nghiên cứu sự phát triển cơ quan lympho của cá tra pangasianodon hypophthalmus từ 1 đến 30 ngày tuổi

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN ĐẶNG THANH PHONG NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT TRIỂN CƠ QUAN LYMPHO CỦA CÁ TRA Pangasianodon hypophthalmus TỪ ĐẾN 30 NGÀY TUỔI LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN 2009 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN ĐẶNG THANH PHONG NGHIÊN CỨU SỰ PHÁT TRIỂN CƠ QUAN LYMPHO CỦA CÁ TRA Pangasianodon hypophthalmus TỪ ĐẾN 30 NGÀY TUỔI LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN TỪ THANH DUNG 2009 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com LỜI CẢM TẠ Tác giả xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến cô Từ Thanh Dung nhiệt tình giúp đỡ, hướng dẫn đóng góp nhiều kinh nghiệm quý báu suốt thời gian thực đề tài Xin trân trọng cảm ơn quý thầy cô khoa Thủy Sản trường Đại Học Cần Thơ tạo môi trường tốt học tập, trao dồi đạo đức, truyền đạt kiến thức nhiều kinh nghiệm thực tế suốt trình rèn luyện nhà trường Tác giả xin chân thành cảm ơn gia đình Bác Nắm (Hồng Mỹ) – Thị Trấn Hồng Ngự, tỉnh Đồng Tháp giúp đỡ chỗ ăn, ở, phương tiện điều kiện nghiên cứu thuận tiện suốt thời gian thu mẫu địa phương thuộc thị trấn Hồng Ngự Xin gởi lời cảm tạ đến anh Huỳnh Chí Thanh khuyến ngư huyện Hồng Ngự, tất bạn lớp Bệnh học thủy sản K.31 anh em P2C12, ký túc xá trường Đại Học Cần Thơ quan tâm, giúp đỡ ủng hộ trình học tập thực đề tài i PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com TĨM TẮT Cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) đối tượng ni quan trọng Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) Tuy nhiên thông tin khoa học hệ miễn dịch chưa có tác giả cơng bố để làm sở cho việc phòng bệnh cho cá Việc nghiên cứu đề tài nhằm mục tiêu tìm hiểu phát triển quan lympho cá tra Pangasianodon hypophthalmus từ đến 30 ngày tuổi sau nở Thu mẫu cá từ đến 30 ngày tuổi trực tiếp ao ương, ngày tuổi thu từ – 30 cá Bên cạnh đó, theo dõi trình hoạt động cá, chế độ quản lý chăm sóc ao, hàng tuần kiểm tra yếu tố môi trường nhiệt độ đo ngày Nghiên cứu sử dụng phương pháp mô học (Haematoxylin & Eosin) quan lympho thận,tuyến ức tỳ tạng Kết nghiên cứu tìm thấy thận xuất cá ngày tuổi sau nở; tuyến ức quan sát cá ngày tuổi cuối tỳ tạng tìm thấy cá 21 ngày tuổi Trong suốt thời gian ương ni yếu tố mơi trường nằm khoảng cho phép thích hợp cá phát triển Kết góp phần làm sở khoa học cho việc nghiên cứu hệ thống miễn dịch cá tra nhằm tìm giải pháp phịng bệnh truyền nhiễm cách tích cực có hiệu ii PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com MỤC LỤC LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH HÌNH iv Chương I: GIỚI THIỆU Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương II: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược đặc điểm cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) 2.2 Lịch sử tiến hóa quan lymphoid 2.3 Sự tiến hoá phát triển tế bào lympho 2.4 Các quan lymphoid 2.4.1 Tỳ tạng (spleen) 2.4.2 Cơ quan thymus (tuyến ức) 2.4.3 Thận (kidney) 2.5 Sự hình thành quan lymphoid 2.6 Một số thành tựu phương pháp mô học 10 Chương III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 13 3.2 Vật liệu nghiên cứu 13 3.2.1 Dụng cụ 13 3.2.2 Hoá chất 13 3.3 Phương pháp nghiên cứu 13 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 13 3.3.2 Phương pháp cắt mẫu 13 3.3.3 Phương pháp cố định mẫu 14 3.3.4 Phương pháp làm tiêu mô 14 3.4 Đọc kết 17 Chương IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 4.1 Thông tin chung hộ nuôi 18 4.2 Các tiêu môi trường ao ương 19 4.3 Sự phát triển quan Lympho 20 iii PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 4.3.1 Thận 20 4.3.2 Tuyến ức (thymus) 24 4.3.3 Tỳ tạng 26 Chương V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 28 5.1 Kết luận 28 5.2 Đề xuất 28 TÀI LIỆU THAM KHẢO 29 PHỤ LỤC I 32 PHỤ LỤC II 33 PHỤ LỤC III 34 iv PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com DANH SÁCH HÌNH Hình 3.1 Khối paraffin trước cắt 16 Hình 3.2 Vị trí tuyến ức 18 Hình 4.1 Cơng tác cải tạo ao giai đoạn cá hương 19 Hình 4.2 Thận cá tra qua giai đoạn 22 Hình 4.3 Cấu trúc thận qua giai đoạn cá 23 Hình 4.4 Tuyến ức cá tra qua giai đoạn 25 Hình 4.5 Cấu trúc tỳ tạng cá 21 ngày tuổi 28 v PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com CHƯƠNG I GIỚI THIỆU Ngành nuôi trồng thuỷ sản (NTTS) Việt Nam (VN) nói chung Đồng Bằng Sơng Cửu Long (ĐBSCL) nói riêng phát triển mạnh mẽ Trong đó, đối tượng ni nước nuôi nhiều cá tra (Pangasianodon hypophthalmus), không cung cấp thực phẩm nước mà mặt hàng xuất nhiều nước giới Theo Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn (NN&PTNT), năm 2008 lượng cá tra xuất VN đạt 657.000 tấn, đạt kim ngạch 1,48 tỉ USD, chiếm đến 32,1% tổng kim ngạch xuất thủy sản nước Cá tra, ba sa điểm sáng tranh xuất thủy sản Việt Nam (htt://antg.cand.com.vn) Nhưng q trình mở rộng diện tích ni thiếu quy hoạch không đồng kéo theo nhiều vấn đề xảy đặc biệt tình hình dịch bệnh Ở cá nuôi, nhiều loại bệnh truyền nhiễm xuất gây thiệt hại nghiêm trọng cho nghề nuôi cá tra Điển hình, bệnh mủ gan vi khuẩn Edwardsiella ictaluri gây làm thiệt hại lớn cho người nuôi tỉnh đồng sông Cửu Long, tỷ lệ cá chết bị bệnh lên đến 90% (http://www.anova.com.vn) Theo nghiên cứu Ferguson et al., 2001 Dung et al., 2004 cho loài vi khuẩn đặc thù gây bệnh chủ yếu cá da trơn ni cơng nghiệp, cịn theo Mitchell (1997) xác định E ictaluri tác nhân gây bệnh nhiễm trùng máu (Enteric septicaemia of catfish: ESC) cá nheo mỹ (Ictalurus punctatus), gây hao hụt 60% năm thiệt hại 50 triệu USD Việc dùng kháng sinh trị bệnh mang lại hiệu dùng thuốc liều chẩn đoán tác nhân gây bệnh, thực tế người nuôi sử dụng bừa bãi, không liều lượng loại kháng sinh nên gây trạng kháng thuốc tình hình dịch bệnh trở nên trầm trọng (Dung ctv, 2008) Do đó, việc phịng bệnh quản lý tốt môi trường nuôi, giống tốt, chế độ dinh dưỡng hợp lý…, đặc biệt việc nghiên cứu hệ miễn dịch Đây biện pháp phòng bệnh hữu hiệu Việc nghiên cứu có hiệu hay không phụ thuộc vào sản xuất tế bào tham gia đáp ứng miễn dịch độ tuổi cá Ở cá xương, tế bào lympho (tế bào B, T) tạo kháng thể (IgM, IgH,…) tham gia vào hệ thống đáp ứng miễn dịch sản xuất từ quan lympho thymus, tỳ tạng, thận trước (Nadia et al., 2002; Magnadottir et al , 2005) Theo Merete et al., 1998, cho quan lympho cá phát triển hoàn chỉnh sau cá hồn thành q trình biến thái Các quan lymphoid thận trước, thymus tỳ tạng phát triển suốt PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com giai đoạn ấu trùng (Padros et al., 1996) hình thành quan lympho loài cá nước sớm so với loài cá nước mặn (Doggett et al., 1987; Chantanachookhin et al., 1991) Mãi đến năm 2001, Lora et al , nghiên cứu hình thành quan lymphoid cá nheo Mỹ cho thấy tế bào có chức miễn dịch quan tạo máu thuộc thận thymus xuất lúc nở, tỳ tạng ngày sau nở Gần đây, Sonal et al., 2008 nghiên cứu hình thành quan lympho cá bơn Đại Dương (Hippoglossus hippoglossus L.) cho kết thận xuất cá ngày tuổi, quan thymus 33 ngày tuổi tỳ tạng 49 ngày tuổi Cho đến nay, chưa có tác giả cơng bố nghiên cứu phát triển quan lymphoid cá tra Vì thế, đề tài “Nghiên cứu phát triển quan lymphoid giai đoạn giống cá tra Pangasianodon hypophthalmus” thực nhằm mục tiêu: Tìm hiểu phát triển quan lympho cá tra từ đến 30 ngày tuổi từ làm sở khoa học để nghiên cứu hình thành hệ miễn dịch góp phần vào việc sử dụng hệ miễn dịch có hiệu phòng bệnh cho cá Nội dung nghiên cứu - Theo dõi, thu mẫu ghi nhận phát triển thay đổi hình thái cá tra từ đến 30 ngày tuổi Thị Trấn Hồng Ngự, tỉnh Đồng Tháp - Xác định phát triển quan lympho cá tra phương pháp nhuộm mô học (Haematoxylin & Eosin) PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược đặc điểm cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) Cá tra phân bố nhiều lưu vực sông Mê Kông nước Lào, Campuchia, Việt Nam Thái Lan Ở nước ta năm trước chưa có cá sinh sản nhân tạo, cá bột vớt sông Tiền sông Hậu Khảo sát chu kỳ di cư cá tra địa phận Campuchia cho thấy cá ngược dòng từ tháng 10 đến tháng di cư vào hạ lưu tháng đến tháng hàng năm (Phạm Văn Khánh, 2006) Cá tra sống chủ yếu nước ngọt, sống vùng nước nhạt lợ (nồng độ muối từ 0,7 đến 1%), chịu đựng nước phèn có pH >5, dễ chết nhiệt độ 150C chịu nóng tới 390C (Phạm Văn Khánh, 1996) Cá tra hết nỗn hồng thích ăn mồi tươi sống, chúng ăn lẫn Dạ dày to ngắn đặc điểm cá có tập tính ăn tạp thiêng động vật Khi cá lớn, điều kiện thiếu thức ăn cá bắt buộc ăn thức ăn khác mùn bã hữu cơ, thức ăn có nguồn gốc động vật Cá tra có tốc độ tăng trưởng tương đối nhanh, cá nhỏ tăng nhanh chiều dài Cá ương ao sau tháng đạt chiều dài từ 10-12 cm (trọng lượng 14-15 g) Cá lớn đạt cỡ 2,5 kg trở lên, mức tăng trọng lượng nhanh so với chiều dài thể Cá tra tự nhiên sống 20 năm (trích dẫn từ Trần Thanh Xuân, 1994) 2.2 Lịch sử tiến hóa quan lymphoid Vài ngàn năm trở trước quan lymphoid nhà giải phẩu học khám phá Bước ngoặc khám phá tỳ tạng tìm thấy Edwin Smith Papyrus, từ khoa y nước Ai Cập; thymus mô tả the Italian Jacopo Berengario da Carpi vào kỷ 15; hệ bạch huyết phát Dane Thomas Bartholin the Swede Olaus Rudbeck vào kỷ 17 Nhưng giải thích chức quan lymphoid hệ thống miễn dịch nghiên cứu gần thymus công nhận quan quan trọng hệ miễn dịch (trích dẫn từ George Iwama, 1996) Ở lớp chim, tế bào B sinh quan lymphoid sơ cấp túi Fabricius (là nơi tạo tế bào biểu mô ruột sau); hình thành tế bào B có liên quan đến tổ chức lymphoid sơ cấp ruột động vật có vú đặc biệt nhóm động vật nhai lại (như cừu, thỏ bò) Ngược lại, quan thứ cấp (và tam cấp) quan lymphoid ngoại biên hạch lympho, PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 4.3.B) Bên cạnh đó, tiền thận có hình thành rãi rác tế bào bào sắc tố cá trưởng thành Có thể nói giai đoạn này, thận có cấu tạo gần hồn chỉnh mặt cấu trúc mơ học (Hình 4.3.C&D) Tuy nhiên, chưa khẳng định xác cấu tạo thận hạn chế phương pháp nghiên cứu mơ học Cũng giai đoạn thân thận phát triển kích thước hình thành cấu trúc Theo Sonal et al (2008), nghiên cứu hình thành quan lympho cá bơn Đại Dương (Hippoglossus) Kết mô học cho thấy thận xuất lúc nở, cịn phương pháp hố mơ miễn dịch dung kháng thể đơn dòng phát IgM thận trước cá 94 ngày tuổi Vì vậy, so với lồi cá bơn Đại Dương cá tra phát triển muộn Có thể nói rằng, kết có chênh lệch ngày tuổi lồi hồn tồn khác hình dạng, cấu tạo, chức năng, vùng phân bố kể tập tính sinh sản,… phương pháp cịn hạn chế Nên cần có nghiên cứu sử dụng phương pháp có kết xác để khẳng định mặt chức 21 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com b a a b B A b a a C D Hình 4.2: Thận cá tra qua giai đoạn (H&E) A: Cá ngày tuổi (a: thận trước; b: thận sau) X40 B: Cá ngày tuổi (a: thận trước; b: thận sau) X40 C: Cá 10 ngày tuổi (a: thận trước; b: thận sau) X40 D: Cá 12 ngày tuổi (a: thận trước) X40 22 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com A B D C Hình 4.3: Cấu trúc thận qua giai đoạn cá (H&E) A: Thận trước cá 15 ngày tuổi X40 B: Thận trước cá 21 ngày tuổi X40 C: Thận trước cá 21 ngày tuổi tế bào lympho tăng gấp bội kích thước tăng lên X 400 D: Cấu trúc thận sau cá 21 ngày tuổi tế bào sắc tố nằm rãi rác gần hoàn thành chức X 400 23 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 4.3.2 Tuyến ức (thymus) Theo nhận định Lagler et al năm 1962, tuyến ức quan quan trọng cá Tiếp Patt & Patt, 1969 có nhận định thêm, tuyến ức quan nội tiết chức quan trọng phổ biến nhận biết giữ vai trị hệ thống đáp ứng miễn dịch (Trích dẫn từ Chinabut et al, 1991) Từ nhận định đó, nghiên cứu tuyến ức đối tượng cá tra thực lát cắt phát tuyến ức cá ngày tuổi nằm mặt lưng khoang bụng gần thận trước bao bọc mô liên kết Lúc tuyến ức khơng có hình dạng đặc trưng chưa hình thành rìa bao ngồi quan, đám tế bào tập trung (Hình 4.4.A) Ở giai đoạn cá 10 ngày tuổi, tuyến ức nằm vị trí ngun thuỷ khoang mang, nằm sát với xoang thính giác mang Tuyến ức bắt đầu có dạng hình túi Về kích thước, tuyến ức lớn so với giai đoạn cá ngày tuổi Điểm khác biệt chủ yếu giai đoạn so với giai đoạn cá ngày tuổi có xuất tế bào lớn bắt mầu đậm hay cịn gọi tế bào lympho (Hình 4.4.B) Khác với giai đoạn cá ngày tuổi 10 ngày tuổi, tuyến ức cá 11 ngày tuổi có tăng lên đáng kể kích thước Nó phình hình thành dạng túi đặc trưng Các lát cắt qua tuyến ức cho thấy tăng lên đáng kể số lượng tế bào tuyến ức đặc biệt tế bào lympho (Hình 4.4.C) Điểm khác biệt giai đoạn so với giai đoạn cá 10 ngày tuổi tuyến ức có phân vùng mặt mơ học Có thể thấy rõ vùng tuỷ vùng vỏ tuyến ức Trong vỏ có tập trung dày đặc tế bào lympho bắt mầu đậm Trong tất lát cắt không thấy tồn màng ngăn cách tuỷ vỏ động vật có xương sống bậc cao Tuy thiếu hụt đặc điểm cố định hầu hết loài cá xương, khơng phản ánh chưa hồn thiện chức Theo Bowden ctv (2005) đến tuyến ức hoàn thành phát triển Trong tuyến ức giai đoạn cịn nhận thấy nhiều tế bào lạ Các nghiên cứu sâu với trợ giúp kính hiển vi điện tử cần thiết để xác định rõ loại tế bào Như mẫu thu được, không tìm thấy tuyến ức cá từ ngày tuổi đến ngày tuổi Tuyến ức ghi nhận cá ngày tuổi sau tiếp tục xuất mẫu cá có tuổi lớn Thêm vào đó, nhận thấy giai đoạn 12 ngày tuổi (Hình 4.4.D) có tuyến ức chứa đầy lympho bào 24 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com Khi so sánh với vài loài khác ta thấy vài điều thú vị Cá mandarin, lồi cá phân bố phía Anh gần Na-uy, hoàn thiện tuyến ức vào 23 ngày sau nở Watts et al., (2003) báo cáo cá ngừ vây vàng (Thunnus orientalis), lồi cá vùng ơn đới, phân biệt vùng vùng khoảng 15 ngày sau nở Như so với loài cá khác, hình thành phát triển tuyến ức cá tra diễn sớm A B C D Hình 4.4: Tuyến ức cá tra qua giai đoạn (H&E) A: tuyến ức cá ngày tuổi đám tế bào đặc trưng X 40 B: tuyến ức cá 10 ngày tuổi xuất tế bào lynpho X 20 C: Tuyến ức cá 11 ngày tuổi kích thước tăng lên phình khoang mang X 40 D: cấu trúc tuyến ức cá 12 ngày tuổi chứa đầy tế bào lympho X 160 25 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 4.3.3 Tỳ tạng Trên lát cắt dọc theo thể cá, tỳ tạng tìm thấy cá 21 ngày tuổi có màu đỏ thẩm, dạng dẹp elip hai đầu nhọn, nằm vùng tiêu hoá bao xung quanh màng treo ruột (Hình 4.5.A) Ở giai đoạn này, tỳ tạng khối, chưa phân biệt rõ ràng phần tuỷ đỏ tuỷ trắng, tiểu thể quan sát kính hiển vi gần đồng (Hình 4.5.B) Theo Nguyễn Quốc Thịnh (2002), tỳ tạng đơn vị cấu tạo tiểu thể, tiểu thể gồm phần tuỷ đỏ tuỷ trắng, cá cịn nhỏ khó phân biệt tiểu thể với Tỳ tạng tìm thấy giai đoạn cá 21 ngày tuổi, tất mẫu thu được, tỳ tạng khơng tìm thấy cá từ ngày tuổi đến 20 ngày tuổi từ 22 ngày tuổi đến 30 ngày tuổi Tỳ tạng giai đoạn thấy rõ hình dạng, tế bào lympho bắt màu đậm nằm rãi rác Tuy nhiên chưa phân biệt mặt cấu trúc (Hình 4.5.C,D) Theo Merete et al., 1998 nghiên cứu hình thành lymphoid cá tuyết đại dương (Gadus morhua L.), thuộc loài cá nước mặn Kết cho thấy, cá tuyết (Gadus morhua L) tỳ tạng quan lymphoid xuất trước tiên khoảng thời gian cá ngày tuổi sau nở Tiếp theo, Lora et al., 2001, nghiên cứu hình thành quan lymphoid cá nheo mỹ Kết cho thấy tế bào có chức miễn dịch khơng đặc hiệu diện quan tạo máu thuộc thận thymus lúc nở tỳ tạng ngày tuổi Cơ quan thymus xuất rõ ràng tổ chức lymphoid thuộc tỳ tạng không quan sát ngày thứ 21 sau nở So với cá tuyết đại dương (Gadus morhua L.) tỳ tạng cá tra phát triển chậm nhiều Có thể nhận định rằng, loài cá khác hoàn toàn loài, phân bố vùng địa lý, đặc điểm, tập tính sinh sống,… nên phát triển quan lympho có khác biệt Gần hơn, Sonal et al, 2008 Nghiên cứu hình thành quan lympho phát triển tế bào cá bơn Đại Dương (Hippoglossus L.) Kết mô học cho thấy tỳ tạng xuất 49 ngày tuổi sau nở Còn phương pháp hóa mơ miễn dịch dùng kháng thể đơn dòng phát tỳ tạng cá 94 ngày tuổi Như vậy, so với loài cá bơn Đại Dương (Hippoglossus L.) tỳ tạng cá tra hình thành phát triển sớm Nhưng kết nhận định đúng, hầu hết lồi cá nước quan lympho phát triển sớm so với loài cá nước mặn (Doggett et al., 1987) 26 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com A C B D Hình 4.5: Cấu trúc tỳ tạng cá 21 ngày tuổi Tỳ tạng có hình dạng rỏ ràng, màu nâu đỏ tế bào bắt màu đậm Chưa phân biệt phần tủy đỏ phần tủy trắng (H&E) A: X 20 B: Tế bào lympho X 80 C D: tế bào lympho bắt màu hồng X 400; X 600 27 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 5.1 KẾT LUẬN § Xác định yếu tố môi trường nhiệt độ, pH, O2, TAN N-N02- ao ương phù hợp cho quan lympho cá phát triển § Bước đầu nghiên cứu phương pháp mô học (H&E) tìm thấy thận cá ngày tuổi, tuyến ức cá ngày tuổi tỳ tạng cá 21 ngày tuổi 5.2 ĐỀ XUẤT § Cần nghiên cứu sử dụng phương pháp đaị miễn dịch huỳnh quang để có kết xác mặt hình thái phát triển chức tế bào § Phương pháp mơ học tỏ phương pháp thích hợp để xác định phát triển quan lympho cá tra Cần nghiên cứu hệ thống miễn dịch cho lồi cá có giá trị kinh tế khác nhằm cao hiệu kinh tế 28 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com TÀI LIỆU THAM KHẢO Boy, 1998 Water quality in pond for aquaculture Auburn University Breuil G.; vassiloglou B.; pepin J.F.; romestand B,.Ontogeny of IgMbearing cells and change in inmunogolobulin M-like protein level (IgM) during in larvae sea bass (Dicentrarchus labrax ), (1997), Fish & Shellfish Immunology, Volume 7, Number 1, January 1997 , pp 2943(15) Bùi Châu Trúc Đan (2003), bước đầu nghiên cứu đặc điểm mô bệnh học bệnh phù mắt cá tra Bùi Châu Trúc Đan, 2003 Bước đầu nghiên cứu đặc điểm mô bệnh học bệnh phù mắt cá tra Luận văn Đại Học Khoa Thủy sản Trường Đại Học Cần Thơ Bùi Tấn Anh, Võ Văn Bé Phạm thị Nga, 2004, Giáo trình Sinh học đại cương A2 (Sinh học thể Đa Dạng sinh học), Khối sinh học Chantanachookhin, C., Seikai, T and Tanaka, M Comparative study of the ontogeny of the lymphoid organs in three species of marine fish Aquaculture ,(1991),99, 143-155 Chinabut, S., C Limsuwan and P Kitsawat 1991 Histology of walking catfish (Clarias batrachus) Doggett, T.A and Harris J.E The ontogeny of gut-associated lymphoid tissue in Oreochromis mossambicus Journal of Fish Biology, 1987, 31, 23-27 Dung T.T., M.Crumlish, N.T.N Ngọc, N.Q.Thịnh Đ.T.M Thy.2004 Xác định vi khuẩn gây bệnh mủ gan cá tra (Pangasiaus hypophthalmus ) Tạp chí khoa học Đại học Cần Thơ: 137-142 10 Ferguson, H.W., J.F Turnbull, A shinn, K Thompson, T.T Dung, and M Crumlish.2001 Bacillary necrosis in farmed Pangasianodon hypophthalmus (Sauveage) from the Mekong Delta, Viêtnam J Fish Dis 24:509-513 11 George Iwama, 1996, The Fish immune System (Orgnism, pathogen, and environment) 12 Grizzle, J.M and W.A Rogers 1976 Anatomy and Histology of the channel catfish Argicultural experiment station, Auburn University 13 Groman, D.B 1982 Histology of the Striped Bass Department of Pathobiology University of Connectcut Storrs, Connectcut 06268 Bethesda, Maryland 115pp 14 Herrera, A.A., 1996 Histology of Tilapia (Oreochromis niloticus) 29 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 15 http://antg.cand.com.vn/vi-vn/sukien/2008/12/68203.cand Cập nhật ngày 07/01/2009 16 http://www.anova.com.vn/contents/article.asp?id=340&detail=15&ucat =41 , cập nhật ngày 07/01/2009 17 Hugh W Ferguson, 2006 Systemic Pathology of Fish 18 Leknes, I L., (2003) Histological studies on the lymphoid organs in prenatal larvae of platy, Xiphophorus maculatus L (Poeciliidae: Teleostei) 19 Lora Patrie-Hanson and A Jerald Ainsworth, 2002, Humoral immune responses of channel catfish (Ictalurus punctatus) fry and fingerlings exposed toEdwardsiella ictaluri 20 Lora Petrie-Hanson A Jerald Ainsworth, 2001, Ontogeny of channel catfish lymphoid organs 21 Magnadottir.B, S Lange, S Gudmundsdottir, J Bogwald and R.A.Dalmo, (2005) Ontogeny of humoral immune parmeters in fish 22 Merete B Schroder, Alberto J Villena and Trond O Jorgensen, (1998), ontogeny of lymphoid organs and immunoglobulin producing cells in atlantic cod (gadus morhua l.) 23 Mitchell, A.J 1997 Fish disease summaries for the southeastern, United States from 1976-1995 Aquacult Mag.23:87-93 24 Nadia Danilova and Lisa A Steiner, 2002 B cells develop in the zebrafish pancreas 25 Nguyễn Bạch Loan, 2004 Giáo trình “ Ngư Loại I” Khoa Thủy Sản Đại học Cần Thơ 26 Nguyễn Quốc Thịnh (2002), bước đầu nghiên cứu mô bệnh học bệnh đốm trắng nội tạng cá tra 27 Padros F, Crespo S,Ontogeny of the lympoid organs in the turbot Scophthalmus maximus: A light and electron microscope study Aquacuture 1996, 144(1-3):1-16 28 Phạm Phan Địch (1998) Mô học Bộ môn mô học phôi thai học NXB y học 29 Phạm Văn Khánh, 1996 Sinh sản nhân tảo nuôi cá tra (Pangasius hypothalmus) Đồng Sông Cửu Long Luận án phó tiến sĩ khoa học Nơng Nghiệp Trường Đại Học Thuỷ Sản Nha Trang 187 trang 30 Phạm Văn Khánh, 2006 Kỹ thuật nuôi cá tra cá ba sa bè Thành phố Hồ Chí Minh Nhà xuất Nông Nghiệp 31 Phan Thị Hừng (2004), nghiên cứu cấu trúc mô biến động số lượng tế bào hồng cầu cá tra 30 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 32 Phan Thị Hừng, 2004 Nghiên cứu cấu trúc mô biến động số lượng tế bào hồng cầu cá tra Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ 33 Robert, R J, 1989 Fish pathology 34 Sonal Patel, Elin Sorhus, Ingrid Uglenes Fiksdal, Per Gunnar Espedal, Oivind Bergh, Odd Magne Rødseth, H Craig Morton, Audun Helge Nerland, 2008, Ontogeny of lymphoid organs and development of IgM bearing cells in Atlantic halibut (Hippoglossus hippoglossus L 35 Supranee Chinabut, Chalor Limsuwan, Praveena Kitsawat, (1991) Histology of the walking catfish, Clarias Batrachus 36 Thomas Boehm & Conrad C Bleul, 2007, The evolutionary history of lymphoid organs, Nature Immunology 8, 131 - 135 (2007) 37 Trần Thanh Xuân, 1994 Some biological characteristics and artificial reproduction of river catfish ( Pangasius hypophthalmus Sauvage) in the Southern Viet Nam Worshop on the Biological Bases for Aquaculture of Siluriformes, 24-27 May, 1994 Montpellier, France 38 Trương Quốc Phú, 2004 Bài giảng quản lý chất lượng nước Khoa thủy sản Đại Học Cần Thơ 39 Võ Quốc Hào, 2008 Cấu trúc mô số hệ quan cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ 40 Watts M, Kato K, Munday BL, Burke CM., 2003 Ontogeny of immune system organs in northern bluefin tuna (Thunnus orientalis, Temminck and Schlegel 1884), 34:13e21 41 Zapata A, Diez B, Cejalvo T, Gutiérrez-de Frías C and Cortés A, 2005 Ontogeny of the immune system of fish 31 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com PHỤ LỤC I BẢNG THEO DÕI CHỈ TIÊU MÔI TRƯỜNG Đợt Ao A B A B A B A B A B A B A B Ngày test 17/02/2009 17/02/2009 19/02/2009 19/02/2009 21/02/2009 21/02/2009 25/02/2009 25/02/2009 05/03/2009 05/03/2009 13/03/2009 13/03/2009 19/03/2009 19/03/2009 Nhiệt độ 30 29.5 29.5 30 30 29.5 29.5 31.5 31 30 31 31,5 32 31.5 Đợt 1: Ngày thả cá Đợt 2: Cá ngày tuổi Đợt 3: Cá ngày tuổi Đợt 4: Cá ngày tuổi Đợt 5: Cá 16 ngày tuổi Đợt 6: Cá 24 ngày tuổi Đợt 7: Cá 30 ngày tuổi PH 7.5 7.5 7.5 8 7.5 7.5 7.5 8 8 O2 5.5 5 5.5 5.5 5 5 5 5.5 5.5 NH4+/NH3 N-NO20 0 0 0 0 0 0 0 0.025 0.05 0.05 0.05 0 0 0 0 Bộ test sử dụng: SERA Đức sản xuất 32 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com PHỤ LỤC II Fromaline trung tính (Neutral buffered formalin: NBF) Formol thương mại (36-40% formoldehydrate) Na.H2PO4 Na2HPO4 Nước cất 100ml 4g 6,5g 900ml Dung dịch Harris,S Haematoxylin - Haematoxylin 5g - Cồn tuyệt đối 50ml - Phèn chua 100g - Nước cất 100ml - Mercuric oxydate 2,5g Hòa tan phèn chua nước nóng, hịa tan Haematoxylin cồn tuyệt đối Trộn lẫn dung dịch với nhau, đun sôi Thêm mercuric oxydate từ từ, khuấy Làm lạnh, thêm acid acetic (nếu dùng liền), lọc dung dịch nhuộm Có thể sử dụng Eosin-Floxin - Stock eosin (1% Eosin Y) - Stock floxin (1% Floxin B) - Ethanol 95% - Glacid Acetic acid 100ml 100ml 780ml 40ml Acid/Acohol - Acohol - Hydrochioric 1000ml 10ml Potassium acetate - Potassium acetate - Nước cất 2g 100ml Dung dịch keo Mayer”S Albumin - Lòng trắng trứng - Glycerol Pha theo thể tích 1:1 Trộn sau lọc qua giấy lọc Thêm thymol để ngăn vi sinh vật phát triển 33 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com PHỤ LỤC III Bảng thu mẫu cá từ đến 30 ngày tuổi Ngày/ Tháng/ Năm Ngày tuổi Số mẫu Dấu hiệu bên 17/02/09 18/02/09 19/02/09 20/02/09 21/02/09 22/02/09 23/02/09 24/02/09 25/02/09 26/02/09 27/02/09 28/02/09 01/03/09 02/03/09 03/03/09 04/03/09 05/03/09 06/03/09 07/03/09 08/03/09 09/03/09 10/03/09 11/03/09 12/03/09 13/03/09 14/03/09 15/03/09 16/03/09 17/03/09 18/03/09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 30 30 32 36 27 20 25 16 17 23 14 11 10 8 8 10 10 9 6 Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Bình thường Sự xuất quan lympho cá Thận Tuyến Tỳ ức tạng 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Chú thích: 0: Mẫu cá chưa xuất quan lympho 1: Mẫu cá tìm thấy quan thận, tuyến ức tỳ tạng 34 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com 35 PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com ... thường Sự xuất quan lympho cá Thận Tuyến Tỳ ức tạng 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 Chú thích: 0: Mẫu cá chưa xuất quan lympho 1: Mẫu cá tìm thấy quan. .. 10 /03/09 11 /03/09 12 /03/09 13 /03/09 14 /03/09 15 /03/09 16 /03/09 17 /03/09 18 /03/09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 30 30 32 36 27 20 25 16 17 23 14 11 10 8 8 10 10 ... 29.5 29.5 31. 5 31 30 31 31, 5 32 31. 5 Đợt 1: Ngày thả cá Đợt 2: Cá ngày tuổi Đợt 3: Cá ngày tuổi Đợt 4: Cá ngày tuổi Đợt 5: Cá 16 ngày tuổi Đợt 6: Cá 24 ngày tuổi Đợt 7: Cá 30 ngày tuổi PH 7.5