Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng đến sự phát sinh thân và rễ loài lan hoàng thảo vôi trắng (dendrobiumcretaceum var alba )” giai đoạn in vitro

TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ HỒNG HẠNH “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG ĐẾN SỰ PHÁT SINH THÂN VÀ RỄ LỒI LAN HỒNG THẢO VƠI TRẮNG (Dendrobium cretaceum var alba ) GIAI ĐOẠN IN VITRO’’ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành sư phạm Sinh học Phú Thọ, 2018 TRƯỜNG ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN THỊ HỒNG HẠNH “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG ĐẾN SỰ PHÁT SINH THÂN VÀ RỄ LỒI LAN HỒNG THẢO VƠI TRẮNG (Dendrobium cretaceum var alba ) GIAI ĐOẠN IN VITRO’’ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành sư phạm Sinh học NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS TRẦN TRUNG KIÊN Phú Thọ, 2018 i LỜI CẢM ƠN Trong thời gian nghiên cứu hồn thành khóa luận, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới giảng viên hƣớng dẫn thầy giáo TS Trần Trung Kiên quan tâm hƣớng dẫn tận tình động viên em hồn thành khóa luận Em xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến thầ c gi o rung tâm nghiên cứu C ng nghệ inh h c – trƣờng ih c ng ƣơng c ng tồn thể thầy giáo Khoa Khoa h c Tự Nhiên- rƣờng i h c Hùng ƣơng t o điều kiện giúp đỡ để em thực hồn thành khóa luận Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, b n bè, ngƣời lu n bên c nh động viên, giúp đỡ em suốt trình thực hồn thành khóa luận Rất mong nhận đƣợc bảo, góp ý từ phía quý Thầ (C ) để khóa luận em đƣợc hoàn thiện đầ đủ Em xin chân thành cảm ơn! ii LỜI CAM ĐOAN i xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu khóa luận riêng tôi, kết nghiên cứu đƣợc trình bày khóa luận trung thực M i giúp đỡ cho việc thực khóa luận nà đƣợc cảm ơn c c thơng tin trích dẫn khóa luận đƣợc rõ nguồn gốc đƣợc phép công bố Phú Thọ, ngày … tháng năm 2018 Sinh viên thực Nguyễn Thị Hồng Hạnh iii MỤC LỤC Trang MỞ ẦU ính cấp thiết đề tài 01 Mục tiêu đề tài 02 Ý nghĩa khoa h c thực tiễn 02 3.1 Ý nghĩ khoa h c 02 3.2 Ý nghĩa thực tiễn 02 C ƢƠNG 1: ỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số nét giới thiệu chi Dendrobium lồi lan Hồng thảo 03 vơi trắng(Dendrobium creataceum var alba) 1.1 Một số nét giới thiệu chi Dendrobium lồi lan Hồng thảo 03 vơi trắng(Dendrobium creataceum var alba) 1.1.1 Giới thiệu chi Dendrobium 03 1.1.2 Giới thiệu lồi lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium 04 creataceum var alba) 1.2 Kĩ thuật nhân giống nuôi cấy mô- tế bào thực vật 05 1.2.1 Khái niệm 05 1.2.2 Lịch sử ph t triển kỹ thuật nhân giống nu i cấ m - 05 tế bào thực vật 1.2.3 Cơ sở khoa h c nu i cấ m - tế bào thực vật 07 1.2.4 C c giai đo n kỹ thuật nhân giống in vitro 08 1.2.5 C c điều kiện nu i cấ in vitro 09 1.2.6 M i trƣờng nuôi cấy in vitro 11 1.2.7 Tầm quan tr ng phƣơng ph p nu i cấy mô - tế bào thực vật 15 1.3 Tình hình nghiên cứu 15 1.3.1.Vai trò chất điều hòa sinh trƣởng nhân giống in vitro 15 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hoàng thảo 17 C ƢƠNG 2: ỐI ƢỢNG, NỘI DUNG À P ƢƠNG P ÁP NG IÊN CỨU iv 2.1 ối tƣợng ph m vi nghiên cứu 20 2.2 Nội dung nghiên cứu 20 2.3 Phƣơng ph p nghiên cứu 20 C ƢƠNG 3: KẾ QUẢ NG IÊN CỨU À ẢO LUẬN 3.1 Ảnh hƣởng m i trƣờng đến sinh trƣởng chồi Lan 24 hoàng thảo v i trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ phối hợp C tokinin/Auxin đến ph t triển thân, l câ lan 26 oàng thảo v i trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.2.1 Ảnh hƣởng nồng độ BAP đến ph t triển thân, l 26 câ lan oàng thảo v i trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.2.2 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, 28 lan Hoàng thảo vôi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.2.3 Ảnh hƣởng phối hợp BAP NAA đến phát triển 29 thân, lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.2.4.Ảnh hƣởng phối hợp Kinetin NAA đến phát triển 31 thân, lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.3 Ảnh hƣởng nồng độ Auxin đến khả rễ lan 33 Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.3.1 Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ lan 33 Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.3.2 Ảnh hƣởng nồng độ IAA đến khả rễ lan 35 Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.3.3 Ảnh hƣởng phối trộn NAA IAA đến khả rễ 37 lan Hoàng thảo vôi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) KẾ LUẬN À KIÊN NG Ị 39 Kết luận 39 2.Kiến nghị 39 ÀI LIỆU AM K ẢO v DANH MỤC VIẾT TẮT BAP C : Benzylamino purine : ối chứng IAA : Indole acetic acid KC : Knudson C MS : Murashige & Skoog NAA : Naphthaleneacetic acid TDZ : Thidiazuzon vi DANH MỤC BẢNG Tên bảng Bảng 3.1 Ảnh hƣởng m i trƣờng đến sinh trƣởng chồi Bảng 3.2 Ảnh hƣởng nồng độ BAP đến phát triển thân, Bảng 3.3 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin đến phát triển Trang 24 26 28 thân, Bảng 3.4 Ảnh hƣởng phối trộn BAP NAA đến 30 phát triển thân, Bảng 3.5 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin kết hợp với NAA 32 Bảng 3.6 Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ 33 Bảng 3.7 Ảnh hƣởng nồng độ IAA đến khả rễ 35 Bảng 3.8 Ảnh hƣởng phối trộn NAA IAA đến khả 37 rễ vii DANH MỤC HÌNH Tên hình Trang ình 3.1.1 Ảnh hƣởng m i trƣờng đến sinh trƣởng chồi 24 ình 3.1.2 25 thị ảnh hƣởng m i trƣờng đến sinh trƣởng chồi ình 3.1.3 Ảnh hƣởng m i trƣờng đến tỉ lệ chồi 25 ình 3.2.1 Ảnh hƣởng nồng độ BAP đến phát triển thân 27 ình 3.2.2 Ảnh hƣởng nồng độ BAP đến phát triển thân 27 ình 3.3.1 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, 29 ình 3.3.2 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, 29 ình 3.4.1 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, 31 ình 3.4.2 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, 31 ình 3.5.1 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin kết hợp với NAA 32 ình 3.5.2 Ảnh hƣởng nồng độ Kinetin kết hợp với NAA 32 Hình 3.6.1 Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ 34 Hình 3.6.2 Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ 34 Hình 3.6.3 Ảnh hƣởng nồng độ NAA đến khả rễ 35 Hình 3.7.1 Ảnh hƣởng nồng độ IAA đến chiều dài rễ 36 Hình 3.7.2 Ảnh hƣởng nồng độ IAA đến khả rễ 36 Hình 3.7.3 Ảnh hƣởng nồng độ IAA đến khả rễ 36 Hình 3.8.1 Ảnh hƣởng phối trộn NAA IAA đến 37 chiều dài rễ Hình 3.8.2 Ảnh hƣởng phối trộn NAA IAA đến 38 khả rễ Hình 3.8.3 Ảnh hƣởng phối trộn NAA IAA đến chiều dài rễ 38 MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Phong lan biết đến loài hoa đẹp mang nhiều ý nghĩa người ưa chuộng Phong lan thường dùng làm cảnh trang trí, số lồi có tác dụng chữa bệnh Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) thuộc chi Hồng thảo (Dendrobium) có mùi thơm nhẹ nhàng mùi hoa nhài dễ chịu, đẹp nên nhiều người yêu thích lựa chọn Tuy nhiên, số lượng lồi tự nhiên cịn khó nhân giống phương pháp thơng thường [4] Để hạn chế việc khai thác mức lan Hồng thảo vơi trắng ngồi tự nhiên để bảo tồn lồi lan q, ngày với phát triển công nghệ sinh học, vi nhân giống (in vitro) công cụ đắc lực việc bảo tồn phát triển loài lan q Hơn cịn cơng trình nghiên cứu giới lồi lan đặc biệt Việt Nam chưa tìm thấy cơng trình nghiên cứu lồi lan Hồng thảo vơi đột biến trắng Nhân giống in vitro phương pháp nhân giống mang lại nhiều ưu điểm như: hệ số nhân giống cao, tạo đồng mặt di truyền, bệnh, đồng thời có tiềm sinh học cao mà lại khơng tốn diện tích nhân giống Trong nhân giống in vitro, ngồi mơi trường ni cấy bản, người ta thường bổ sung thêm vào môi trường nuôi cấy vitamin, chất điều hịa sinh trưởng, đường, than hoạt tính, nước ép loại hoa như: chuối, nước dừa, khoai tây…Trong đó, chất điều hịa sinh trưởng có ảnh hưởng lớn đến phát sinh chiều cao cây, chất lượng cây, có ảnh hưởng lớn tới khả rễ Chính chúng tơi lựa chọn thực đề tài: “Nghiên cứu ảnh hƣởng số chất điều hòa sinh trƣởng đến phát sinh thân rễ lồi lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba )” giai đoạn in vitro 27 27,52 mm; bổ sung BAP mơi trường ni cấy chiều dài thân có tăng lên Cụ thể từ 1mg/l BAP lên 1,5 mg/l BAP chiều dài thân tăng từ 31,39 mm lên 34,10 mm Nhưng tăng nồng độ BAP lên mg/l 2,5 mg/l chiều dài thân lại giảm từ 30,46 mm xuống 29,73 mm Do nhân giống in vitro cần đặc biệt quan tâm đến việc bổ sung hợp lí chất kích thích sinh trưởng nồng độ thích hộ cho giai đoạn Đối với chiều dài lá; số khối lượng tươi có thay đổi rõ rệt thay đổi nồng độ BAP Chiều dài cao đạt 19,08 mm nồng độ 1,5 mg/l BAP; số đạt trung bình 4,53 lá; khối lượng tươi đạt 1,44 g chiều dài thấp đạt 15,45 mm công thức đối chứng; số lá; khối lượng tươi nặng 1,13 g 40 34.1 Chiều dài (mm) 35 30 31.39 30.46 27.52 29.73 Chiều dài thân Chiều dài 25 20 18.19 19.08 15,45 16.48 16.24 15 10 B0 B1 B2 B3 B4 Cơng thức Hình 3.4 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến phát triển thân Hình 3.5 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến phát triển thân 28 Từ kết phân tích nhận thấy thí nghiệm công thức đối chứng nhận giá trị nhỏ nhất, cơng thức B2 cơng thức thích hợp để phát triển thân lan Hồng thảo vơi trắng 3.2.2 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) Kinetin loại phytohoocmon kích thích sinh trưởng thuộc nhóm Cytokinin Giống BAP, Kinetin có vai trị quan trọng q trình phát sinh phát triển chồi Trong thí nghiệm có thay đổi nồng độ bổ sung vào mơi trường nuôi cấy từ mg/l (K1); 1,5 mg/l (K2); 2,0 mg/l (K3); 2,5 mg/l (K4) vào môi trường nuôi cấy Sau tuần quan sát theo dõi thu kết sau: Bảng 3.3 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, Công Chiều dài Chiều dài thức thân (mm) (mm) K0 27,25± 1,33 15,45± 0,87 3,03± 0,44 1,20± 0,31 K1 29,55± 1,24 15,49± 0,92 3,20± 0,23 1,31± 0,36 K2 31,23± 1,32 15,97± 0,98 3,63± 0,34 1,98± 0,38 K3 34,25± 1,40 17,86± 1,06 4,80± 0,52 2,20± 0,54 K4 30,96± 1,17 17,92± 1,07 3,56± 0,50 1,96± 0,37 Số lá/ Khối lượng tươi (g) Từ bảng 3.3 ta thấy có khác biệt chiều dài thân thay đổi nồng độ Kinetin Chiều dài thân đạt giá trị cao nồng độ mg/l Kinetin (K3) thấp công thức đối chứng (K0) Khi tăng nồng độ Kinetin từ mg/l đến mg/l chiều dài thân tăng lên từ 29,55 mm đến 34,25 mm; chiều dài tăng từ 15,49 mm; 15,97 mm đến 17,86 mm Tuy nhiên tăng nồng độ Kinetin lên 2,5 mg/l chiều dài thân lại có xu hướng giảm xuống 30,96 mm; chiều dài lại giảm xuống 17,92 mm Số khối lượng tươi tăng mức độ khác Số lượng tăng theo từ 3,2 lá; 3,63 lá; 4,8 lá/ Khối lượng tươi đạt giá 29 trị từ 1,31 g; 1,98 g; 2,20 g Tuy nhiên tăng nồng độ Kinetin lên 2,5 mg/l thì; số trung bình 3,56 lá; khối lượng trung bình 1,96 g Như vậy, công thức K3 với nồng độ mg/l Kinetin chiều dài lá, số khối lượng tươi đạt giá trị cao 40 34.25 Chiều dài (mm) 35 30 27.25 31.23 29.55 30.96 25 20 15.45 15.49 15.97 17.86 17.92 15 Chiều dài thân Chiều dài 10 K0 K1 K2 Cơng thức K3 K4 Hình 3.6 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, Hình 3.7 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, 3.2.3 Ảnh hưởng phối hợp BAP v NAA đến phát triển thân, lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) Thí nghiệm thực đánh giá ảnh hưởng nồng độ BAP đến phát triển thân nhiên chưa có kết hợp với với chất điều hòa sinh trưởng khác nên thí nghiệm này, tơi sử dụng BAP với nồng độ mg/l (BN1); 1,5 mg/l (BN2); mg/l (BN3); 2,5 mg/l (BN4) kết 30 hợp với 0,5 mg/l NAA để so sánh với công thức đối chứng (BN0), điều kiện không sử dụng chất điều hịa sinh trưởng, mơi trường Sau tuần quan sát đánh giá, kết thu thập thống kê bảng đây: Bảng 3.4 Ảnh hưởng phối trộn BAP NAA đến phát triển thân, Công Chiều dài Chiều dài thức thân (mm) (mm) BN0 27,52± 1,57 15,45± 0,87 3,00± 0,37 1,13± 0,18 BN1 29,23± 1,01 15,93± 1,05 3,13± 0, 34 1,35± 0,21 BN2 31,26± 1,21 16,61± 1,05 3,60± 0,49 1,44± 0,24 BN3 34,47± 1,27 17,40± 0,98 4,87± 0,50 1,60± 0,29 BN4 30,46± 1,07 16,76± 0,99 3,53± 0,50 1,46± 0,28 Số lá/ Khối lượng tươi (g) Qua bảng số liệu 3.4 ta thấy sử dụng phối hợp BAP với NAA kết chiều dài thân, chiều dài lá, số lá, khối lượng tương đối đồng Cụ thể tăng nồng độ từ mg/l BAP đến mg/l BAP phối trộn với 0,5 mg/l NAA chiều dài thân tăng dần theo thứ tự: 29,23 mm; 31,26 mm; 34,47 mm; chiều dài tăng từ 15,93 mm đến 17,40 mm tăng nhiều so với công thức môi trường nền; chiều dài thân chiều dài đạt giá trị cao sử dụng mg/l BAP phối trộn với 0,5 mg/l NAA (BN3) Tuy nhiên tăng tiếp nồng độ BAP lên 2,5 mg/l lại thấy chiều dài thân bị giảm xuống 30,46 mm chiều dài lại giảm xuống 16,76 mm Tương tự, từ nồng độ mg/l đến mg/l số tăng từ 3,13 đến 4,87 lá; khối lượng tăng từ 1,33 g đến 1,60 g Tuy nhiên, tăng nồng độ BAP lên 2,5 mg/l số giảm cịn 3,53 khối lượng tươi 1,46 g Như qua bảng phân tích số liệu hình ảnh ta thấy công thức mg/l BAP phối trộn với 0,5 mg/l NAA (BN3) cho chiều dài thân cây, chiều 31 dài lá, số lá, khối lượng tươi đạt kết cao nhất, thích hợp cho sinh trưởng phát triển thân 40 34.47 Chiều dài (mm) 35 30 27.52 31.26 29.23 30.46 25 20 15.45 15.93 16.61 17.4 16.76 15 10 Chiều dài thân Chiều dài BN0 BN1 BN2 BN3 BN4 Công thức Hình 3.8 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, Hình 3.9 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến phát triển thân, 3.2.4 Ảnh hưởng phối hợp Kinetin v NAA đến phát triển thân, lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) Tương tự thí nghiệm phối hợp BAP NAA, thí nghiệm tơi phối trộn Kinetin với nồng độ mg/l (KN1); 1,5 mg/l (KN2); mg/l (KN3); 2,5 mg/l (KN4) kết hợp với 0,5 mg/l NAA để so sánh với công thức đối chứng, điều kiện khơng sử dụng chất điều hịa sinh trưởng, điều kiện môi trường 32 Sau tuần kết quan sát đánh giá kết thu thập thống kê bảng đây: Bảng 3.5 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin kết hợp với NAA Công Chiều dài Chiều dài thức thân (mm) (mm) KN0 27,52± 1,57 15,45± 0,87 3,00± 0,37 1,13± 0,18 KN1 31,19± 1,03 15,83± 1,00 3,27± 0,44 1,54± 0,18 KN2 31,30± 1,17 17,62± 0,98 3,27±0,57 1,53± 0,22 KN3 41,55± 1,28 23,43± 1,07 4,80± 0,54 2,75± 0,21 KN4 35,56± 1,02 17,29± 0,96 3,33± 0,60 1,96± 0,22 Chiều dài (mm) 50 Số lá/ 20 tươi (g) 41.55 40 30 Khối lượng 27.52 35.56 31.3 31.19 23.43 15.45 15.83 17.62 17.29 Chiều cao 10 KN0 KN1 KN2 Cơng thức KN3 KN4 Hình 3.10 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin kết hợp với NAA Hình 3.11 Ảnh hưởng nồng độ Kinetin kết hợp với NAA Qua bảng số liệu 3.5 hình 3.5.1, hình 3.5.2 ta thấy sử dụng phối hợp Kinetin với NAA kết chiều dài thân, chiều dài lá, số lá, khối lượng tương đối đồng Cụ thể tăng nồng độ từ mg/l 33 Kinetin đến mg/l Kinetin phối trộn với 0,5 mg/l NAA chiều dài thân tăng dần theo thứ tự: 31,19 mm; 31,30 mm; 41,55 mm; chiều dài tăng từ 15,83 mm đến 23,43 mm; chiều dài thân chiều dài đạt giá trị cao sử dụng mg/l Kinetin phối trộn với 0,5 mg/l NAA (KN3) Tuy nhiên tăng tiếp nồng độ Kinetin lên 2,5 mg/l lại thấy chiều dài thân bị giảm xuống 35,56 mm chiều dài lại giảm xuống 17,29 mm Số tăng từ 3,27 đến 4,8 từ nồng độ mg/l đến mg/l; khối lượng tăng từ 1,54 g đến 2,75 g Tuy nhiên, tăng nồng độ Kinetin lên 2,5 mg/l số giảm 3,33 khối lượng tươi cịn 1,96 g Như qua bảng phân tích số liệu hình ảnh ta thấy sử dụng mg/l Kinetin phối hợp với 0,5 mg/l NAA chiều dài thân cây, chiều dài lá, số lá, khối lượng tươi đạt kết cao nhất, thích hợp cho sinh trưởng phát triển thân 3.3 Ảnh hƣởng nồng độ Auxin đến khả rễ lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) 3.3.1 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ lan Hoàng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) Trong thí nghiệm tơi tiến hành cấy lan Hồng thảo vơi trắng vào mơi trường KC có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng NAA với nồng độ khác là: 0,5 mg/l (N1); mg/l (N2); 1,5 mg/l (N3); mg/l (N4) Tiến hành theo dõi mẫu cấy thu kết bảng thống kê sau: Bảng 3.6 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Công Chiều dài rễ Số rễ N0 21,25± 0,97 1,93± 0,25 N1 23,06± 1,01 2,47± 0,50 N2 24,24± 0,82 3,20± 0,54 N3 31,66± 1,07 3,47± 0,50 N4 25,50± 0,72 3,33± 0,47 thức 34 Qua bảng số liệu ta thấy bổ sung nồng độ NAA khác có thay đổi khác nhau, số lượng chiều dài rễ tăng so với đối chứng Cụ thể tiến hành bổ sung NAA với nồng độ 0,5 mg/l; 1,0 mg/l; 1,5 mg/l; 2,0 mg/l vào mơi trường thu kết chiều dài rễ 23,06 mm; 24,24 mm; 31,66 mm; 25,40 mm Trong cơng thức N3 đạt giá trị chiều dài cao nhất, cao đối chứng 10,41 mm Số lượng rễ trung bình tăng từ 2,47 rễ; 3,2 rễ; 3,47 rễ; 3,33 rễ/ Chiều dài (mm) 40 31.66 30 21.25 23.06 25.5 24.24 Chiều dài rễ 20 10 N0 N1 N2 Cơng thức N3 N4 Hình 3.12 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ 3.2 Số rễ 3.47 3.33 2.47 1.93 Số rễ N0 N1 N2 N3 N4 Cơng thức Hình 3.13 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ Hình 3.14 Ảnh hưởng nồng độ NAA đến khả rễ 35 Như vậy, qua bảng 3.6 hình 3.6.1, hình 3.6.2 ta nhận thấy nồng độ 1,5 mg/l (N3) nồng độ phù hợp để phát triển rễ 3.3.2 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến khả rễ lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) Trong thí nghiệm tơi tiến hành cấy lan Hồng thảo vơi trắng vào mơi trường KC có bổ sung chất điều hịa sinh trưởng IAA với nồng độ khác là: 0,5mg/l; 1mg/l; 1,5mg/l; 2mg/l Tiến hành theo dõi mẫu cấy thu kết bảng thống kê sau: Bảng 3.7 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến khả rễ Công Chiều dài rễ (mm) Số rễ/ I0 21,25± 0,97 1,93± 0,25 I1 23,40± 1,19 3,53± 0,50 I2 29,50± 0,80 3,67± 0,47 I3 24,13± 1,18 3,33± 0,47 I4 24,68± 1,04 3,27± 0,44 thức Qua bảng số liệu ta thấy bổ sung nồng độ IAA khác có thay đổi khác nhau, số lượng chiều dài rễ tăng so với đối chứng Cụ thể tiến hành bổ sung IAA với nồng độ từ 0,5 mg/l; 1,0 mg/l vào mơi trường chiều dài rễ tăng từ 23,4 mm; 29,5 mm; số rễ tăng từ 3,53 rễ/ đến 3,67 rễ/ Tuy nhiên tăng nồng độ IAA từ 1,5 mg/l đến mg/l chiều dài rễ lại giảm dần 24,13 mm; 24,68 mm; số lượng rễ giảm xuống 3,33 rễ/ 3,27 rễ/ 36 Chiều dài rễ (mm) 35 29.5 30 25 21.25 24.68 24.13 23.4 20 15 Chiều dài rễ 10 I0 I1 I2 Cơng thức I3 I4 Hình 3.15 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến chiều dài rễ 3.53 3.67 3.33 3.27 Số rễ 1.93 Số rễ I0 I1 I2 Cơng thức I3 I4 Hình 3.16 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến khả rễ Hình 3.17 Ảnh hưởng nồng độ IAA đến khả rễ Như vậy, qua bảng 3.7, hình 3.7.1 hình 3.7.2 ta nhận thấy bổ sung nồng độ mg/l IAA vào môi trường rễ phát triển tốt 3.3.3 Ảnh hƣởng phối h p NAA IAA đến khả rễ lan Hồng thảo vơi trắng (Dendrobium cretaceum var alba) NAA IAA hai phytohoocmon thuộc nhóm Auxin có ảnh hưởng tốt đến rễ thực vật Vì thí nghiệm tiến hành phối 37 trộn NAA IAA vào môi trường để đánh giá khả rễ Sau tuần nuôi cấy kết bảng thống kê sau: Bảng 3.8 Ảnh hưởng phối trộn NAA IAA đến khả rễ Công Chiều dài rễ Số rễ NI0 21,25± 0,97 1,93± 0,25 NI1 29,22± 0,96 3,57± 0,49 NI2 35,68± 0,93 4,33± 0,47 thức Qua bảng số liệu thấy rằng, tăng trưởng chiều dài rễ môi trường bổ sung kết hợp 0,5 mg/l NAA 0,5 mg/l IAA 29,22 mm cao đối chứng 7,97 mm; số rễ đạt 3,57 rễ/ cao đối chứng 1,64 rễ/ cây.Còn bổ sung kết hợp mg/l NAA mg/l IAA chiều dài rễ số rễ/ tăng mạnh, cụ thể chiều dài rễ 35,68 mm cao so với đối chứng Chiều dài rễ (mm) 14,43 mm; số rễ đạt 4,33 rễ/ cao đối chứng 2,4 rễ/ 40 35.68 29.22 30 21.25 20 Chiều dài rễ 10 NI0 NI1 NI2 Cơng thức Hình 3.18 Ảnh hưởng phối trộn NAA IAA đến chiều dài rễ 4.33 3.57 Số rễ Số rễ 1.93 NI0 NI1 NI2 Cơng thức Hình 3.19 Ảnh hưởng phối trộn NAA IAA đến khả rễ 38 Hình 3.20 Ảnh hưởng phối trộn NAA IAA đến khả rễ Như vậy, bổ sung mg/l NAA phối trộn với 1mg/l IAA cho khả rễ cao thí nghiệm 39 KẾT LUẬN VÀ KIÊN NGHỊ Kết luận Khi so sánh môi trường nghiên cứu khác nhau, môi trường KC bổ sung 30 g/l đường + 6,5 g agar + 150 ml/l nước dừa + 60 g/l khoai tây + 0,5 g/l than hoạt tính mơi trường thích hợp tỉ lệ chồi cao (100%), phát triển chiều cao đạt kết cao (30,08 mm), phát triển tốt (20,33 mm) Sau tuần nuôi cấy, kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng lên phát sinh thân, lá, rễ cho thấy: Khi bổ sung thêm chất điều hòa sinh trưởng khác nồng độ khác mơi trường KC có bổ sung 2,0 mg/l Kinetin 0,5 mg/l NAA mơi trường thích hợp cho sinh trưởng thân lan Hồng thảo vơi trắng Mơi trường KC có bổ sung 1,0 mg/l NAA 1,0 mg/l IAA môi trường thích hợp cho phát sinh rễ lan Hồng thảo vơi trắng Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu giai đoạn để hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro lồi lan Mở rộng nghiên cứu với tiêu, môi trường giai đoạn khác loài lan Hoàng thảo vôi trắng 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tham khảo tiếng việt [1] Trần Văn Bảo (2002), Kỹ thuật nuôi trồng phong lan, NXB Trẻ [2] Nguyễn Văn Hai, Lương Trọng Nhàn (2013), Kĩ thuật trồng lan Dendrobium, NXB Thời đại [3] Trần Hợp (1993), Phong lan có hương thơm, NXB Khoa học kỹ thuật [4] Trần Hợp (1998), Phong lan Việt Nam, NXB Nông nghiệp, TP Hồ Chí Minh [5] Nguyễn Như Khanh, Cao Phi Bằng (2009), Giáo trình sinh lý thực vật, NXB Giáo Dục [6] Dương Công Kiên (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật, NXB TP.Hồ Chí Minh [7] Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Thị Lý Anh (2013), Nhân giống in vitro loài Lan địa Dendrobium nobile Lindl, Tạp chí Khoa học Phát triển, 11(7), tr 917-925 [8] Hoàng Thị Sản (2011), Phân loại học thực vật, NXB Giáo dục Việt Nam [9] Vũ Thanh Sắc, Nguyễn Thị Thu Huyền, Lê Thị Lý (2012), Nghiên cứu nhân giống in vitro lan Hồng thảo trầm trắng (D anosmum var.alba), Tạp chí khoa học công nghệ, Đại học Thái Nguyên, 93(05), tr 131-135 [10] Nguyễn Văn Song cộng (2011), Nhân nhanh in vitro lan Kim Điệp (Dendrobium Chrysotoxum) – Một loài lan rừng có nguy tuyệt chủng, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, số 64 [11] Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh Nguyễn Thị Phương Thảo, (2005), Giáo trình cơng nghệ sinh học nơng nghiệp, NXB Nơng Nghiệp [12] Nguyễn Thị Tình (2015), Nghiên cứu nhân giống Lan Thạch Hộc (Dendrobium nobile Lindl) ống nghiệm từ phơi, Tạp chí Nơng nghiệp Phát triển Nơng thơn tháng 11 năm 2015, tr 44-52 [13] Nguyễn Văn Vinh, Nguyễn Hữu Lễ (2009), Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật lên phát sinh chồi rễ Phong lan giả hạc D anosmum, Tạp chí khoa học công nghệ, tập 47, số 5, 2009 Tr 99- 100 41 [14] Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp, (2005), Công nghệ sinh học tế bào, tập 2, NXB Giáo dục, Hà Nội Tài liệu tham khảo tiếng nƣớc [15] Bijaya Pant, Deepa Thapa (2012), In vitro mass propagation of an epiphytic orchid, Dendrobium primulinum Lindl.through shoot tip culture, African Journal of Biotechnology, Vol 11(42), pp 9970-9974 [16] Jaime A Teixeira da Silva, Jean Carlos Cardoso, Judit Dobra´nszki, Songjun Zeng (2015), Dendrobium micropropagation: a review, Plant Cell Rep (2015) 34:671–704 DOI 10.1007/s00299-015-1754-4 [17] Kaewduangta W, PraneeReamkatog (2011), Effect of Modification Medium on Growth Development of D parishii In vitro, AmericanEurasian J Agric & Environ Sci., 11 (1): 117-121 [18] Kalimuthu K, Senthilkumar R And Vijayakumar S (2007) In vitro micropropagation of orchid, Oncidium sp (Dancing Dolls), African Journal of Biotechnology Vol (10), pp 1171-1174 [19] Tuhuteru S (2012), “Growth and development of D anosmum orchid on in vitro culture media with several coconut water concentrations”, Agrologia, Vol 1, No 1, April 2012, hal 1-12 ... THỊ HỒNG HẠNH “NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG ĐẾN SỰ PHÁT SINH THÂN VÀ RỄ LỒI LAN HỒNG THẢO VƠI TRẮNG (Dendrobium cretaceum var alba ) GIAI ĐOẠN IN VITRO? ??’ KHÓA LUẬN... nghi n cứu - Đánh giá ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng chồi in vitro lan Hoàng thảo vôi trắng - Đánh giá ảnh hưởng nồng độ phối hợp chất điều hòa sinh trưởng đến phát sinh thân, in vitro lan. .. giá ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng chồi in vitro lan Hồng thảo vơi trắng Đánh giá ảnh hưởng nồng độ phối hợp chất điều hòa sinh trưởng đến phát sinh thân, in vitro lan Hồng thảo vơi trắng