CHƢƠNG 1 TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU
1.3. Tình hình nghiên cứu lan Hoàng Thảo
1.3.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới
Hiện nay nhu cầu về hoa lan trên thế giới rất lớn, ngày càng tăng việc nghiên cứu nhân giống lan Dendrobium rất đƣợc quan tâm và phát triển mạnh mẽ nhƣ:
Năm 2009, Shivani Vyas, Satyakam Guha và cộng sự đã nghiên cứu đề tài “ Tái tạo nhanh chóng cây của cây la Hoàng Thảo Kèn (Dendrobium lituiflorum)”. Nuôi cấy trên môi trƣờng KC có bổ sung dịch chiết chuối (BE) và môi trƣờng KC có bổ sung chất điều hòa sinh trƣởng BAP với các nồng độ khác nhau nghiên cứu sự nảy mần. Sau 60 ngày nuôi cấy tỉ lệ hạt này mần nhanh nhất trên môi trƣờng KC có bổ sung BE với nồng độ là 10% (v/v) , tỉ lệ này mần đạt 62 - 77% [11].
Năm 2011, trên tạp chí của trƣờng khoa Khoa học thực vật của trƣờng đại học Đại học Delhi, Delhi, Ấn Độ P. Kapoor - Pandey1, S. Vyas1 S.Guha1 và I. Usha Rao đã đăng công trình nghiên cứu “Sự hình thành cây trồng đồng bộ bằng cách sử dụng chiết xuất chuối và In vitro Hardening trong Orchid,
Dendrobium lituiflorum”.Vật liệu đƣợc sử dụng trong nghiên cứu này là các hạt lan Dendrobium lituiflorum đƣợc nuôi cấy trên các môi trƣờng KC có bổ sung dịch chiết chuối (BE) ở các nồng độ các cây đƣợc hình thành đƣợc nuôi cấy trong ống nghiệm trên môi trƣờng chất kết dính agar - agar, xốp Luffa và cocopeat: Perlite (9:1) làm ma trận hỗ trợ. Sau 30 ngày cây con đƣợc hình thành khi bổ sung BE 20% (v/v) có tỉ lệ trọng lƣợng tƣơi và khô cao đáng kể so với các nồng khác. Đặc điểm hình thái lá dài và rễ phát triển tốt hơn khi không có BE [22].
J Chang (2004) và cộng sự đã tiến hành các nghiên cứu trên cây lan Dendrobium lituiflorum để lựa chọn môi trƣờng và điều kiện tối ƣu cho nuôi cấy mô của Dendrobium lituiflorum. Phƣơng pháp: Các phƣơng tiện cơ bản, điều kiện chiếu sáng ánh sáng, phytohormone, và chiết xuất nƣớc tự nhiên. đã đƣợc thử nghiệm và so sánh. Đã kiểm tra hàm lƣợng chất diệp lục và nội dung protein đạm. Kết quả: môi trƣờng N6 thích hợp cho việc nảy mầm phôi và
tăng trƣởng. 1/2 MS + NAA 0.5 mg L -1 cordd đƣợc sử dụng nhƣ là phƣơng tiện tối ƣu sự lan truyền protocorm. Nuôi cấy 20 ngày trong bóng tối trƣớc, và sau đó trong ánh sáng là hữu ích để phôi nảy mầm. 1/2 MS + NAA 0 ~ 0.5 mg L -1 có lợi cho sự nhân rộng protocorm phần lớn. N6 + 6 BA 2,0 mg L -1 + NAA 0,5 mg L -1 + 10% nƣớc ép khoai tây rất hữu ích để tạo ra sự khác biệt. Phytohormone và nƣớc ép khoai tây đƣợc thêm vào môi trƣờng đã làm tăng hàm lƣợng chất diệp lục và hàm lƣợng protein đạm. N6 + NAA 0,5 mg L -1 + 10% nƣớc chuối là phƣơng tiện tốt nhất để làm rễ cây và củng cố [15].
Tháng 8 năm 2010, M. Maridass & cộng sự đã tiến hành nhân giống in vitro phong lan Dendrobium nanum từ nguồn vật liệu ban đầu là thân rễ. Vật liệu thân rễ đƣợc rửa bằng nƣớc cất, rửa qua ethanol 70% trong 30 giây, tiếp theo khử trùng với hypoch natri 3% (bổ sung 23 giọt Tween 80 EAC ml) trong 20 phút và sau đó rửa sạch cho 45 lần bằng nƣớc cất vô trùng. Thân rễ đƣợc trẻ ra cắt miếng nhỏ (5 mm) và các mảnh rễ đƣợc cấy trên môi trƣờng cơ bản của MS có bổ sung các kích thích tố nhƣ NAA, BAP và Kinetin. Các mẫu hình thành protocorm tốt trên môi trƣờng có chứa 2,0 μM/l NAA và 1,2 μM/l Kinetin. Sau đó protocorm phát sinh chồi tốt nhất trên môi trƣờng MS + 0,5 μM/l [16].
Năm 2012, tác giả S. Tuhuteru và cộng sự nghiên cứu về “Sự sinh trƣởng và phát triển của loài lan D. anosmum trong nuôi cấy in vitro với môi trƣờng có bổ sung thêm nƣớc dừa” đã thu đƣợc kết quả cho số lƣợng, kích thƣớc và chiều cao chồi đạt hiệu quả cao nhất trong môi trƣờng MS có bổ sung 100 ml/l nƣớc dừa [26].
1.3.2. Tình hình nghiên cứu trong nước
Tính đến cùng thời điểm thực hiện, cũng có một số tác giả đang nghiên cứu về nhân giống in vitro lan trầm D. nestor, đó là: tác giả Nguyễn Hà Phi Long, trƣờng Đại học Nông lâm thành phố Hồ Chí Minh với đề tài “Tạo phôi soma cây lan Dendrobium chịu nhiệt (D. nestor) bằng phƣơng pháp nuôi cấy
in vitro” và tác giả Nguyễn Thị Tình tại Học viện Nông nghiệp Việt Nam với luận văn: “Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân nhanh in vitro giống Lan
Hoàng Thảo Trầm Trắng”. Năm 2012, Vũ Thanh Sắc và cộng sự nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng thảo trầm trắng (D. anosmum var.alba) đã tìm ra môi trƣờng nhân nhanh chồi thích hợp nhất là: 1/2MS + đƣờng saccarozơ (20 g/l) + agar (10 g/l) + chuối xanh nghiền (120 g/l)+ nƣớc dừa (10%) + kinetin (1,5 mg/l) + than hoạt tính (1g/l) trong môi trƣờng có pH = 5,8. Trên môi trƣờng này cho hình thái chồi có màu xanh đậm, lá to, dày, khỏe. Cụm cây nuôi cấy gồm 5 cây sẽ thích hợp cho sự sinh trƣởng của cây con in vitro
[6]. Ngoài ra, còn có một số đề tài nghiên cứu nhân giống in vitro một số loài trong họ Dendrobium nhƣ:
Năm 2009, tác giả Nguyễn Văn Vinh và Nguyễn Hữu Lễ đã nghiên cứu ảnh hƣởng của chất điều hòa sinh trƣởng thực vật lên sự phát sinh chồi và rễ cây phong lan giã hạt D. anosmum. Nhóm tác giả đã tìm ra môi trƣờng nhân nhanh chồi thích hợp nhất có pH = 5,6 là: MS + đƣờng saccarozơ (30g/l) + agar (8 g/l) + cacbon hoạt tính (0,5 g/l) + BAP (0,5 mg/l) hoặc kinetin (1 mg/l), và môi trƣờng ra rễ thích hợp nhất có pH = 5,6 là: MS + đƣờng saccarozơ (30 g/l) + agar (8 g/l) + cacbon hoạt tính (0,5 g/l) + IBA (1mg/l) hoặc NAA (1mg/l) [11].
Nguyễn Thanh Tùng và cộng sự (2010), đã áp dụng phƣơng pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào trong nhân giống in vitro cây Hoàng thảo thân gãy (Dendrobium aduncum). Trong nghiên cứu của nhóm tác giả này đã dùng vật liệu khởi đầu để cắt lát mỏng theo chiều ngang TCL là chồi in vitro. Kết quả cho thấy mẫu cảm ứng tốt trên môi trƣờng ½ MS có bổ sung thêm 0,5 mg/l BA và tái sinh tốt trên môi trƣờng MS có bổ sung 3 mg/l Kinetin + 0,3 mg/l NAA.Từ protocorm tỷ lệ chồi đạt đƣợc 5,67 chồi/mẫu [9].
Năm 2016, Vũ Kim Dung, Nguyễn Văn Việt và Bi Văn Thắng đã thực hiện đề tài: Nhân giống lan Hoàng thảo Ý thảo ba màu (D. gratiosissimum reichenb.f) bằng kĩ thuật nuôi cấy in vitro. Kết quả nghiên cứu cho thấy, sát khuẩn bề mặt quả lan bằng etanol 70 trong 2 phút, khử trùng bằng dung dịch HgCl2 0,1% trong 10 phút và nuôi cấy trên môi trƣờng MS bổ sung sucrozơ 30 g/l, cho tỷ lệ mẫu sạch là 96,67 tỷ lệ phát sinh protocorm 90 với thời gian
phát sinh chồi 20 ngày. Cảm ứng tối đa chồi trên môi trƣờng BAP 0,5 mg/l, NAA 0,3 mg/l, Kinetin 0,3 mg/l, dịch chiết khoai tây 100 ml/l, nƣớc dừa 100 ml/l, sucrozơ 30 g/l, cho hệ số nhân chồi và tỷ lệ mẫu tái sinh chồi cao nhất (9,53 và 96,67) sau 4 tuần nuôi cấy. Chồi ra rễ 93,33 và chiều dài rễ trung bình 3,22 cm khi nuôi cấy trên môi trƣờng bổ sung IBA 0,2 mg/l, NAA 0,3 mg/l, dich chiết khoai tây 100 mg/l sau 5 tuần nuôi cấy [2].