Nghiên cứu tính ổn định của vắc xin mẫu chuẩn sử dụng trong đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào

BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Ngọc Nhơn NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN SỬ DỤNG TRONG ĐÁNH GIÁ CÔNG HIỆU VẮC XIN HO GÀ VÔ BÀO LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2021 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Ngọc Nhơn NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN SỬ DỤNG TRONG ĐÁNH GIÁ CÔNG HIỆU VẮC XIN HO GÀ VÔ BÀO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS Nguyễn Thị Lan Phƣơng Hà Nội - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận v n Th c s “Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn sử dụng đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào” cơng trình nghiên cứu riêng cá nh n nh m nghiên cứu hông chép Do nh m nghiên cứu tự nghiên cứu đọc, dịch tài liệu, tổng hợp thực Nội dung lý thuyết luận v n c sử dụng số tài liệu tham khảo nhƣ trình bày phần tài liệu tham khảo Các số liệu, chƣơng trình phần mềm kết luận v n trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình hác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trƣớc Học viện Khoa học Công nghệ phát sai ph m hay chép đề tài này! Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2021 Học viên Trần Ngọc Nhơn LỜI CẢM ƠN Lời cho phép ch n thành cảm ơn đến PGS.TS Nguyễn Thị Lan Phƣơng, ngƣời thầy tận t m hƣớng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình hồn thành luận v n Tôi xin ch n thành cảm ơn Viện trƣởng TS Dƣơng Hữu Thái quan t m t o điều kiện cho suốt trình học tập làm luận v n t i viện IV C Cảm ơn b n đồng nghiệp Khoa Mẫu chuẩn Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế (NICVB), phòng Kiểm Định (IVAC) hợp tác giúp đỡ cho q trình nghiên cứu Tơi xin ch n thành cảm ơn Ban lãnh đ o Học viện Khoa học Cơng nghệ Phịng Đào t o Khoa Cơng nghệ Sinh học quý thầy cô d y dỗ t o điều kiện thuận lợi cho q trình thực luận v n Cuối tơi xin cảm ơn gia đình ln động viên tơi suốt thời gian qua Tôi xin ch n thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2021 Học viên Trần Ngọc Nhơn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết đầy đủ Ý ngh a STT Chữ viết tắt 01 CV 02 DĐVN 03 DPT 04 ĐVMD 05 FHA Filametous Haemagglutinin 06 GMP Good Manufacturing Practice Thực hành sản xuất tốt 07 IU International unit Đơn vị quốc tế 08 IVAC Institute of Vaccines and Medical Biologicals Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế 09 MCQG Mẫu chuẩn quốc gia 10 MCQT Mẫu chuẩn quốc tế 11 NICVB Viện Kiểm định Quốc National Institute for Control gia Vắc xin Sinh of Vaccines and Biologicals phẩm Y tế 12 PT 13 PTN Phịng thí nghiệm 14 SD Standard Deviation Coefficient of variation Độ biến thiên Dƣợc điển Việt Nam Diptheria – Pertussis – Tetanus B ch hầu – Ho gà – Uốn ván Đơn vị miễn dịch Pertussis Toxin Độ lệch chuẩn 15 TCMR Tiêm chủng Mở rộng 16 VXMC Vắc xin mẫu chuẩn 17 VXMT Vắc xin mẫu thử 18 WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Công thức pha chế 1800 ml VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 hấp phụ .22 Bảng 2.1 Tiêu chuẩn dự kiến VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 24 Bảng 3.1 Kết nhận d ng háng nguyên FH PT mẫu vắc xin RaP01 .43 Bảng 3.2 Kết kiểm tra cảm quan tính chất vật lý vắc xin RaP01 45 Bảng 3.3 Kết kiểm tra tính chất vật lý vắc xin ho gà vô bào RaP01 .48 Bảng 3.4 Kết kiểm tra tiêu h a học vắc xin RaP01 49 Bảng 3.5 Kết xác định đặc tính háng nguyên vắc xin RaP01 50 Bảng 3.6 Kết xác định ĐVMD vắc xin RaP01 t i IVAC 51 Bảng Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C) 54 Bảng Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ 5°C ± 3°C .55 Bảng 3.9 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 -40°C ± 2°C 56 Bảng 3.10 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 5°C ± 3°C 57 Bảng 11 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 25°C ± 2°C .58 Bảng 12 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 37°C ± 2°C .58 Bảng 13 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 45°C ± 2°C .59 Bảng 3.14 Kết công hiệu RaP01 t i thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 45°C ± 2°C .60 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Khuẩn l c Bordetella Pertussis môi trƣờng Bordert Gengou Hình Cấu trúc háng nguyên vi huẩn Bordetella pertussis Hình Ho gà mức độ bao phủ tiêm vắc xin DPT3, Việt Nam, 12 Hình Bản đồ tỷ lệ tiêm vắc xin ho gà trẻ n m 2019 12 Hình Tỷ lệ tiêm chủng mũi vắc xin ho gà toàn giới n m 1980 – 2019 13 Hình Sơ đồ t m tắt quy trình sản xuất VXMC dự tuyển ho gà vơ bào RaP01 23 Hình 2.1 VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đƣợc sản xuất t i IVAC 24 Hình 2 Sơ đồ tổng quát nghiên cứu 27 Hình Kết kiểm tra vơ trùng mẫu RaP01 42 Hình Kết sau nhuộm thí nghiệm nhận d ng háng nguyên PT FH mẫu vắc xin RaP01 42 Hình 3 T ng trọng trung bình chuột nhắt thử nghiệm an toàn chung VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 44 Hình T ng trọng trung bình chuột lang thử nghiệm an tồn chung VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 44 Hình VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đông hô 46 Hình Độ ẩm tồn dƣ ống vắc xin RaP01 đông hô 47 Hình Khối lƣợng hơ ống vắc xin RaP01 đơng hơ 47 Hình Số ĐVMD trung bình ống vắc xin ho gà RaP01 đông hô chuẩn độ t i IV C NICVB 53 Hình Đồ thị biểu diễn công hiệu VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 -40°C ± 2°C 54 Hình 10 Đồ thị biểu diễn công hiệu mẫu chuẩn RaP01 5°C ± 3°C 55 Hình 11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc công hiệu RaP01 bảo quản nhiệt độ 45°C ± 2°C theo tuần 60 MỤC LỤC LỜI C M ĐO N LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG T NG QU N TÀI LIỆU 1 T NG QU N VỀ BỆNH HO GÀ 1 Tác nh n g y bệnh chế bệnh sinh 1.1.1.1 Vi khuẩn ho gà 1 Các yếu tố độc lực háng nguyên bảo vệ 1 Cơ chế bệnh sinh 10 1 Đƣờng l y dịch tễ học bệnh Ho gà 11 1.2 VẮC XIN HO GÀ 12 1.2.1 Miễn dịch bảo vệ ho gà 12 2 Các lo i vắc xin ho gà 13 1.2.3 Thử nghiệm xác định công hiệu ho gà 15 1.2.4 Vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 16 1.2.4.1 Mẫu chuẩn quốc tế vắc xin ho gà vô bào 16 1.2.4.2 Nhu cầu tính cần thiết vắc xin mẫu chuẩn quốc gia 16 Đặc điểm vắc xin mẫu chuẩn quốc gia 17 4 Đánh giá chất lƣợng vắc xin mẫu chuẩn 18 1.2.4.5 Chuẩn định với mẫu chuẩn quốc tế 19 Đánh giá tính ổn định 19 1.2.5 Sản xuất vắc xin mẫu chuẩn ho gà vô bào dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia 21 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHI N CỨU 24 ĐỐI TƢỢNG NGHI N CỨU 24 2.2 VẬT LIỆU NGHI N CỨU 25 2 Động vật thí nghiệm 25 2.2.2 Sinh phẩm – h a chất 25 2.2.3 Dụng cụ - thiết bị 26 PHƢƠNG PHÁP 27 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 27 Phƣơng pháp xác định đặc tính ỹ thuật 28 Phƣơng pháp iểm tra vô trùng 28 2 Phƣơng pháp iểm tra nhận d ng háng nguyên PT FH 28 3 Phƣơng pháp iểm tra an toàn chung 29 Phƣơng pháp iểm tra cảm quan tính chất vật lý 29 Phƣơng pháp iểm tra tiêu h a học 31 2.3.2.6 Kiểm tra đặc tính háng nguyên 35 3 Phƣơng pháp xác định đơn vị miễn dịch ống vắc xin mẫu chuẩn (nối chuẩn) 38 Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 39 Nghiên cứu tính ổn định nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C) 39 Nghiên cứu tính ổn định dải nhiệt độ cao nhiệt độ bảo quản 39 2.3.5 Dự đoán tuổi thọ sản phẩm theo nguyên lý Vant-Hoff 39 Phƣơng pháp xử lý số liệu 40 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 41 52 GM SD 13 81,40 50,7 - 152,8 14 70,00 42,24 - 130 15 48,60 34,3 - 87,24 16 79,20 49,61 - 148,4 17 65,75 42,75 - 121,52 18 51,00 35,5 - 92,54 67,71 45,64 - 121,84 13,62 Qua lần chuẩn độ với mẫu chuẩn JNIH-3 thu đƣợc 18 số liệu cho kết số ĐVMD ống vắc xin ho gà RaP01 đông hô đ t trung bình 67,71 IU/ống giá trị thấp 48 60 IU/ống cao 85 23 IU/ống; SD = 13,62 IU, khoảng GM ± 2SD từ 45,64 – 121,84 IU Trong hi đ t i NICVB, kết chuẩn độ ĐVMD vắc xin ho gà RaP01 với lần thực so sánh với mẫu chuẩn JNIH-3 c giá trị trung bình 76 28 IU/ống Kết chuẩn độ NICVB cho thấy tất lần chuẩn độ c giá trị công hiệu nằm khoảng GM ± 2SD (24,55 – 128,01 IU) với SD = 25,866 IU Nhìn chung tất ết chuẩn độ t i IV C NICVB cho giá trị ĐVMD ống vắc xin RaP01 cao 34 IU/ống dù đƣợc tính đến khoảng dao động GM ± 2SD Giá trị trung bình ĐVMD vắc xin RaP01 chuẩn độ t i NICVB cao so với kết chuẩn độ t i IV C nhƣng mức độ dao động cao thể qua SD CV lần thực (Hình 8) 53 Hình 3.8 Số ĐVMD trung bình ống vắc xin ho gà RaP01 đơng hô chuẩn độ t i IV C NICVB Từ ết chuẩn độ nối chuẩn với MCQT PTN (IV C NICVB), ĐVMD VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đƣợc xử lý thống ê công bố 72 IU/ống (theo định số 612/QĐ-KĐQG) 3.3 KẾT QUẢ NGHI N CỨU TÍNH N ĐỊNH CỦA VẮC XIN HO GÀ RaP01 3.3.1 Tính ổn định nhiệt độ bảo quản 3.3.1.1 Tính ổn định công hiệu nhiệt độ -40°C ± 2°C 5°C ± 3°C Ở nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C vắc xin RaP01 đƣợc theo dõi công hiệu t i mốc thời gian tháng tháng tháng tháng tháng Kết đƣợc bảng 3.7 54 Bảng 3.7 Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C) ĐVMD (IU/ống) TB Thời gian (tháng) Mẫu Mẫu Mẫu (IU/ống) 72,54 74,52 73,56 77,56 74,25 68,50 SD CV% 73,54 0,99 1,3 76,54 76,12 1,7 2,2 76,58 78,56 74,55 5,3 7,1 75,25 72,34 71,45 73,01 2,0 2,7 74,58 76,54 68,54 73,22 4,2 5,7 90.000 85.000 IU/ống 80.000 76.117 75.000 74.547 73.540 73.013 73.220 70.000 65.000 60.000 Tháng Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn cơng hiệu VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 -40°C ± 2°C Nhƣ nhiệt độ -40°C ± 2°C sau tháng công hiệu vắc xin hông thay đổi, so với số ĐVMD ống VXMC dự tuyển ho gà 55 vô bào RaP01 đƣợc công nhận (72 IU/ống) Sự dao động ết đánh giá tính ổn định cơng hiệu vắc xin -40°C ± 2°C (73 ± 4,2 IU/ống) giới h n phép đo Đối với vắc xin đông hô nhiệt độ 5°C ± 3°C đƣợc coi nhiệt độ bảo quản VXMC thời gian ngắn h n Nghiên cứu độ ổn định công hiệu vắc xin RaP01 đƣợc thực t i mốc thời gian tuần, tuần 12 tuần Kết đƣợc bảng 3.8 Bảng 3.8 Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ 5°C ± 3°C Thời gian ĐVMD (IU/ống) TB SD CV% (tuần) Mẫu Mẫu Mẫu (IU/ống) 74,80 67,74 71,18 71,24 3,5 5,0 72,68 70,35 67,26 70,10 2,7 4,0 12 69,50 67,26 69,24 68,67 1,2 1,8 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn cơng hiệu mẫu chuẩn RaP01 5°C ± 3°C 56 Kết bảng 3.8 cho thấy với nhiệt độ 5°C ± 3°C công hiệu vắc xin c xu hƣớng giảm nhẹ theo thời gian Sau tuần công hiệu trung bình 71,24 ± 3,53 IU/ống tƣơng đƣơng 98 5% Sau tuần cơng hiệu sụt giảm cịn 70,10 ± 2,72 IU/ống, giảm 97% sau 12 tuần cơng hiệu cịn 68 67 ± 1,23 IU/ống, giảm cịn 95% so với giá trị cơng hiệu ban đầu nhiệt độ bảo quản Nhƣ sau tuần bảo quản nhiệt độ ± 3°C giá trị cơng hiệu giảm 5% so với ban đầu (hình 9) 3.3.1.2 Tính ổn định cảm quan tính chất vật lý vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản Bảng 3.9 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 -40°C ± 2°C Chỉ tiêu đánh giá Cảm quan Thời gian bảo quản nhiệt độ -40oC Tiêu chuẩn tháng tháng tháng tháng tháng D ng bánh bong hơng teo Khơng Khơng Khơng Khơng Khơng sau hồn nguyên thay thay thay thay thay t o hỗn dịch đổi đổi đổi đổi đổi đồng màu trắng đục Độ ẩm tồn dƣ (%) ≤3 2,32 2,45 2,56 2,34 2,75 Độ hấp phụ (%) ≥ 80 85,25 86,48 84,50 81,57 82,46 Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) ≤ 60 gi y 40 45 50 45 54 57 Nhƣ thời gian theo dõi tháng nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C VXMC RaP01 đ t tiêu cảm quan tính chất vật lý so với tiêu chuẩn Bảng 3.10 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 5°C ± 3°C Chỉ tiêu đánh giá Thời gian bảo quản nhiệt độ 5oC ± 3oC Tiêu chuẩn tuần tuần 12 tuần Cảm quan D ng bánh bong hơng teo sau hồn ngun t o hỗn dịch đồng nhất, màu trắng đục Không thay đổi Không thay đổi Không thay đổi Độ ẩm tồn dƣ (%) ≤3 2,48 2,76 2,84 Độ hấp phụ (%) ≥ 80 81,25 82,48 82,35 Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) ≤ 60 gi y 50 45 55 Ở nhiệt độ bảo quản 5°C ± 3°C đặc tính cảm quan tính chất vật lý VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đ t tiêu chuẩn 12 tuần 58 3.3.2 Tính ổn định nhiệt độ thúc đẩy nhanh dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vơ bào RaP01 3.3.2.1 Tính ổn định nhiệt độ 25°C ± 2°C; 37°C ± 2°C 45°C ± 2°C Tính ổn định vắc xin RaP01 dải nhiệt độ cao nhiệt độ bảo quản đƣợc đánh giá thông qua tiêu vắc xin đ công hiệu độ hấp phụ tốc độ t o huyền dịch đồng Ở nhiệt độ 25°C ± 2°C, 37°C ± 2°C thời gian đánh giá 12 tuần với khoảng cách tuần lần Trong đ nhiệt độ 45°C ± 2°C vắc xin đƣợc theo dõi thời gian ngắn nhƣng với khoảng cách dày (1 tuần, tuần, tuần tuần) Kết đánh giá tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ thúc đẩy nhanh đƣợc bảng 3.11, 12 13 Bảng 3.11 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 25°C ± 2°C Thời gian tuần tuần 12 tuần Công hiệu (IU/ống) 32,87 31,82 29,69 Độ hấp phụ (%) 60,5 50,4 40,6 42 46 49 Kết Tốc độ t o hỗn dịch sau hồn ngun (gi y) Bảng 3.12 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 37°C ± 2°C Thời gian tuần tuần 12 tuần Công hiệu (IU/ống) 31,20 29,51 25,06 Độ hấp phụ (%) 60,5 50,6 40,6 40 45 50 Kết Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) 59 Bảng 3.13 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 45°C ± 2°C Thời gian tuần tuần tuần tuần Công hiệu (IU/ống) 42,21 32,02 24,00 10,42 Độ hấp phụ (%) 60,5 50,5 44,5 38,4 44 48 50 55 Kết Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) Nhƣ nhiệt độ cao hơn, vắc xin RaP01 c sụt giảm đồng tiêu công hiệu độ hấp phụ Đánh giá cảm quan d ng đông hô vắc xin cho thấy hông c thay đổi hình d ng màu sắc Tuy nhiên số tốc độ t o huyền dịch đồng bị éo dài so với ban đầu, so với vắc xin bảo quản ở nhiệt độ thấp Kết cho thấy nhiệt độ cao hơng thích hợp để bảo quản vắc xin thời gian tuần 37°C 25°C 3.3.2.2 Dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 Tuổi thọ vắc xin bảo quản điều kiện định đ phải đƣợc xác định theo thời gian thực Tuy nhiên VXMC thƣờng đƣợc sản xuất với mục đích sử dụng l u dài tối thiểu 10 n m việc xác định tuổi thọ n điều hông thực tế Tuy nhiên việc dự đoán tuổi thọ vắc xin c thể thực dựa sụt giảm ho t tính hi để vắc xin điều kiện giáng h a cấp tốc nhƣ nhiệt độ cao Trong nghiên cứu dựa vào ết công hiệu vắc xin RaP01 hi đặt nhiệt độ 45°C ± 2°C tuần thiết lập phƣơng trình để tính tốn tuổi thọ dự đốn vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản - 40°C ± 2°C Kết đƣợc trình bày bảng 3.14 60 Bảng 3.14 Kết công hiệu RaP01 t i thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 45°C ± 2°C STT Thời gian ủ mẫu (tuần) Công hiệu (IU/ống) 1 42,21 2 32,02 24,00 10,42 Từ kết công hiệu thiết lập đƣợc phƣơng trình hồi quy tuyến tính biểu thị mối tƣơng quan thời gian bảo quản cơng hiệu nhƣ đƣợc hình 11 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc công hiệu RaP01 bảo quản nhiệt độ 45°C ± 2°C theo tuần Phƣơng trình hồi quy thu đƣợc: Y= -6.084*X +45.41 R2 = 959: đ t yêu cầu tính hồi quy 61 Dựa vào phƣơng trình hồi quy ta tính đƣợc thời điểm mà t i đ hiệu cịn 50%: cơng 36,16 - 45,41 X= = 1,52 (tuần) - 6,084 Tuổi thọ dự đoán điều kiện bảo quản -40°C: C = × X = 28 5×1 52 = 550.44 (tuần) tƣơng đƣơng 10 59 n m Nhƣ với phƣơng pháp theo dõi điều kiện bảo quản lão h a cấp tốc ta xác định đƣợc tuổi thọ dự đoán mẫu nghiên cứu 10 59 n m Tuổi thọ dự đốn theo phƣơng pháp hơng phản ánh xác số tuổi thọ thực mẫu c chất sinh học nhƣng n phản ánh tƣơng đối tuổi thọ mẫu nghiên cứu Kết cho thấy tuổi thọ dự đoán mẫu chuẩn RaP01 cao Do đ từ kết ết luận mẫu chuẩn RaP01 c tuổi thọ phù hợp yêu cầu đƣa 10 n m Tuy nhiên biến đổi chất c chất sinh học phụ thuộc vào biến đổi nhiệt độ thấp so với chất c chất h a học nên phƣơng pháp thúc đẩy nhiệt để dự đoán tuổi thọ VXMC c độ xác hơng cao Do đ phải tiếp tục giám sát công hiệu VXMC dự tuyển RaP01 điều kiện bảo quản thƣờng (-40°C) theo thời gian Việc chọn thời điểm giám sát c thể dựa vào ph n tích xu hƣớng theo mốc thời gian định kỳ cụ thể Nghiên cứu chƣa xác định đƣợc giai đo n mẫu chuẩn bắt đầu giảm công hiệu liên tục Đ y giai đo n quan trọng hi bƣớc vào giai đo n độ ổn định công hiệu mẫu chuẩn thấp hơng cịn đủ tin cậy để đƣa vào thử nghiệm mẫu chuẩn phải hủy bỏ 62 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN (1) VXMC ho gà vô bào RaP01 đ t tiêu chuẩn chất lƣợng dự kiến tiêu vơ huẩn, an tồn chung cảm quan tính chất vật lý h a học đặc tính háng nguyên công hiệu đủ tiêu chuẩn dự tuyển cho MCQG (2) ĐVMD VXMC ho gà vô bào RaP01 đƣợc xác định t i IV C 67,71 IU/ống t i NICVB 76 28 IU/ống Vắc xin RaP01 đƣợc công nhận mẫu chuẩn ho gà vô bào quốc gia c số ĐVMD 72 IU/ống (3) VXMC ho gà vô bào quốc gia RaP01 đảm bảo đƣợc độ ổn định chất lƣợng nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C thời gian theo dõi tháng nhiệt độ 5°C ± 3°C thời gian theo dõi 12 tuần Nghiên cứu thúc đẩy nhanh nhiệt độ 25°C ± 2°C 37°C ± 2°C cho thấy thời gian lƣu trữ hông tuần Tuổi thọ VXMC ho gà vô bào quốc gia RaP01 đƣợc dự đoán 10 n m nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C 4.2 KIẾN NGHỊ (1) Giám sát ho t tính miễn dịch tính ổn định mẫu chuẩn thơng qua q trình bảo quản sử dụng Thông báo phối hợp với NICVB tái chuẩn định ĐVMD hi c thay đổi c ảnh hƣởng đến chất lƣợng mẫu chuẩn (2) Nghiên cứu mở rộng mục đích sử dụng mẫu chuẩn RaP01 thử nghiệm huyết học (Mouse Immunogenicity Test - MIT), phƣơng pháp đánh giá tính sinh miễn dịch vắc xin ho gà vô bào c thể thay cho thử nghiệm thử thách chuột 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Lan Phƣơng 2008, Xây dựng phương pháp đánh giá kháng nguyên ngoại nội độc tố vắc xin ho gà - Đề xuất tiêu chuẩn sản xuất vắc xin ho gà an toàn cao Viện Vắc xin Nha Trang, Luận án tiến s y học Đặng Đức Tr ch cộng 1992 Vi sinh vật y học, Nhà xuất y học Hà Nội tr 97-101 Lê V n Phủng 2009 Vi khuẩn y học, Nhà xuất giáo dục Việt Nam tr 350-353 Lê V n Hiệp, 2004, Công nghệ sản xuất vắc xin ho gà, Miễn dịch công nghệ Nhà xuất y học Hà Nội John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and diagnostic laboratory immunology, pp 464-470 Biken-JICA, Text book of Diphtheria – Pertussis – Tetanus combined vaccine, Biological products technology course 6/1992-3/1993 WHO, 1993, The immunological basis for Immunization series – modul 4: Pertussis, WHO/EPI/GEN93.14 WHO, 2004, Global Immunization data, pp 1-3 Viện Vệ sinh Dịch Tễ Trung Ƣơng Cục Y Tế Dự phòng Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm n m 2010 10 Bộ Y tế, 2015, Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm 11 WHO, 2020, Progress Towards Global Immunization Goals - 2019: Summary presentation of key indicators 12 Granstrom M., 2011, The History of Pertussis Vaccination: From Whole -Cell to Subunit Vaccines, pp 73-82 64 13 World Health Organization, 2013, Expert Committee on Biological Standardization, WHO TRS 979, annex 4, pp 11-22 14 John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and diagnostic laboratory immunology, pp 464-470 15 World Health Organization, 2011, WHO manual for the Establishment of national and other secondary standards for vaccines WHO_IVB_11.03 _eng.pdf 16 World Health Organization, 2006, Guidelines on stability evaluation of vaccines, WHO TRS No 962 annex 17 ECBS Expert Committee on Biological Standardization, 2015, Guidelines on the stability evaluation of vaccines for use under extended controlled temperature conditions, Geneva 18 World Health Organization, 2016, Guidelines on stability evaluation of vacciens for use under extended controlled temperature conditions, WHO TRS No 999 annex 5, WHO Geneva 19 Đỗ Khánh Linh, 2016, Xác định tính khả dụng Vắc xin bạch hầu đông khô RD6 dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia, Luận v n Th c s Công nghệ sinh học 20 Đoàn Hữu Thiển, Sản xuất đánh giá chất lƣợng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia ho gà vô bào Tạp chí Khoa hoc Kiểm định Vắc xin Sinh phẩm Y tế (11/2021), tr 22-31 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Quyết định cho phép sử dụng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia ho gà vô bào lần thứ Phụ lục Hƣớng dẫn sử dụng vắc xin mẫu chuẩn ho gà vô bào lần thứ nhất, mã số MCQG aP.01 ... mẫu chuẩn sử dụng đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào? ?? Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá chất lƣợng tính ổn định lô VXMC ho gà vô bào đông hô RaP01 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Lô vắc xin ho gà. .. Mẫu chuẩn quốc tế vắc xin ho gà vô bào Tiêu chuẩn công hiệu vắc xin ho gà biểu thị IU WHO đƣa chuẩn chung cho kiểm tra công hiệu vắc xin ho gà vô bào, MCQT vắc xin ho gà vô bào lần thứ Viện Biken... ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận v n Th c s ? ?Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn sử dụng đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào? ?? công trình nghiên cứu riêng cá nh n tơi nh m nghiên cứu hông