lan cs 2011) [3] Năm 2004 số lồi lan thuộc chi hồng thảo có danh lục đỏ “Sách đỏ Việt Nam” nhƣ: Thủy Tiên Hƣờng (Dendrobium amabile (Lour ƠBrien, 1990) Hạc Vĩ (Dendrobium aphyllum (Roxb.) C Fisch 1928), Ngọc Vạn Vàng (Dendrobium Chrysanthum Lindl 1830), Kim Diệp (Dendrobium fimbriatum Hook 1823), Hoàng thảo hoa Trắng – Vàng (Dendrobium nobile var albolu – teum) (Phan Thúc Huân, 1989) [4] Do vừa có giá trị làm hoa cảnh vừa làm dƣợc liệu nên nhiều loài lan địa miền trung du phía bắc bị khai thác mức vào mục đích thƣơng mại đứng trƣớc nguy bị cạn kiệt Vì việc nghiên cứu nhân giống nhằm c