NGHIÊN cứu CHIẾT TÁCH THÀNHPHẦNHOÁHỌCVÀ KHẢO sát KHẢ NĂNG KHÁNGVI SINHVẬTCỦA CAO CHIẾT vỏ lá lô hội (ALOEVERA) TRỒNG tại TỈNH bà rịa – VŨNGTÀU

TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÀ RỊA-VŨNG TÀU VIỆN KỸ THUẬT - KINH TẾ BIỂN BÁO CÁO ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH THÀNH PHẦN HOÁ HỌC VÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG VI SINH VẬT CỦA CAO CHIẾT VỎ LÁ LÔ HỘI (ALOE VERA) TRỒNG TẠI TỈNH BÀ RỊA – VŨNG TÀU Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên Hướng dẫn khoa học: ThS Vũ Thị Hồng Phượng BÀ RỊA-VŨNG TÀU - NĂM 2019 download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Lô hội 1.1.1 1.1.1.1 1.1.1.2 Đặc tính thực vật 1.1.2 1.1.2.1 1.1.2.2 Aloe Perryi (Aloe perryi Ba 1.1.2.3 1.1.2.4 Aloe Aborecens 1.1.3 Thành phần hóa học[16][24][28] 1.1.4 1.1.4.1 Các hợp chất Anthraquinone 1.1.4.2 1.1.4.3 1.2 Tác dụng dược lý 1.2.1 Y học dân gian Việt Nam 1.2.2 Y học đại[3][11] 1.2.3 Hóa sinh học đại 1.3 Các phương pháp chiết tách Lô hộ 1.3.1 Phương pháp ngâm kiệt 1.3.2 Phương pháp chiết Soxhlet 1.3.3 1.3.3.1 1.3.3.2 1.3.3.3 Tỷ lệ dung môi nguyên l 1.3.3.4 download by : skknchat@gmail.com 1.3.3.5 Thời gian tách chiết 1.4 Giới thiệu s kháng vi sinh vật[44] 1.4.1 Giới thiệu số loài vi khuẩn 1.4.1.1 1.4.1.2 1.4.1.3 1.4.1.4 1.4.1.5 1.4.2 Phương pháp khuếch tán đĩa 1.5 Phương pháp đị CHƯƠNG 2: PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 2.1 Phương tiện ngh 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu 2.1.2 Nguyên liệu, hóa chất 2.1.3 Dụng cụ thí nghiệm 2.1.4 2.2 Thực nghiệm 2.2.1 Chiết cao vỏ Lô hội phương pháp Soxhlet 2.2.2 Định tính số hợp chất tự nhiên dịch chiết vỏ Lô hội Khảo sát diện hợp chất Anthranoid Khảo sát diện Steroid – triterpenoid Khảo sát diện Flavonoid Khảo sát diện saponin 2.2.3 Định danh số hợp chất tự nhiên cao vỏ Lô hội 2.2.4 Khảo sát khả kháng vi sinh vật cao vỏ Lô hội CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết chiết tác 3.1.1 Lô hội 3.1.2 download by : skknchat@gmail.com 3.2 Kết khảo sát khả kháng khuẩn phương pháp đo vòng kháng khuẩn 51 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 4.1 Kết luận 56 4.2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC VIẾT TẮT Am: thuốc kháng sinh Amipicillin DK: Đường kính DMSO: Dimethyl sulfoxide - Hợp chất hữu lưu huỳnh với công thức (CH3)2SO DNA: Acid deoxyribonucleic - Phân tử mang thông tin di truyền mã hóa cho hoạt động sinh trưởng, phát triển, chuyên hóa chức sinh sản sinh vật nhiều loài virus MHA: Mueller Hinton Agar - Môi trường thạch Mueller Hinton MYP Mannitol Egg Yolk Polymixin PDA: Potato Dextrose Agar Môi trường dinh dưỡng PDA RNA: Acid ribonucleic rpm: tốc độ vòng/ phút Te: thuốc kháng sinh Tetracycline TSB: Tryptone Soy Broth - Môi trường dinh dưỡng TSB TT: Thuốc thử i download by : skknchat@gmail.com DANG MỤC BẢNG Bảng 1: Độ phân cực dung môi 20 Bảng 1: Môi trường Trypticase Soy Broth 33 Bảng 2: Môi trường Mueller Hinton Agar 33 Bảng 1: Khối lượng cao vỏ Lô hội thu từ dung môi chiết 40 Bảng 2: Khối lượng cao chiết vỏ Lô hội với dung môi Ethanol nồng độ khác 41 Bảng 3: Khối lượng cao chiết vỏ Lô hội với Ethanol 70% tỉ lệ khác 42 Bảng 4: Khối lượng cao chiết vỏ Lô hội với dung môi Ethanol 70% khoảng thời gian khác 42 Bảng 5: Kết định tính thành phần dược liệu cao Ethyl Acetate 44 Bảng 6: Kết định tính thành phần dược liệu cao Ether 45 Bảng 7: Kết định tính thành phần dược liệu cao Methanol 46 Bảng 8: Kết định tính thành phần dược liệu cao Ethanol 47 Bảng 9: Kết định tính thành phần dược liệu cao Hexan 48 Bảng 10: Kết phân tích thành phần hóa học cao vỏ Lô hội 49 Bảng 11: Đường kính vịng kháng khuẩn cao vỏ Lô hội (mm) 51 ii download by : skknchat@gmail.com DANH MỤC HÌNH Hình 1: Lơ hội phân bố Thế Giới Hình 2: Cánh đồng Lô hội Hình 3: Cấu tạo sinh học Lô hội Hình 4: Thân rễ Lô hội Hình 5: Lá Lơ hội Hình 6: Cấu tạo Lơ hội Hình 7: Hoa Lơ hội Hình 8: Quả Lơ hội Hình 9: Cây Lơ hội 10 Hình 10: Aloe Barbadensis 11 Hình 11: Aloe Perryi 11 Hình 12: Aloe Ferox 12 Hình 13: Aloe Aborecens 12 Hình 14: Cơ chế khử gốc tự Vitamin C 13 Hình 15: Cơng thức cấu tạo Emodin 14 Hình 16: Công thức cấu tạo Aloe Emodin 15 Hình 17: Cơng thức cấu tạo Aloe Barbendol 15 Hình 18: Cơng thức cấu tạo Aloin A 15 Hình 19: Cơng thức cấu tạo Aloin B 16 Hình 20: Cơng thức cấu tạo Apigenin 16 Hình 21: Vi khuẩn Escherichia coli kính hiển 22 Hình 22: Vi khuẩn Bacillus cereus kính hiển vi 23 Hình 23: Vi khuẩn Salmonella kính hiển vi 24 Hình 24: Vi khuẩn Staphylococus aureus kính hiển vi 25 Hình 25: Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa kính hiển vi 27 Hình 26: Đĩa petri có sẵn mơi trường vi khuẩn 29 Hình 27: Sơ đồ sắc ký khí ghép khối phổ (GC/MS) 30 Hình 1: Sơ đồ khảo sát chiết cao vỏ Lô hội phương pháp Soxhlet 34 Hình 2: Hệ thống chiết cao phịng thí nghiệm 35 iii download by : skknchat@gmail.com Hình 1: Biểu đồ ảnh hưởng dung môi đến khối lượng cao chiết vỏ Lơ Hội 40 Hình 2: Biểu đồ ảnh hưởng nồng độ Ethanol đến khối lượng cao chiết vỏ Lô Hội 41 Hình 3: Biểu đồ ảnh hưởng tỉ lệ dung môi/nguyên liệu đến khối lượng cao chiếtvỏ Lô Hội 42 Hình 4: Biểu đồ ảnh hưởng thời gian đến khối lượng cao chiết vỏ Lơ Hội 43 Hình 5: Sắc ký đồ cao vỏ Lô hội 49 Hình 6: Khả kháng E.coli cao vỏ Lơ Hội 52 Hình 7: Khả kháng B cereus cao vỏ Lơ Hội 52 Hình 8: Khả kháng S typhi cao vỏ Lơ Hội 53 Hình 9: Khả kháng P aeruginosa cao vỏ Lơ hội 53 Hình 10: Khả kháng S aureus cao vỏ Lơ Hội 54 Hình 11: Biểu đồ thể khả kháng khuẩn cao vỏ Lô hội chủng vi khuẩn 55 iii download by : skknchat@gmail.com Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Đặt vấn đề Trong thập kỷ qua, thuốc chữa bệnh có nguồn gốc tổng hợp sử dụng nhiều, song người ta ngày nhận thấy mặt trái chúng tác dụng phụ, tượng kháng thuốc, Xu hướng giới Việt Nam trung tâm nghiên cứu loại thuốc có nguồn gốc tự nhiên Kết năm gần có nhiều thuốc chữa bệnh có nguồn gốc thảo dược đời có góp phần khơng nhỏ vào việc bảo vệ nâng cao chất lượng sống người [3] Từ lâu, Lơ hội cịn gọi Nha đam, có tên khoa học Aloe veraL Hay Aloe barbadensis, thuộc họ Aoaceae Lơ hội có tác dụng nhuận tràng, kháng khuẩn, giúp đẩy nhanh trình làm lành vết thương, nhuận gan, lợi mật, giảm loét dày, tác nhân chống ung thư, kháng khuẩn, kháng nấm Trên giới nhiều cơng trình nghiên cứu gần cho thấy gel Lơ hội có khả chống oxy hóa kháng số loài vi sinh vật Tuy nhiên vỏ Lô hội chưa tận dụng, để tận dụng hết nguồn vỏ bị loại bỏ từ quy trình chế biến sản phẩm từ Lơ hội Đề tài “Nghiên cứu chiết tách thành phần hoá học khảo sát khả kháng vi sinh vật cao chiết vỏ Lô Hội (Aloe Vera) trồng tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu” tiến hành vỏ Lơ hội nhằm đánh giá hợp chất góp phần làm phong phú cho lĩnh vực dược – mỹ phẩm Tầm quan trọng Ngày nay, thành phần dược liệu có nguồn gốc từ thiên nhiên đóng vai trị quan trọng nhiều lĩnh vực khoa học y dược, công nghệ thực phẩm, sản xuất mỹ phẩm Ý nghĩa đề tài - Nguồn nguyên liệu rộng rãi, dễ tìm - Khai thác hết nguồn nguyên liệu sẵn có - Phương pháp chiết tách hiệu Lý chọn đề tài Lô hội (Aloe vera) nguồn tài nguyên cỏ có giá trị cao mặt kinh tế y học nghiên cứu sử dụng rộng rãi Cây Lơ hội có HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Trang Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên download by : skknchat@gmail.com Trường Đại Học Bà Rịa - Vũng Tàu Viện Kỹ Thuật - Kinh Tế Biển, Ngành CNKT Hóa Học Nghiên Cứu Khoa Học chủng loại phong phú, thành phần hoá học phức tạp, chất so với loại thực vật khác Nhiều cơng trình nghiên cứu chứng minh Lơ hội có 200 thành phần có hoạt tính sinh học khác nhau, có 75 thành phần mang lại lợi ích sức khỏe chất dinh dưỡng cần thiết cho thể người Trong nghiên cứu này, định tính định lượng loại hợp chất hữu có Lơ hội trồng địa phương Quan trọng hơn, chiết tách phân lập hợp chất Aloin (barbaloin), hợp chất có giá trị cao mặt y học sử dụng điều chế thuốc Tình hình nghiên cứu Nhiều nghiên cứu nhà khoa học cho thấy Lơ Hội có nhiều tác dụng như: trị vết thương, ngăn ngừa chữa bệnh, làm thức uống, dưỡng da, dầu gội,… Do ngày Lô Hội sử dụng để làm nguyên liệu chế biến loại mỹ phẩm, thực phẩm dược phẩm hữu dụng bổ ích cho sống Tuy nhiên, tính hiệu sản phẩm Lơ Hội phụ thuộc vào độ tinh khiết sản phẩm phương pháp sản xuất cách bảo quản Chúng ta biết trình chế biến, việc làm khô phần ruột Lô Hội để làm thành dạng bột làm hầu hết đặc tính y học nó, để trì đặc tính có lợi thời gian dài sản phẩm phải giữ ổn định mặt hóa học Đây cơng việc phức tạp, khó khăn điều thúc nhà khoa học giới tập trung vào nghiên cứu.[7] Nhận thức tính hữu ích Lô Hội, nhà nghiên cứu khơng ngừng nỗ lực tìm kiếm cách thức để trích ly, bảo quản nhằm hạn chế tối đa thay đổi phẩm chất chất gel phần nhựa Lô Hội Mục tiêu nghiên cứu - Xây dựng quy trình chiết tách cao vỏ Lô Hội - Xác định khả kháng khuẩn cao vỏ Lô hội theo phương pháp xác định đường kính vịng vơ khuẩn Nhiệm vụ nghiên cứu - Phương pháp chiết cao từ vỏ Lô hội - Định tính thành phần hóa học có cao vỏ Lô hội - Đánh giá khả kháng số vi sinh vật cao vỏ Lô hội Cấu trúc báo cáo đề tài HDKH: ThS Vũ Thị Hồng Phượng Trang Chủ nhiệm: Nguyễn Thanh Nguyên download by : skknchat@gmail.com ... phẩm từ Lô hội Đề tài ? ?Nghiên cứu chiết tách thành phần hoá học khảo sát khả kháng vi sinh vật cao chiết vỏ Lô Hội (Aloe Vera) trồng tỉnh Bà Rịa – Vũng Tàu” tiến hành vỏ Lô hội nhằm đánh giá hợp... Hội 52 Hình 7: Khả kháng B cereus cao vỏ Lô Hội 52 Hình 8: Khả kháng S typhi cao vỏ Lô Hội 53 Hình 9: Khả kháng P aeruginosa cao vỏ Lô hội 53 Hình 10: Khả kháng S aureus cao. .. lượng cao chiếtvỏ Lô Hội 42 Hình 4: Biểu đồ ảnh hưởng thời gian đến khối lượng cao chiết vỏ Lô Hội 43 Hình 5: Sắc ký đồ cao vỏ Lô hội 49 Hình 6: Khả kháng E.coli cao vỏ Lô