(Luận văn thạc sĩ) nghiên cứu tính ổn định của vắc xin mẫu chuẩn sử dụng trong đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào

BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Ngọc Nhơn NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN SỬ DỤNG TRONG ĐÁNH GIÁ CÔNG HIỆU VẮC XIN HO GÀ VÔ BÀO LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2021 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Trần Ngọc Nhơn NGHIÊN CỨU TÍNH ỔN ĐỊNH CỦA VẮC XIN MẪU CHUẨN SỬ DỤNG TRONG ĐÁNH GIÁ CÔNG HIỆU VẮC XIN HO GÀ VÔ BÀO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS Nguyễn Thị Lan Phƣơng Hà Nội - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận v n Th c s “Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn sử dụng đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào” cơng trình nghiên cứu riêng cá nh n nh m nghiên cứu hông chép Do nh m nghiên cứu tự nghiên cứu đọc, dịch tài liệu, tổng hợp thực Nội dung lý thuyết luận v n c sử dụng số tài liệu tham khảo nhƣ trình bày phần tài liệu tham khảo Các số liệu, chƣơng trình phần mềm kết luận v n trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình hác Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm trƣớc Học viện Khoa học Công nghệ phát sai ph m hay chép đề tài này! Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2021 Học viên Trần Ngọc Nhơn LỜI CẢM ƠN Lời cho phép ch n thành cảm ơn đến PGS.TS Nguyễn Thị Lan Phƣơng, ngƣời thầy tận t m hƣớng dẫn giúp đỡ tơi suốt q trình hồn thành luận v n Tôi xin ch n thành cảm ơn Viện trƣởng TS Dƣơng Hữu Thái quan t m t o điều kiện cho suốt trình học tập làm luận v n t i viện IV C Cảm ơn b n đồng nghiệp Khoa Mẫu chuẩn Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế (NICVB), phòng Kiểm Định (IVAC) hợp tác giúp đỡ cho q trình nghiên cứu Tơi xin ch n thành cảm ơn Ban lãnh đ o Học viện Khoa học Cơng nghệ Phịng Đào t o Khoa Cơng nghệ Sinh học quý thầy cô d y dỗ t o điều kiện thuận lợi cho q trình thực luận v n Cuối tơi xin cảm ơn gia đình ln động viên tơi suốt thời gian qua Tôi xin ch n thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 10 tháng 12 năm 2021 Học viên Trần Ngọc Nhơn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT STT 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1 Công thức pha chế 1800 ml VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 hấp phụ 22 Bảng 2.1 Tiêu chuẩn dự kiến VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 24 Bảng 3.1 Kết nhận d ng háng nguyên FH PT mẫu vắc xin RaP01 .43 Bảng 3.2 Kết kiểm tra cảm quan tính chất vật lý vắc xin RaP01 45 Bảng 3.3 Kết kiểm tra tính chất vật lý vắc xin ho gà vơ bào RaP01 .48 Bảng 3.4 Kết kiểm tra tiêu h a học vắc xin RaP01 49 Bảng 3.5 Kết xác định đặc tính háng nguyên vắc xin RaP01 50 Bảng 3.6 Kết xác định ĐVMD vắc xin RaP01 t i IVAC 51 Bảng Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản (-40°C ± 2°C) .54 Bảng Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ 5°C ± 3°C 55 Bảng 3.9 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 -40°C ± 2°C 56 Bảng 3.10 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 5°C ± 3°C 57 Bảng 11 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 25°C ± 2°C 58 Bảng 12 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 37°C ± 2°C .58 Bảng 13 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 45°C ± 2°C .59 Bảng 3.14 Kết công hiệu RaP01 t i thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 45°C ± 2°C 60 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1 Khuẩn l c Bordetella Pertussis mơi trƣờng Bordert Gengou Hình Cấu trúc háng nguyên vi huẩn Bordetella pertussis Hình Ho gà mức độ bao phủ tiêm vắc xin DPT3, Việt Nam, 12 Hình Bản đồ tỷ lệ tiêm vắc xin ho gà trẻ n m 2019 Hình Tỷ lệ tiêm chủng mũi vắc xin ho gà toàn giới n m 1980 – 2019 13 Hình Sơ đồ t m tắt quy trình sản xuất VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 Hình 2.1 VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đƣợc sản xuất t i IVAC Hình 2 Sơ đồ tổng Hình Kết kiểm t Hình Kết sau n FH mẫu vắc xin RaP01 Hình 3 T ng trọng trung bình chuột nhắt thử nghiệm an toàn chung VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 Hình T ng trọng trung b chung VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 Hình VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đông hô Hình Độ ẩm tồn dƣ Hình Khối lƣợng hơ củ Hình Số ĐVMD trung chuẩn độ t i IV C NICVB Hình Đồ thị biểu diễn công hiệu VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 -40°C ± 2°C Hình 10 Đồ thị biểu diễn cơng hiệu mẫu chuẩn RaP01 5°C ± 3°C Hình 11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc công hiệu RaP01 bảo quản nhiệt độ 45°C ± 2°C theo tuần MỤC LỤC LỜIC MĐO N LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG T NG QU N TÀI LIỆU 1 T NG QU N VỀ BỆNH HO GÀ 1 Tác nh n g y bệnh chế bệnh sinh 1.1.1.1 Vi khuẩn ho gà 1 Các yếu tố độc lực háng nguyên bảo vệ 1 Cơ chế bệnh sinh 1 Đƣờng l y dịch tễ học bệnh Ho gà 1.2 VẮC XIN HO GÀ 1.2.1 Miễn dịch bảo vệ ho gà 2 Các lo i vắc xin ho gà 1.2.3 Thử nghiệm xác định công hiệu ho gà 1.2.4 Vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 1.2.4.1 Mẫu chuẩn quốc tế vắc xin ho gà vô bào 1.2.4.2 Nhu cầu tính cần thiết vắc xin mẫu chuẩn quốc gia Đặc điểm vắc xin mẫu chuẩn quốc gia 4 Đánh giá chất lƣợng vắc xin mẫu chuẩn 1.2.4.5 Chuẩn định với mẫu chuẩn quốc tế Đánh giá tính ổn định 1.2.5 Sản xuất vắc xin mẫu chuẩn ho gà vô bào dự tuyển mẫu chuẩn quốc gia CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHI N CỨU ĐỐI TƢỢNG NGHI N CỨU 2.2 VẬT LIỆU NGHI N CỨU 221 Động vật thí nghiệm 2.2.2 Sinh phẩm – h a chất 2.2.3 Dụng cụ - thiết bị PHƢƠNG PHÁP 231 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 232 Phƣơng pháp xác định đặc tính 2321 Phƣơng pháp 2322 Phƣơng pháp 2323 Phƣơng pháp 2324 Phƣơng pháp 2325 Phƣơng pháp 2.3.2.6 Kiểm tra đặc tính háng nguyên 233 Phƣơng pháp xác định đơn vị miễn dịch ốn (nối chuẩn) 234 Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn d bào RaP01 2341 Nghiên cứu tính ổn định nh 2342 quản Nghiên cứu tính ổn định c 2.3.5 Dự đoán tuổi thọ sản phẩm theo nguyên lý Vant-Hoff 236 Phƣơng pháp xử lý số liệu CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Nhƣ nhiệt độ -40°C ± 2°C sau tháng công hiệu vắc xin hông thay đổi, so với số ĐVMD ống VXMC dự tuyển ho gà 55 vô bào RaP01 đƣợc công nhận (72 IU/ống) Sự dao động ết đánh giá tính ổn định cơng hiệu vắc xin -40°C ± 2°C (73 ± 4,2 IU/ống) giới h n phép đo Đối với vắc xin đông hô nhiệt độ 5°C ± 3°C đƣợc coi nhiệt độ bảo quản VXMC thời gian ngắn h n Nghiên cứu độ ổn định công hiệu vắc xin RaP01 đƣợc thực t i mốc thời gian tuần, tuần 12 tuần Kết đƣợc bảng 3.8 Bảng 3.8 Công hiệu vắc xin RaP01 nhiệt độ 5°C ± 3°C Thời gian (tuần) 12 Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn cơng hiệu mẫu chuẩn RaP01 5°C ± 3°C 56 Kết bảng 3.8 cho thấy với nhiệt độ 5°C ± 3°C công hiệu vắc xin c xu hƣớng giảm nhẹ theo thời gian Sau tuần công hiệu trung bình 71,24 ± 3,53 IU/ống tƣơng đƣơng 98 5% Sau tuần cơng hiệu sụt giảm cịn 70,10 ± 2,72 IU/ống, giảm cịn 97% sau 12 tuần cơng hiệu 68 67 ± 1,23 IU/ống, giảm 95% so với giá trị công hiệu ban đầu nhiệt độ bảo quản Nhƣ sau tuần bảo quản nhiệt độ ± 3°C giá trị công hiệu giảm 5% so với ban đầu (hình 9) 3.3.1.2 Tính ổn định cảm quan tính chất vật lý vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản Bảng 3.9 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 -40°C ± 2°C Chỉ tiêu đánh giá Cảm quan Độ ẩm tồn dƣ (%) Độ hấp phụ (%) Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) 57 Nhƣ thời gian theo dõi tháng nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C VXMC RaP01 đ t tiêu cảm quan tính chất vật lý so với tiêu chuẩn Bảng 3.10 Kết xác định tiêu cảm quan tính chất vật lý theo thời gian vắc xin RaP01 5°C ± 3°C Chỉ tiêu đánh giá Cảm quan Độ ẩm tồn dƣ (%) Độ hấp phụ (%) Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) nhiệt độ bảo quản 5°C ± 3°C đặc tính cảm quan tính chất vật lý VXMC dự tuyển ho gà vô bào RaP01 đ t tiêu chuẩn 12 tuần Ở 58 3.3.2 Tính ổn định nhiệt độ thúc đẩy nhanh dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 3.3.2.1 Tính ổn định nhiệt độ 25°C ± 2°C; 37°C ± 2°C 45°C ± 2°C Tính ổn định vắc xin RaP01 dải nhiệt độ cao nhiệt độ bảo quản đƣợc đánh giá thông qua tiêu vắc xin đ công hiệu độ hấp phụ tốc độ t o huyền dịch đồng Ở nhiệt độ 25°C ± 2°C, 37°C ± 2°C thời gian đánh giá 12 tuần với khoảng cách tuần lần Trong nhiệt độ 45°C ± 2°C vắc xin đƣợc theo dõi thời gian ngắn nhƣng với khoảng cách dày (1 tuần, tuần, tuần tuần) Kết đánh giá tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ thúc đẩy nhanh đƣợc bảng 3.11, 12 13 đ Bảng 3.11 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 25°C ± 2°C Thời gian Kết Công hiệu (IU/ống) Độ hấp phụ (%) Tốc độ t o hỗn dịch sau hồn ngun (gi y) Bảng 3.12 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 37°C ± 2°C Thời gian Kết Công hiệu (IU/ống) Độ hấp phụ (%) Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) 59 Bảng 3.13 Tính ổn định vắc xin RaP01 nhiệt độ 45°C ± 2°C Thời gian Kết Công hiệu (IU/ống) Độ hấp phụ (%) Tốc độ t o hỗn dịch sau hoàn nguyên (gi y) Nhƣ nhiệt độ cao hơn, vắc xin RaP01 c tiêu công hiệu độ hấp phụ đông hô vắc xin cho thấy Tuy nhiên số tốc độ t o huyền dịch đồng bị éo dài so với ban đầu, so với vắc xin bảo quản ở nhiệt độ thấp Kết cho thấy nhiệt độ cao hơng thích hợp để bảo quản vắc xin thời gian tuần 37°C 25°C 3.3.2.2 Dự đoán tuổi thọ vắc xin mẫu chuẩn dự tuyển ho gà vô bào RaP01 Tuổi thọ vắc xin bảo quản điều kiện định đ phải đƣợc xác định theo thời gian thực Tuy nhiên VXMC thƣờng đƣợc sản xuất với mục đích sử dụng l u dài tối thiểu 10 n m việc xác định tuổi thọ n điều hơng thực tế Tuy nhiên việc dự đốn tuổi thọ vắc xin c thể thực dựa sụt giảm ho t tính hi để vắc xin điều kiện giáng h a cấp tốc nhƣ nhiệt độ cao Trong nghiên cứu dựa vào ết công hiệu vắc xin RaP01 hi đặt nhiệt độ 45°C ± 2°C tuần thiết lập phƣơng trình để tính tốn tuổi thọ dự đốn vắc xin RaP01 nhiệt độ bảo quản - 40°C ± 2°C Kết đƣợc trình bày bảng 3.14 60 Bảng 3.14 Kết công hiệu RaP01 t i thời điểm ủ mẫu nhiệt độ 45°C ± 2°C STT Từ kết công hiệu thiết lập đƣợc phƣơng trình hồi quy tuyến tính biểu thị mối tƣơng quan thời gian bảo quản công hiệu nhƣ đƣợc hình 11 Hình 3.11 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc công hiệu RaP01 bảo quản nhiệt độ 45°C ± 2°C theo tuần Phƣơng trình hồi quy thu đƣợc: Y= -6.084*X +45.41 R2 = 959: đ t yêu cầu tính hồi quy hiệu cịn 50%: 36,16 - 45,41 Tuổi thọ dự đốn điều kiện bảo quản -40°C: C = × X = 28 5×1 52 = 550.44 (tuần) tƣơng đƣơng 10 59 n m Nhƣ với phƣơng pháp theo dõi điều kiện bảo quản lão h a cấp tốc ta xác định đƣợc tuổi thọ dự đoán mẫu nghiên cứu 10 59 n m Tuổi thọ dự đoán theo phƣơng pháp hơng phản ánh xác số tuổi thọ thực mẫu c chất sinh học nhƣng n phản ánh tƣơng đối tuổi thọ mẫu nghiên cứu Kết cho thấy tuổi thọ dự đoán mẫu chuẩn RaP01 cao Do đ từ kết ết luận mẫu chuẩn RaP01 c tuổi thọ phù hợp yêu cầu đƣa 10 n m Tuy nhiên biến đổi chất c chất sinh học phụ thuộc vào biến đổi nhiệt độ thấp so với chất c chất h a học nên phƣơng pháp thúc đẩy nhiệt để dự đoán tuổi thọ VXMC c độ xác hơng cao Do đ phải tiếp tục giám sát công hiệu VXMC dự tuyển RaP01 điều kiện bảo quản thƣờng (-40°C) theo thời gian Việc chọn thời điểm giám sát c thể dựa vào ph n tích xu hƣớng theo mốc thời gian định kỳ cụ thể Nghiên cứu chƣa xác định đƣợc giai đo n mẫu chuẩn bắt đầu giảm công hiệu liên tục Đ y giai đo n quan trọng hi bƣớc vào giai đo n độ ổn định công hiệu mẫu chuẩn thấp hơng cịn đủ tin cậy để đƣa vào thử nghiệm mẫu chuẩn phải hủy bỏ 62 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN VXMC ho gà vô bào RaP01 đ t tiêu chuẩn chất lƣợng dự kiến tiêu vô huẩn, an tồn chung cảm quan tính chất vật lý h a học đặc tính háng ngun cơng hiệu đủ tiêu chuẩn dự tuyển cho MCQG (1) ĐVMD VXMC ho gà vô bào RaP01 đƣợc xác định t i IV C 67,71 IU/ống t i NICVB 76 28 IU/ống Vắc xin RaP01 đƣợc công nhận mẫu chuẩn ho gà vô bào quốc gia c số ĐVMD 72 IU/ống (2) VXMC ho gà vô bào quốc gia RaP01 đảm bảo đƣợc độ ổn định chất lƣợng nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C thời gian theo dõi tháng nhiệt độ 5°C ± 3°C thời gian theo dõi 12 tuần Nghiên cứu thúc đẩy nhanh nhiệt độ 25°C ± 2°C 37°C ± 2°C cho thấy thời gian lƣu trữ hông tuần Tuổi thọ VXMC ho gà vơ bào quốc gia RaP01 đƣợc dự đốn 10 n m nhiệt độ bảo quản -40°C ± 2°C (3) 4.2 KIẾN NGHỊ Giám sát ho t tính miễn dịch tính ổn định mẫu chuẩn thơng qua q trình bảo quản sử dụng Thông báo phối hợp với NICVB tái chuẩn định ĐVMD hi c thay đổi c ảnh hƣởng đến chất lƣợng mẫu chuẩn (1) Nghiên cứu mở rộng mục đích sử dụng mẫu chuẩn RaP01 thử nghiệm huyết học (Mouse Immunogenicity Test - MIT), phƣơng (2) pháp đánh giá tính sinh miễn dịch vắc xin ho gà vô bào c thể thay cho thử nghiệm thử thách chuột 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Thị Lan Phƣơng 2008, Xây dựng phương pháp đánh giá kháng nguyên ngoại nội độc tố vắc xin ho gà - Đề xuất tiêu chuẩn sản xuất vắc xin ho gà an toàn cao Viện Vắc xin Nha Trang, Luận án tiến s y học Đặng Đức Tr ch cộng 1992 Vi sinh vật y học, Nhà xuất y học Hà Nội tr 97-101 Lê V n Phủng 2009 Vi khuẩn y học, Nhà xuất giáo dục Việt Nam tr 350-353 Lê V n Hiệp, 2004, Công nghệ sản xuất vắc xin ho gà, Miễn dịch công nghệ Nhà xuất y học Hà Nội John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and diagnostic laboratory immunology, pp 464-470 Biken-JICA, Text book of Diphtheria – Pertussis – Tetanus combined vaccine, Biological products technology course 6/1992-3/1993 WHO, 1993, The immunological basis for Immunization series – modul 4: Pertussis, WHO/EPI/GEN93.14 WHO, 2004, Global Immunization data, pp 1-3 Viện Vệ sinh Dịch Tễ Trung Ƣơng Cục Y Tế Dự phòng Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm n m 2010 10 Bộ Y tế, 2015, Niên giám thống ê bệnh truyền nhiễm 11 WHO, 2020, Progress Towards Global Immunization Goals - 2019: Summary presentation of key indicators 12 Granstrom M., 2011, The History of Pertussis Vaccination: From Whole -Cell to Subunit Vaccines, pp 73-82 64 13 World Health Organization, 2013, Expert Committee on Biological Standardization, WHO TRS 979, annex 4, pp 11-22 14 John B.Bruss and George R.Siber, 1999, Protective effects of pertussis immunoglobulin (P-IGIV) in the aerosol chellenge model, Clinical and diagnostic laboratory immunology, pp 464-470 15 World Health Organization, 2011, WHO manual for the Establishment of national and other secondary standards for vaccines WHO_IVB_11.03 _eng.pdf 16 World Health Organization, 2006, Guidelines on stability evaluation of vaccines, WHO TRS No 962 annex 17 ECBS Expert Committee on Biological Standardization, 2015, Guidelines on the stability evaluation of vaccines for use under extended controlled temperature conditions, Geneva 18 World Health Organization, 2016, Guidelines on stability evaluation of vacciens for use under extended controlled temperature conditions, WHO TRS No 999 annex 5, WHO Geneva 19 Đỗ Khánh Linh, 2016, Xác định tính khả dụng Vắc xin bạch hầu đông khô RD6 dự tuyển mẫu chuẩn Quốc gia, Luận v n Th c s Công nghệ sinh học 20 Đoàn Hữu Thiển, Sản xuất đánh giá chất lƣợng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia ho gà vô bào Tạp chí Khoa hoc Kiểm định Vắc xin Sinh phẩm Y tế (11/2021), tr 22-31 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Quyết định cho phép sử dụng vắc xin mẫu chuẩn quốc gia ho gà vô bào lần thứ Phụ lục Hƣớng dẫn sử dụng vắc xin mẫu chuẩn ho gà vô bào lần thứ nhất, mã số MCQG aP.01 ... mẫu chuẩn sử dụng đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào? ?? Mục tiêu nghiên cứu Đánh giá chất lƣợng tính ổn định lơ VXMC ho gà vô bào đông hô RaP01 Đối tƣợng phạm vi nghiên cứu Lô vắc xin ho gà. .. Mẫu chuẩn quốc tế vắc xin ho gà vô bào Tiêu chuẩn công hiệu vắc xin ho gà biểu thị IU WHO đƣa chuẩn chung cho kiểm tra công hiệu vắc xin ho gà vô bào, MCQT vắc xin ho gà vô bào lần thứ Viện Biken... ĐOAN Tôi xin cam đoan Luận v n Th c s ? ?Nghiên cứu tính ổn định vắc xin mẫu chuẩn sử dụng đánh giá công hiệu vắc xin ho gà vô bào? ?? công trình nghiên cứu riêng cá nh n tơi nh m nghiên cứu hông