Phân lập và nghiên cứu đặc điểm một số mẫu nấm Magnaporthe oryzae gây bệnh đạo ôn trên lúa tại Thanh Hóa

Nghiên cứu tiến hành điều tra, thu thập 9 mẫu lúa nhiễm bệnh và phân lập được 3 mẫu nấm đạo ôn M. oryzae 1Y, 4Y và 5Y trên một số giống lúa trồng vụ Xuân 2020 tại 3 huyện của tỉnh Thanh Hóa. Các mẫu phân lập nấm M. oryzae khi được nuôi cấy trên các loại môi trường dinh dưỡng nhân tạo khác nhau thể hiện các đặc điểm về hình thái tản nấm tương đối đa dạng về màu sắc và mức độ phát triển sợi nấm trên bề mặt môi trường.

TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 PHÂN LẬP VÀ NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM MỘT SỐ MẪU NẤM MAGNAPORTHE ORYZAE GÂY BỆNH ĐẠO ÔN TRÊN LÚA TẠI THANH HÓA Lê Thị Phượng1, Nghiêm Thị Hương1, Trần Thị Mai1, Hồng Thị Lan Thương1 TĨM TẮT Bệnh đạo ôn hại lúa nấm Magnaporthe oryzae bệnh có ảnh hưởng lớn thường xuyên tới suất, sản lượng tất vùng trồng lúa Việt Nam giới Trong nghiên cứu này, tiến hành điều tra, thu thập mẫu lúa nhiễm bệnh phân lập mẫu nấm đạo ôn M oryzae 1Y, 4Y 5Y số giống lúa trồng vụ Xuân 2020 huyện tỉnh Thanh Hóa Các mẫu phân lập nấm M oryzae nuôi cấy loại môi trường dinh dưỡng nhân tạo khác thể đặc điểm hình thái tản nấm tương đối đa dạng màu sắc mức độ phát triển sợi nấm bề mặt môi trường Các loại môi trường nuôi cấy khác ảnh hưởng rõ ràng tới khả phát triển sợi nấm, khả sinh bào tử khả nảy mầm bào tử Trong môi trường PSA PGA giúp sợi nấm M oryzae phát triển mạnh mơi trường OMA Cám agar lại tạo điều kiện để nấm sinh bào tử nhiều Bào tử thu hoạch mơi trường Cám, Bột gạo Bột mì có tỷ lệ nảy mầm cao rõ rệt so với mơi trường khác Từ khóa: Bệnh đạo ơn, Magnaporthe oryzae, môi trường, phân lập, bào tử ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh đạo ôn nấm Magnaporthe oryzae (anamorph, Pyricularia oryzae) bệnh gây thiệt hại lớn đến suất chất lượng lúa gạo tất khu vực trồng lúa giới [2] Thiệt hại nấm bệnh đạo ơn ước tính lên tới 10% - 30% sản lượng lúa tồn cầu Đặc biệt, đạo ơn cổ bơng gây hại nặng, lên đến 80% suất vụ dịch nặng Do tác động lớn sản xuất nông nghiệp mức độ lây lan, nấm bệnh M oryzae nghiên cứu rộng rãi mơ hình tương tác tác nhân gây bệnh ký chủ, cấp độ sinh học tế bào phân tử [4] Trong điều kiện sản xuất Việt Nam, bệnh xuất hầu hết vụ năm, nhiên phát triển nặng vụ Xuân hay vụ Đông Xuân trời nhiều mây, âm u, nắng, thời tiết mát, ẩm độ cao, kết hợp đêm có sương mù Bệnh thường gây hại nặng ruộng sử dụng giống lúa nhiễm bệnh, gieo sạ dày, bón phân thừa đạm Bệnh đạo ơn gây hại tất giai đoạn phát triển lúa từ giai đoạn lúa tới trỗ bông, tấ n cơng lá, thân, cổ bông, cổ gié hoă ̣c hạt lúa [1] Nấm Magnaporthe oryzae có khả biến dị cao, tạo nhiều chủng, nhóm nịi sinh học, nhanh chóng vượt qua tính kháng bệnh giống lúa mang gen kháng bệnh đạo ơn vịng - năm dẫn đến khó khăn cơng tác phịng trừ bệnh chọn tạo giống kháng [2] Khoa Nông - Lâm - Ngư nghiệp, Trường Đại học Hồng Đức; Email: lephuong@hdu.edu.vn 107 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 Để nghiên cứu khía cạnh khác bệnh đạo ôn hại lúa, việc phân lập mẫu nấm bệnh đạo ôn, xác định môi trường dinh dưỡng phù hợp cho sinh trưởng hình bào tử nấm M oryzae cần thiết để thiết lập điều kiện cho việc thực nghiên cứu chuyên sâu bệnh đạo ôn vùng, khu vực địa lý cụ thể Từ lý thực đề tài nghiên cứu nhằm xác định đặc điểm sinh trưởng, phát triển số mẫu phân lập nấm M oryzae gây bệnh đạo ơn lúa Thanh Hóa để xác định môi trường tối ưu phục vụ nuôi cấy mẫu phân lập nấm M oryzae nhằm phục vụ nghiên cứu chuyên sâu PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Điều tra thu thập mẫu nấm bệnh đạo ôn Thời gian điều tra, thu thập mẫu bệnh: Điều tra thu thập mẫu bệnh thực từ tháng đến tháng năm 2020 (vụ lúa Xuân 2020) Địa điểm thu mẫu: huyện địa bàn tỉnh Thanh Hóa Quảng Xương, Đơng Sơn Quan Hóa Phương pháp thu thập: Tiến hành thăm ruộng lúa, kiểm tra lúa có triệu chứng bệnh đạo ôn giống lúa trồng địa phương, nhổ cắt lá/ lúa có vết bệnh đạo ôn đặt túi nhựa chứa giấy ẩm, ghi rõ thông tin (thời gian, đại điểm, giống lúa ), mang phịng thí nghiệm bảo quản điều kiện mát để thực phân lập 2.2 Phương pháp phân lập nấm đạo ơn Quy trình phân lập nấm đạo ơn phịng thí nghiệm để thực theo bước sau đây: 1) Phần lúa có vết bệnh khử trùng bề mặt ethanol 70% 30 giây (lặp lại - lần) 2) Rửa mẫu nước cất vô trung từ đến lần, thấm khô bề mặt giấy thấm vô trùng 3) Mẫu bệnh cắt thành miếng nhỏ (0,5 cm) đặt bề mặt môi trường PDA WA, để tủ định ôn 26 - 28oC để nấm phát triển từ - ngày 4) Khi sợi nấm mọc từ mẫu môi trường nhân tạo, tiến hành cấy chuyển nấm theo phương pháp cấy đỉnh sinh trưởng sợi nấm để mẫu nấm 2.3 Nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng, phát triển nấm bệnh đạo ôn Các mẫu phân lập sau làm đặt mã (tên) để phân biệt dùng để nghiên cứu đặc điểm sinh trưởng phát triển môi trường nuôi cấy nhân tạo khác Mỗi mẫu nấm cấy đĩa môi trường giống với lần lặp lại Các bước tiến hành sau: 1) Chuẩn bị đĩa nguồn: Cấy nấm vào đĩa petri môi trường PSA, ủ nhiệt độ 26-28oC - ngày, lúc đường kính tản nấm khoảng cm sử dụng nguồn 2) Chuẩn bị môi trường nghiên cứu với công thức pha loại môi trường: 108 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 PSA: 200g khoai tây + 20g đường succarose + 20g agar + 1L nước cất PGA: 200g khoai tây + 20g đường glucose + 20g agar + 1L nước cất OMA: 50g bột mạch + 20g đường succarose + 20g agar + 1L nước cất Bột mì agar: 50g bột mì + 20g đường succarose + 20g agar + 1L nước cất Bột gạo agar: 20g bột gạo + 20g đường succarose + 20g agar + 1L nước cất Cám agar: 20g cám + 20g đường succarose + 20g agar + 1L nước cất 3) Cấy nấm: Sử dụng bột kim loại (đường kính 5mm) để lấy khoanh nấm từ đĩa nấm nguồn vị trí rìa tản nấm (phần nấm sinh trưởng), cấy khoanh nấm vào vị trí tâm đĩa môi trường, ủ tủ định ổn 26-28oC 4) Theo dõi sinh trưởng tản nấm đo đường kính tản nấm: Tiến hành đo đường kính tản nấm thời điểm: 2, 4, 6, 8, 10 ngày sau cấy nấm Đo tản nấm từ phía đáy đĩa petri, đĩa đo lần theo hai đường xun tâm vng góc (hình dấu +) 5) Xác định khả sinh bào tử nảy mầm bào tử loại môi trường nuôi cấy khác nhau: Sau cấy nấm 14 ngày, sử dụng bút lông mềm rửa sợi nấm bề mặt đĩa petri nước cất vô trùng Đặt đĩa nấm ánh sáng đèn neon (20w) (12 sáng/ 12 tối) ngày để nấm sinh bào tử Sử dụng 20 mL nước cất chứa Tween 20 (v/v : 1/10.000) để rửa bề mặt đĩa nấm thu bào tử Lấy giọt dung dịch bào tử (10µL) nhỏ lên buồng đếm bào tử để xác định nồng độ bào tử kính hiển vi 6) Đánh giá khả nảy mầm bào tử: Lấy giọt dung dịch bào tử (10µL) nhỏ lên lam kính, đậy lamen quan sát nảy nầm bào tử (quan sát quan trường/ lam kính) thời điểm: 1, 2, 4, sau làm mẫu Tỷ lệ nảy mầm tính cách đếm số bào từ nảy mầm tổng số bào tử quan trường 2.4 Phương pháp phân tích và xử lý số liêụ Các số liệu theo dõi xử lý phần mềm thống kê Kyplot 5.0, sử dụng công cụ đa so sánh Tukey’s test Dunnet’s test với ý nghĩa thống kê p < 0,05 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết phân lập mẫu nấm đạo ôn thu thập Thanh Hóa Trong vụ lúa Xn 2020, chúng tơi tiến hành điều tra thu thập mẫu bệnh đạo ơn huyện tỉnh Thanh Hóa, phân lập mẫu nấm đạo ôn M oryzae (Bảng 1) Bảng Nguồn gốc mẫu phân lập nấm đạo ơn Thanh Hóa Mã (tên) mẫu phân lập 1Y 4Y 5Y Giống lúa C ưu đa hệ số Nếp thơm TBR225 Địa điểm thu thập Đông Ninh, Đơng Sơn, Thanh Hóa Quảng Xương, Thanh Hóa Quan Hóa, Thanh Hóa 109 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 Hình Triệu chứng bệnh đạo ôn giống lúa thu thập Thanh Hóa Ba mẫu phân lập 1Y, 4Y, 5Y biểu triệu chứng bệnh điển hình mức độ khác tự nhiên giống lúa thời điểm mà tiến hành lấy mẫu (Hình 1) Mẫu phân lập 1Y 4Y gây bệnh nặng giống tương ứng C, ưu đa hệ số Nếp thơm, với triệu chứng bệnh vết bệnh hình thoi liên kết tạo thành đám hoại tử lớn lúa Mẫu phân lập 5Y gây bệnh nhẹ giống TBR225 với triệu chứng vết bệnh ít, dạng giọt dầu 3.2 Đặc điểm hình thái mẫu phân lập nấm M oryzae môi trường Các mẫu phân lập nấm đạo ôn 1Y, 4Y, 5Y nuôi cấy loại môi trường nhân tạo khác nhau, bao gồm: PSA, PGA, OMA, Cám agar, Bột mì, Bột gạo Qua theo dõi nhận thấy sau ngày ni cấy, hình thái tảm nấm tiêu màu sắc độ xốp chưa thể khác biệt lớn mẫu phân lập môi trường nuôi cấy khác Lúc sợi nấm non, chưa biến màu, mọc sát bề mặt môi trường Sau ngày nuôi cấy, sợi nấm phát triển từ yếu đến mạnh bề mặt mơi trường, chuyển màu tạo nên hình thái tản nấm khác biệt mẫu phân lập môi trường nuôi cấy Đặc biệt sau ngày nuôi cấy, khác biệt hình thái thể rõ ràng (Hình 2; Bảng 2) Hình Đặc điểm hình thái tản nấm mẫu phân lập M oryzae môi trường nuôi cấy khác (quan sát ngày sau cấy) 110 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 Trên môi trường PSA, mẫu phân lập 4Y 5Y phát triển mạnh bề mặt môi trường, tạo thành lớp dày sợi bơng xốp có màu trắng Mẫu 2Y phát triển sợi hơn, có màu xám xốp phần tâm tản nấm (Hình 2) Trên mơi trường PGA, mẫu phân lập phát triển bề mặt, môi trường bị nhăn theo hướng tâm ngồi Trên mơi trường OMA, sợi nấm phát triển mạnh bên môi trường, yếu bề mặt, sợi nấm biến màu nâu tới nâu đen Trên môi tường Cám, Bột mì,và Bột gạo, sợi nấm phát triển yếu bề mặt, hình thái tản nấm khơng có khác biệt lớn mẫu phân lập Những khác biệt hình thái tản nấm mẫu phân lập nuôi cấy môi trường nhân tạo khác mô tả cụ thể Bảng quan sát trực quan qua Hình Bảng Đặc điểm hình thái tản nấm mẫu phân lập nấm M oryzae loại môi trường khác TT Mẫu phân lập M oryzae Môi trường 1Y 4Y 5Y PSA Xám, mịn Trắng, xốp Trắng, xốp PGA Xám, rìa mịn, tâm nhăn Đen, rìa mịn, tâm nhăn Đen, rìa mịn, tâm nhăn OMA Nâu đen, tâm xốp trắng Vàng nhạt, mịn Đen, tâm xốp trắng Cám Nâu đen, tâm xốp trắng Vàng nhạt, tâm xốp Đen, mịn Bột gạo Nâu, tâm xốp Vàng nhạt, mịn Đen, mịn Bột mì Nâu, mịn Nâu nhạt, mịn Đen, mịn 3.3 Khả sinh trưởng mẫu phân lập nấm M oryzae môi trường Để xác định môi trường nuôi cấy phù hợp cho phát triển sợi nấm M.oryzae, đường kính tản nấm mẫu phân lập đo thời điểm 2, 4, 6, 8, 10 ngày sau cấy (Bảng 3) Bảng Đường kính tản nấm mẫu phân lập nấm M oryzae loại môi trường khác Mẫu phân lập 1Y 4Y Môi trường PSA PGA OMA Cám Bột gạo Bột mì PSA PGA OMA Cám Bột gạo Bột mì Đường kính tản nấm M oryzae sau ngày cấy (cm) ngày ngày 10 ngày 1,60 2,95 4,90 6,75 8,10 ± 0,14b 1,65 3,63 5,05 6,70 8,20 ± 0,00b 1,33 2,56 3,55 5,00 6,50 ± 0,10c 1,43 2,83 3,85 4,90 5,90 ± 0,00c 1,50 2,60 4,05 5,10 7,00 ± 0,14bc 1,40 2,43 3,66 4,60 6,46 ± 0,25bc 1,95 3,50 5,13 6,60 9,00 ± 0,00a 1,70 3,63 4,95 6,45 8,50 ± 0,26b 1,40 2,50 3,55 5,05 6,30 ± 0,22c 1,60 2,85 4,10 4,95 6,25 ± 0,06c 1,55 3,15 4,35 5,65 7,25 ± 0,05bc 1,45 2,05 3,10 4,55 6,05 ± 0,07c 111 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 5Y PSA PGA OMA Cám Bột gạo Bột mì 8,10 ± 8,15 ± 6,50 ± 6,23 ± 7,00 ± 6,90 ± 0,14b 0,10b 0,10c 0,26c 0,14bc 0,13bc Ghi chú: Trong cột, chữ khác thể khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05); ± SE 1,90 1,80 1,50 1,66 1,45 1,30 2,85 3,15 2,05 3,50 3,46 2,83 5,90 4,49 5,95 4,10 4,15 3,70 6,80 6,60 5,50 5,23 5,20 5,05 Sau ngày nuôi cấy, đường kính tản mẫu phân lập 1Y, 4Y, 5Y dao động khoảng là: 1,33 cm - 1,65 cm, 1,40 cm - 1,95 cm, 1,30 cm - 1,90 cm, môi trường nuôi cấy khác Qua theo dõi thí nghiệm chúng tơi nhận thấy, sau ngày, đường kính tản nấm tăng trung bình khoảng cm Đến ngày thứ 10 sau cấy, mẫu phân lập 1Y phát triển mạnh mơi trường PSA PGA, với đường kính đạt 8,00 cm; sợi nấm phát triển yếu môi trường OMA, bột mì; 1Y phát triển yếu mơi trường Cám agar (5,90 cm), khác biệt có ý nghĩa so với hai môi trường PSA PGA Tương tự vậy, hai mẫu phân 4Y 5Y phát triển mạnh hai môi trường PSA PGA, phát triển yếu ba môi trường nuôi cấy lại Đặc biệt, mẫu phân lập 4Y biểu khả sinh trưởng mạnh môi trường PSA so với 1Y 5Y, với đường kính tản nấm đạt trung bình 9cm (kín đĩa petri) (Bảng 3) Kết nghiên cứu tương đồng với số nghiên cứu trước có kết Hossain (2000) môi trường PDA hỗ trợ tăng trưởng hướng tâm tối đa (85,00 mm), mơi trường chứa dịch chiết kí chủ bổ sung 0,2% sacaroza (80,33 mm) môi trường bột yến mạch (75,00 mm) Căn vào đặc điểm phát triển tản nấm môi trường khác nhau, hai môi trường PSA PGA sử dụng cho mục đích để cấy truyền tạo nguồn lưu giữ nấm 3.4 Khả sinh bào tử mẫu phân lập nấm M oryzae môi trường Ba mẫu phân lập 1Y, 4Y, 5Y nuôi cấy loại môi trường nhân tạo để xác định loại mơi trường tốt cho hình thành bào tử nấm M oryzae (Bảng 4) Bảng Khả sinh bào tử mẫu phân lập nấm M oryzae loại môi trường khác TT Môi trường PSA PGA OMA Cám Bột gạo Bột mì Các mẫu phân lập nấm M oryzae (Bt x 104 /mL) 1Y 4Y 5Y c c 1,90 2,40 5,60c 3,76c 1,80c 4,00c 12,28a 14,05a 14,64a 11,63a 13,20a 15,40a 2,24c 4,32c 6,23c 9,20ab 11,28ab 12,80a Ghi chú: Trong cột, chữ khác thể khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) 112 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 Mẫu phân lập 1Y sinh bào tử nhiều môi trường OMA Cám agar, đạt số bào tử 12,28 x 104 (Bt/1mL) 11,63 x 104 (Bt/1mL) 1Y sinh bào tử mơi trường Bột mì (9,20 x 104 (Bt/1mL)) đạt số lượng bào tử thấp PSA PGA Tương tự, hai mẫu phân lập 4Y 5Y đạt số lượng bào tử cao hai môi trường OMA Cám agar, tiếp đến mơi trường Bột mì, đạt số lượng bào tử thấp ba mơi trường cịn lại: PSA, PGA Bột gạo Như vậy, rõ ràng môi trường nuôi cấy khác ảnh hưởng lớn đến khả sinh bào tử nấm M oryzae Mẫu phân lập 5Y đạt số bào tử môi trường khác cao hai mẫu phân lập 1Y 4Y, nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (Bảng 4) Nghiên cứu trước Xinfa cộng (1995) cho biết, nấm đạo ôn phân lập từ ký chủ bao gồm lúa cỏ dại thông thường ruộng lúa sinh bào tử mạnh hạt lúa mạch lúa miến khử trùng Như vậy, để kích thích khả sinh bào tử nấm M oryzae việc bổ sung thêm thành phần ký chủ vào mơi trường ni cấy có ý nghĩa Từ kết nghiên cứu này, môi trường OMA Cám agar xác định phù hợp để sử dụng nuôi cấy nấm M oryzae cho mục đích sản xuất bào tử, phục vụ nghiên cứu lây nhiễm bệnh nhân tạo 3.5 Khả nảy mầm bào tử nấm M oryzae môi trường Để thực trình xâm nhiễm, phát tán gây hại lúa, bào tử nấm đạo ôn nảy mầm tạo ống mầm điều kiện ẩm độ cao, từ ống mầm hình thành thể áp màu đen (appressoria) áp sát bề mặt lúa, tạo áp lực turgor lớn giúp nấm xâm nhập vào bên tế bào lúa thơng qua vịi hút để hấp thu dinh dưỡng, mở rộng xâm nhiễm tế bào xung quanh (Hình 3) Hình Bào tử nấm M oryzae quan sát kính hiển vi điện tử A Bào tử (s-spore/conidium) cành bào tử (c-conidia); B Bào tử nảy mầm tạo ống mầm (g-germtube); C Bào tử hình thành thể áp (a-appressorium) từ ống mầm Trong nghiên cứu theo dõi nảy mầm bào tử mẫu phân lập nấm M oryzae thu đĩa môi trường nuôi cấy khác nhau, qua đánh giá tiềm gây bệnh chúng Tỷ lệ nảy mầm bào tử mẫu phân lập kiểm tra thời điểm 1, 2, sau bào tử thu hoạch từ đĩa petri nuôi nhỏ lam kính để quán sát kính hiển vi (Bảng 5) 113 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 Bảng Khả bào tử nảy mầm mẫu phân lập nấm M oryzae loại môi trường khác Môi trường 1Y PSA 5,82 PGA 2,45 OMA 8,77 Cám 5,10 Bột gạo 9,50 Bột mì 5,43 4Y 2,94 3,89 2,20 1,60 10,30 1,63 Tỷ lệ bào tử nảy mầm sau quan sát (%) giờ 5Y 1Y 4Y 5Y 5Y 1Y 4Y bc ab 3,42 18,80 9,06 8,29 32,14±3,53 49,23±6,04 61,77±5,04a 3,03 17,45 15,55 5,35 55,23±5,45ab 54,11±3,99 ab 30,23±6,40c 1,88 14,56 18,52 8,04 48,40±4,45ab 52,90±4,87 ab 37,23±3,09bc 7,81 16,56 10,68 12,34 55,49±5,87ab 69,26±5,83 ab 70,34±9,11a 3,32 21,45 15,34 11,08 60,08±6,33a 75,05±6,01 a 65,87±8,54a 6,08 10,14 13,27 10,27 36,50±5,65ab 85,45±7,23 a 56,38±5,02ab Ghi chú: Trong cột, chữ khác thể khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05); ± SE Sau giờ, tỷ lệ nảy mầm mẫu phân lập nuôi dao động từ 2% - 10% tùy vào mơi trường ni cấy khác nhau, 1Y 4Y có tỷ lệ nảy mầm cao 9,50% 10,30% môi trường Bột gạo, 5Y đạt tỷ lệ cao 7,81% môi trường PGA Sau giờ, tỷ lệ nảy mầm trung bình dao động khoảng 5% - 20% tùy thuộc vào môi trường khác Sau giờ, mẫu phân lập 1Y đạt tỷ lệ nảy mầm trung bình dao động từ 30% - 60%, với tỷ lệ nảy mầm cao môi trường Bột gạo, 60,08% Mẫu phân lập 4Y có tỷ lệ nảy mầm trung bình dao động từ 50-85%, cao mơi trường Bột mì, 85,45% Mẫu phân lập 5Y có tỷ lệ nảy mầm trung bình dao động từ 30% - 70%, cao môi trường Cám Bột mì với tỷ lệ 65,87% 70,34% Nhìn chung, tỷ lệ nảy mầm có xu hướng cao rõ rệt ba loại mơi trường Cám, Bột gạo Bột mì mẫu phân lập (Bảng 5) KẾT LUẬN Trong nghiên cứu này, tiến hành điều tra thu thập mẫu bệnh đạo ôn vụ lúa Xuân 2020 huyện tỉnh Thanh Hóa Kết bước đầu phân lập làm xác định mẫu phân lập nấm đạo ôn M oryzae 1Y, 4Y 5Y từ mẫu bệnh giống lúa tương ứng C.ưu đa hệ số 1, Nếp thơm TBR225 Các mẫu phân lập nấm đạo ôn 1Y, 4Y 5Y nuôi cấy loại môi trường dinh dưỡng nhân tạo khác thể đặc điểm hình thái tản nấm tương đối đa dạng màu sắc mức độ phát triển sợi nấm bề mặt môi trường Các loại môi trường nuôi cấy khác ảnh hưởng rõ ràng tới khả phát triển sợi nấm, khả sinh bào tử khả nảy mầm bào tử Trong môi trường PSA PGA giúp sợi nấm M oryzae phát triển mạnh mơi trường OMA Cám agar lại tạo điều kiện để nấm sinh bào tử nhiều Bào tử thu hoạch môi trường Cám, Bột gạo Bột mì có tỷ lệ nảy mầm cao rõ rệt so với mơi trường khác 114 TẠP CHÍ KHOA HỌC TRƯỜNG ĐẠI HỌC HỒNG ĐỨC - SỐ 55.2021 Từ kết nghiên cứu, khuyến cáo sử dụng hai môi trường PSA PGA để nuôi cấy tạo nguồn lưu giữ nấm Môi trường OMA Cám agar dùng cho mục đích sản xuất bào tử nấm, phục vụ lây nhiễm bệnh nhân tạo nghiên cứu chuyên sâu khác TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] [2] [3] [4] [5] Vũ Triệu Mân-chủ biên (2007), Giáo trình Bệnh chun khoa, Nxb Nơng nghiệp, Hà Nội Dean R, Van Kan JA, Pretorius ZA, Hammond-Kosack KE, Di Pietro A, Spanu PD, Rudd JJ, Dickman M, Kahmann R, Ellis J, Foster GD (2012), The Top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology, Mol Plant Pathol, 13(4): 414-30 Hossain, M (2000), Studies on blast disease of rice caused by Pyricularia grisea (Cooke) Sacc in upland areas, M.Sc Thesis, University of Agricultural Sciences, Dharwad Lynne Boddy (2016), Pathogens of Autotrophs, In the book The Fungi (Third Edition) Xinfa, D.U., S Shuyan, Z Zhong and T.R Xiang (1995), Evaluation of culture techniques for stimulating sporulation of Pyricularia, Acta Agricultural Zhejiangensis, 7: 408-472 ISOLATION AND STUDYING THE CHARACTERISTICS OF MAGNAPORTHE ORYZAE FROM RICE IN THANH HOA PROVINCE Le Thi Phuong, Nghiem Thi Huong, Tran Thi Mai, Hoang Thi Lan Thuong ABSTRACT Rice blast disease, caused by Magnaporthe oryzae, is one of the most destructive disease of rice worldwide In this study, rice samples infected with blast pathogens were collected in the Spring season 2020 in districts of Thanh Hoa province Three isolates of the rice blast fungi 1Y, 4Y, and 5Y cultrured on different media showed the corresponding morphological characteristics varied in color and aerial mycelium growth The different cultrure media are also well defined for the growth of mycelium, the sporeproducing ability and spore germination While PSA ad PGA helped the mycelium of M oryzae thrive, the OMA and rice bran medium created the better conditions of sporulation The spores harvested from culture media of rice bran, rice flour and wheat flour performed the higher germination rates as compared to the other culture media Keywords: Rice blast, Magnaporthe oryzae, media, isolation, spore * Ngày nộp bài:12/10/2020; Ngày gửi phản biện: 23/10/2020; Ngày duyệt đăng: 12/7/2021 * Bài báo kết nghiên cứu từ đề tài cấp sở mã số ĐT-2019-11 Trường Đại học Hồng Đức 115 ... thập mẫu bệnh đạo ôn huyện tỉnh Thanh Hóa, phân lập mẫu nấm đạo ôn M oryzae (Bảng 1) Bảng Nguồn gốc mẫu phân lập nấm đạo ôn Thanh Hóa Mã (tên) mẫu phân lập 1Y 4Y 5Y Giống lúa C ưu đa hệ số Nếp... mì mẫu phân lập (Bảng 5) KẾT LUẬN Trong nghiên cứu này, tiến hành điều tra thu thập mẫu bệnh đạo ôn vụ lúa Xuân 2020 huyện tỉnh Thanh Hóa Kết bước đầu phân lập làm xác định mẫu phân lập nấm đạo. .. oryzae gây bệnh đạo ơn lúa Thanh Hóa để xác định môi trường tối ưu phục vụ nuôi cấy mẫu phân lập nấm M oryzae nhằm phục vụ nghiên cứu chuyên sâu PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Điều tra thu thập mẫu nấm