(LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tạo các dòng ngô mang gen isopentenyl transferase (IPT) bằng phương pháp biến nạp nhờ vi khuẩn agrobacterium tumefaciens​

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT  LUẬN VĂN THẠC SĨ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 NGHIÊN C U TẠO CÁC NG NG ISOPENTENYL TRANSFERASE (IPT NẠP NH MANG G N NG PH NG PHÁP I N VI KHU N AGROBACTERIUM TUMEFACIENS Người hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Văn Đồng H vi n : Tr n uy H ng Hà Nội – 2015 download by : skknchat@gmail.com L i cảm n Để hồn thành luận văn này, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới guy n ăn Đ ng tận t nh, d u dắt, h ớng dẫn, truy n qu b u c ng nh t nh ng inh nghi ng vi n t o i u ki n giúp ỡ qu tr nh học tập nghi n cứu Tôi xin g i l i ơn ến phòng t o t o i u i n tận t nh h ớng dẫn ọi th t c ể c thể hồn thành luận văn xin g i l i ơn tới tập thể c n b hịng thí nghi m Trọng iể Cơng ngh tế bào hực vật - Vi n Di truy n ông nghi p giúp ỡ nhi t t nh suốt th i gian thực hi n h a luận Cuối c ng nh ng hông b n bè, nh ng ng gian i ph n quan trọng, xin g i tới bố mẹ, anh chị c ng quan tâ , ng h chỗ dựa cho suốt th i h a luận này, c ng nh cu c sống ôi ghi nhớ hông bao gi qu n giúp ỡ vô c ng to lớn ến tất qu th y cô, gia ôi xin g i nh, b n bè lịng biết ơn vơ tận Hà Nội, ngày 24 tháng 12 năm 2015 Học viên n y H ng i download by : skknchat@gmail.com M c c L i cảm n i M c c ii nh m c h nh v iv nh m c ảng v nh m c c c ch vi t t t vi M Đ U Ch ng –T NG QUAN 1.1 Nguồn gốc ngô 1.2 T nh h nh nghiên cứu ngô th giới 1.3 T nh h nh nghiên cứu ngô Việt Nam: 1.4 C sở ho học v nghiên cứu nạp gen vào thực vật ph ng ph p Agrobacterium tumefaciens 13 1.4.1 Ti-Plasmid 14 1.4.2 Chức c 1.4.3 C ch chuy n gen ằng A tumefaciens 16 1.4.4 Gen ch th - gen chọn ọc c ch hoạt động chọn lọc c a hygromycin 18 T-DNA 16 C ch ch u hạn t 1.5 ng già h gen IPT 19 1.5.1 C ch ch u hạn c 1.5.2 Hiện t 1.5.3 Đi u hò già h 1.5.4 Gen ipt promoter pSARK12 21 C c ph 1.6 Ph 1.6.2 Ki m tr v i trò c ng ph p Southern Cyto inin 20 ot 21 ch u hạn t i ng – VẬT LIỆU VÀ PH 2.1 c c y u tố ảnh h ởng 20 ng ph p i m tra c mặt i u c a gen bi n nạp 21 1.6.1 Ch ng già h thực vật 19 22 NG PHÁP 24 Vật liệu 24 2.1.1 Vật liệu thực vật 24 2.1.2 Ch ng vi khuẩn vector dùng chuy n gen 24 2.1.3 H 2.2 Ph chất thi t b sử d ng 24 ng ph p nghiên cứu 25 2.2.1 Quy tr nh chuy n gen vào phôi non thông qu vi huẩn Agrobacterium tumefaciens 25 ii download by : skknchat@gmail.com 2.2.2 Phân tích chuy n gen ph 2.2.3 Đ nh gi 2.2.4 Đ nh gi h Đ 2.3 Ch ch u hạn c già c m, th i gi n ph ng ph p sinh học phân tử 27 c c dịng ngơ chuy n gen th i u iện 30 c t h i cành 31 ng ph p xử ý số liệu 31 ng - K T QUẢ 32 3.1 K t c 3.2 Ki m tr qu tr nh chuy n gen,chọn ọc t i sinh c ằng ph giống ngô 32 ng ph p sinh học phân tử 35 3.2.1 K t t ch chi t NA t ng số 35 3.2.2 K t phân tích chuy n gen ằng ph ng ph p PCR gen hpt 36 3.2.3 K t phân tích chuy n gen ằng ph ng ph p PCR gen ipt 37 3.2.4 K t phân tích Southern 3.3 K t đ nh gi 3.4 Ch ot c c dịng ngơ chuy n gen th hệ T 38 ch u hạn c K t đ nh gi qu tr nh h c c dịng ngơ chuy n gen th i già c hi c t 40 45 ng – THẢO LUẬN 46 4.1 Chuy n gen thông qu vi huẩn 46 4.2 Phân tích ằng ph 4.3 Đ nh gi s Ch ng ph p sinh học phân tử 47 ộ i u ch u hạn c u iện phòng thí nghiệm 49 ng – K T LUẬN VÀ KI N NGH 52 5.1 K t uận 52 5.2 Ki n ngh 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PH L C 59 iii download by : skknchat@gmail.com nh m c h nh v H nh 1: ấu trú Ti-plasmid 14 H nh : Hệ thống ve tor li n hợp 15 H nh : Hệ thống vector nhị thể (kép) 15 H nh 4: ấu trú T-DNA 16 H nh : S ấu trú ve tor pSI hyg-2 24 H nh : S quy tr nh huyển gen 27 H nh 7: Kh n ng ph h i- ti p nh n- t i sinh giống ng 32 H nh 8: T n số huyển gen gi ịnh 33 H nh 9: M t số h nh nh gi i o n huyển gen 33 H nh 10: K t qu iện i N t ng số 36 H nh 11: K t qu ph n t h P R gen hpt th hệ T0 37 H nh 12: K t qu ph n t h P R gen ipt th hệ T0 37 H nh 13: K t qu ph n t h P R gen ipt th hệ T1 38 H nh 14: K t qu Southern lot ng huyển gen th hệ T1 39 H nh 15: nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on nh lưới số r yx l h n 40 H nh 16: K t qu nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on n v o hi u o th n l v hi u i r i t i nh lưới số 41 H nh 17: K t qu nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on n v o tr ng lượng tư i t i nh lưới số 41 H nh 18: K t qu nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on n v o tr ng lượng kh t i nh lưới số 41 H nh 19: nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on nh lưới số r yx l h n 43 H nh 20: K t qu nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on n v o hi u o th n l v hi u i r i t i nh lưới số 43 H nh 21: K t qu nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on n v tr ng lượng tư i t i nh lưới số 44 H nh 22: K t qu nh gi kh n ng hịu h n gi i o n y on n v o tr ng lượng kh t i nh lưới số 44 H nh 23: nh gi qu tr nh h gi l H9 45 H nh 24: nh gi qu tr nh h gi l M8 45 iv download by : skknchat@gmail.com nh m c ảng ng 1: Ph n lo i thực v t ng 2: T nh h nh s n xuất ng tr n th giới n m g n y ng 3: T nh h nh s n xuất ng Việt Nam n m g n y 10 ng 4: Th nh ph n inh ng 100g h t 11 ng 5: Tr nh tự m i 29 ng 6: K t qu t ng hợp th nghiệm huyển gen chịu h n 32 ng 7: Số opy gen huyển 39 v download by : skknchat@gmail.com nh m c c c ch vi t t t WW i u kiện tưới nướ WS i u kiện x l h n SH hi u o th n l LRL hi u ir y i FWS Tr ng lượng tư i th n l FWR Tr ng lượng tư i r DWS Tr ng lượng kh th n l DWR Tr ng lượng kh r IM M i trường l y nhi m CCM M i trường REM M i trường nu i ph h i ECM M i trường h n l m s o SeM M i trường ph t sinh h i RM M i trường r r ng nu i vi download by : skknchat@gmail.com M y ng l n m y lư ng thực quan tr ng cho n n kinh t to n y lư ng thự h nh sống on người ũng ược phẩm Ở lư ng thự Đ U a th giới S n phẩm từ ng ngo i l thực phẩm nu i ng v t r thể ược ng d ng nhi u ng nh nước Trung Mỹ, N m Á v h u Phi, người ta s d ng ng l m h nh ho người với phư ng th c qu n n i Ng l u, l m t ng theo vùng ị l v t p y lư ng thự giúp nhi u n i gi i quy t n n i Việt N m S n phẩm từ ng ngo i l thực phẩm nu i sống on người ũng ng v t r thể ược ng d ng ng nh kh ng ngo i việc s d ng l m hất ốt ược phẩm G n y th n n l nguy n liệu ti m n ng ể ch t o x ng sinh h c S n lượng ng h ng n m ị gi m sút ng kể nhi u nh n tố sinh v t (biotic) ũng phi sinh (abiotic) Trong h n h n l nguy n nh n phi sinh quan tr ng n s n lượng ng m t l n với lượng nướ mư ph n ố kh ng gi m n h n 70% ất kh ằn c ng n 1,3 tấn/ha u dẫn tới k t qu thu ho ch ng kể so với ti m n ng thu ượ h n 10 tấn/ [64] Ch nh kh t ng tố qu tr nh lão h l , suy gi m kh n ng qu ng hợp dẫn ằn ã l n gi m sút s n lượng [84] ytokinin v i tr thi t y u n nhi u qu tr nh t ng trưởng v ph t triển c a thực v t ặc biệt ph n hi t o in vitro, ytokinin t h o [68] Trong v i tr rõ r ng việ giúp m l t h rời ch m tho i iệp l c tố Ngay c thực ti n th việc x l thư ng m i lớn v ho h v kéo Trong phư ng ph p nh t ịnh việc t o giống ã ướ v o việc t o nghĩ a rau sau thu y [45] truy n thống ã th nh ng y hịu h n, th việc b sung v kỹ thu t y huyển gen th h ng ược với h n h n ũng u ch ng minh ược k t qu c n p gen ipt- mã h ytokinin ũng m ng ytokinin giúp uy tr xanh tư i l u h n i tu i th c a hoa sau cắt khỏi ng nghệ sinh h ng nghệ nu i m m nh ã nghi n enzyme isopentenyl tr nsfer se li n qu n download by : skknchat@gmail.com u v bi n n sinh t ng hợp cytokinin isopentenyl adenine, ze tin v ihy roze tin v o m t số trường hợp như: lú - Oryza sativa [41], súp l - Brassica oleracea qu cho thấy [72] v x l h- Lactuca sativa L cv Evola [65], thuố l [84], v ng [85] u t th nh ng ịnh Nhằm ướ kh n ng hịu h n, húng t i ti n h nh mang gen isopentenyl transferase (ipt) huẩn Agrobacterium tumefaciens” với m  Bi n n p th nh  Kiểm tra  ướ y tr ng K t u ng [58], l c[78] u t o giống ng t i “Nghiên cứu tạo c c dịng ngơ ằng ph ng ph p i n nạp nh ti u: ng gen ipt v o m t số ng ng h nl c mặt c a gen ipt kỹ thu t sinh h nh gi kh n ng hịu h n ph n t y on th hệ T1 download by : skknchat@gmail.com vi Ch ng –T NG QUAN 1.1 Nguồn gốc ngô Ng hay bắp t n kho h ngu n từ ti ng T y l Zea mays L Trong ti ng Anh từ “m ize” n Nh (m z) (“M ize”- Oxford English Dictionary online edition) Từ “ orn” thường hay s d ng n y l orn” nghĩ l “ y lư ng thực c người h g i rút g n c “In i n nh i ng” (“M ize”-Oxford English Dictionary online edition.) ảng 1: Phân oại thực vật Giới (kingdom): Plantae (kh ng ph n h ng): Angiosperms (kh ng ph n h ng): Monocots (kh ng ph n h ng): Commelinids B (order): Poales H (family): Poaceae Chi (genus): Zea Lo i (species): Z mays nhi u gi thuy t ượ ịnh: 1.Sự thu n h h v r v ngu n gốc c ng trực ti p từ cỏ teosinte 2.Ngu n gốc từ y l i giữ ng thu n ỏ teosinte 3.Tr i qua hai hay nhi u qu tr nh thu n h d i v teosinte 4.Ti n h 102] Những nghi n uv từ y l i c a Z diploperennis thu i truy n h g n n i l n nh n a c ng ho ng lo i Trips um [73, y ho qu tr nh thu n h i n r v o kho ng n m 7000 T N t i mi n trung Mexi o v t ti n ỏ teosinte ho ng s ng nghi n i g n giống với ng ng y n y nm ng n l lo i lưu vự ls s [36] George Beadle v o n m 1939 ã hi sẻ qu n iểm n y uc m nh v ngu n gố y ng [27] Trướ v o n m 1926 Vavilop ũng ã h ng minh mi n trung n m Mehi o l trung t m ph t sinh th v download by : skknchat@gmail.com Multiple Comparisons Tukey HSD 95% Confidence Interval (I) (J) Dependent Variable Giong Giong Ty le phoi song sot -5.427 * 1.669 008 -9.55 -1.30 -6.270 * 1.787 004 -10.68 -1.86 5.427 * 1.669 008 1.30 9.55 -.843 1.913 899 -5.57 3.88 6.270 * 1.787 004 1.86 10.68 843 1.913 899 -3.88 5.57 Ty le mo seo phoi hoa chuyen 4.791 * 1.826 036 28 9.30 gen -8.682 * 1.955 000 -13.51 -3.85 -4.791 * 1.826 036 -9.30 -.28 -13.473 * 2.092 000 -18.64 -8.31 8.682 * 1.955 000 3.85 13.51 13.473 * 2.092 000 8.31 18.64 -2.858 1.428 130 -6.38 67 -1.320 1.528 667 -5.09 2.45 2.858 1.428 130 -.67 6.38 1.537 1.635 620 -2.50 5.58 1.320 1.528 667 -2.45 5.09 -1.537 1.635 620 -5.58 2.50 3 Ty le choi tai sinh chuyen gen Mean Difference (I- Std J) Error Sig * The mean difference is significant at the 0.05 level 62 download by : skknchat@gmail.com Lower Upper Bound Bound Descriptives Tan so chuyen gen gia dinh 95% Confidence Interval for Mean N Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 14 12 043 012 10 15 0 10 20 053 017 16 23 0 33 081 029 26 40 0 32 20 102 018 16 23 0 Total Test of Homogeneity of Variances Tan so chuyen gen gia dinh Levene Statistic df1 527 df2 Sig 29 596 ANOVA Tan so chuyen gen gia dinh Sum of Squares df Mean Square F Between Groups 224 112 Within Groups 095 29 003 Total 320 31 Sig 34.033 000 Multiple Comparisons Tan so chuyen gen gia dinh Tukey HSD 95% Confidence Interval (I) (J) Giong Giong -.075 * 024 011 -.13 -.02 -.210 * 025 000 -.27 -.15 075 * 024 011 02 13 -.135 * 027 000 -.20 -.07 210 * 025 000 15 27 135 * 027 000 07 20 Mean Difference (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound * The mean difference is significant at the 0.05 level 63 download by : skknchat@gmail.com Ph c 6: Ph n t h thống k nh gi kh n ng hịu h n Nh lưới số hú th h: i n 1,2,3,4,5 l n lượt l CH9.I.7.2, CH9.I.15.1 v H9 ng ph n t h: CH9.I.5.1, CH9.I.6.5, Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N PH Mean Std Deviation Std Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 31.1667 6.64267 2.21422 26.0607 36.2727 23.50 40.50 31.7778 6.70406 2.23469 26.6246 36.9310 24.00 46.00 33.3333 2.02073 1.16667 28.3136 38.3531 31.50 35.50 30.5000 4.16083 1.38694 27.3017 33.6983 25.00 38.50 35.3333 5.59576 1.86525 31.0321 39.6346 26.50 44.00 39 32.2821 5.70987 91431 30.4311 34.1330 23.50 46.00 38.1111 5.04218 1.68073 34.2353 41.9869 30.50 47.50 35.3889 7.65987 2.55329 29.5010 41.2768 23.00 46.00 37.3333 5.13160 2.96273 24.5857 50.0809 33.00 43.00 36.0556 6.14636 2.04879 31.3310 40.7801 24.00 44.50 39.8889 3.41667 1.13889 37.2626 42.5152 35.00 44.50 39 37.3590 5.69851 91249 35.5117 39.2062 23.00 47.50 1.21844 335696 111899 96041 1.47648 796 1.801 Trọng l n ân ều kiện ây h n 1.15878 285619 095206 93923 1.37832 771 1.654 1.25833 152893 088273 87853 1.63814 1.144 1.432 1.37889 211817 070606 1.21607 1.54171 1.058 1.684 1.00200 141586 047195 89317 1.11083 851 1.297 39 1.19482 270894 043378 1.10701 1.28263 771 1.801 Chiều cao ân ều kiện ây h n Total LRL Chiề dà rễ dà n ất ều kiện ây n Total FWS Total 64 download by : skknchat@gmail.com DWS 12167 026693 008898 10115 14218 083 160 Trọng l n k ô ân ều kiện ây h n 12056 026087 008696 10050 14061 085 174 12933 003055 001764 12174 13692 126 132 14289 022116 007372 12589 15989 102 173 11544 020082 006694 10001 13088 091 143 39 12546 024241 003882 11760 13332 083 174 92233 254111 084704 72701 1.11766 601 1.360 Trọng l n rễ ều kiện ây h n 85300 179737 059912 71484 99116 582 1.087 92533 147950 085419 55780 1.29286 788 1.082 1.00789 251584 083861 81450 1.20127 573 1.286 89033 219232 073077 72182 1.05885 643 1.281 39 91892 219304 035117 84783 99001 573 1.360 14644 031989 010663 12186 17103 095 194 Trọng l n k ô rễ ều kiện ây h n 15400 029513 009838 13131 17669 112 196 13733 020404 011780 08665 18802 115 155 14944 054139 018046 10783 19106 080 264 14922 034781 011594 12249 17596 107 220 39 14882 036203 005797 13708 16056 080 264 4.40000E1 6.878408 2.292803 38.71279 49.28721 37.000 56.000 Chiều cao ân ều kiện ới n ầy ủ 4.56111E1 10.916667 3.638889 37.21982 54.00240 25.500 58.000 3.96667E1 8.326664 4.807402 18.98209 60.35125 33.000 49.000 3.78889E1 7.423686 2.474562 32.18254 43.59524 31.000 54.000 4.62778E1 12.316430 4.105477 36.81053 55.74502 34.000 64.500 9.678485 1.549798 40.01644 46.29125 25.500 64.500 Total FWR Total DWR Total PH_WW Total 39 4.31538E1 LRL_WW 37.5556 6.19700 2.06567 32.7921 42.3190 30.50 49.00 Chiề dà rễ dà n ất 31.6667 3.54436 1.18145 28.9422 34.3911 25.50 36.50 65 download by : skknchat@gmail.com ều kiện n ớc ầy ủ 35.5000 2.29129 1.32288 29.8081 41.1919 33.00 37.50 31.8889 5.95177 1.98392 27.3140 36.4638 26.00 45.00 32.0000 3.21131 1.07044 29.5316 34.4684 27.00 36.50 39 33.4487 5.17559 82876 31.7710 35.1265 25.50 49.00 FWS_WW 1.4367 31804 10601 1.1922 1.6811 1.00 1.98 Trọng l n ân ều kiện ới ầy ủ 1.1838 32931 10977 9307 1.4369 76 1.64 1.4843 12552 07247 1.1725 1.7962 1.34 1.57 1.2986 27868 09289 1.0843 1.5128 81 1.72 1.5297 34189 11396 1.2669 1.7925 1.08 2.21 39 1.3716 32164 05150 1.2673 1.4758 76 2.21 DWS_WW 1336 01981 00660 1183 1488 10 16 Trọng l n k ô ân ều kiện ới ầy ủ 1300 05554 01851 0873 1727 03 20 1377 02468 01425 0763 1990 12 16 1344 03150 01050 1102 1587 08 18 1476 02712 00904 1267 1684 10 19 39 1365 03420 00548 1254 1476 03 20 FWR_WW 1.0849 23978 07993 9006 1.2692 75 1.50 Trọng l n rễ ều kiện ới ầy ủ 8770 31042 10347 6384 1.1156 21 1.24 1.2970 19975 11533 8008 1.7932 1.09 1.49 1.0193 15933 05311 8969 1.1418 83 1.30 1.1548 25782 08594 9566 1.3530 82 1.66 39 1.0542 26235 04201 9692 1.1393 21 1.66 DWR_WW 1330 05016 01672 0944 1716 08 21 Trọng l n k ô rễ ều kiện ới ầy ủ 1233 02542 00847 1038 1429 08 17 1310 01952 01127 0825 1795 11 15 1310 03632 01211 1031 1589 08 17 Total Total Total Total 66 download by : skknchat@gmail.com Total 1384 03393 01131 1124 1645 09 19 39 1314 03512 00562 1200 1428 08 21 Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic df1 df2 Sig PH 1.690 34 175 LRL 982 34 430 FWS 2.390 34 070 DWS 1.510 34 221 FWR 858 34 499 DWR 981 34 431 PH_WW 1.584 34 201 LRL_WW 1.770 34 158 FWS_WW 623 34 649 DWS_WW 2.578 34 055 FWR_WW 529 34 715 DWR_WW 1.825 34 147 ANOVA Sum of Squares PH Between Groups df Mean Square 129.175 32.294 Within Groups 1109.722 34 32.639 Total 1238.897 38 67 download by : skknchat@gmail.com F Sig .989 426 LRL FWS DWS FWR DWR PH_WW LRL_WW Between Groups 112.919 28.230 Within Groups 1121.056 34 32.972 Total 1233.974 38 668 167 Within Groups 2.120 34 062 Total 2.789 38 Between Groups 004 001 Within Groups 018 34 001 Total 022 38 Between Groups 118 029 Within Groups 1.710 34 050 Total 1.828 38 Between Groups 001 000 Within Groups 049 34 001 Total 050 38 434.577 108.644 Within Groups 3125.000 34 91.912 Total 3559.577 38 Between Groups 233.786 58.447 Within Groups 784.111 34 23.062 1017.897 38 667 Between Groups Between Groups Total FWS_WW Between Groups 167 68 download by : skknchat@gmail.com 856 500 2.679 048 1.871 138 586 675 120 974 1.182 336 2.534 058 1.736 165 DWS_WW FWR_WW DWR_WW Within Groups 3.265 34 096 Total 3.931 38 Between Groups 002 000 Within Groups 043 34 001 Total 044 38 Between Groups 570 142 Within Groups 2.045 34 060 Total 2.615 38 Between Groups 001 000 Within Groups 046 34 001 Total 047 38 317 864 2.368 072 196 939 Multiple Comparisons Dunnett t (2-sided) Mean (J) 95% Confidence Interval Difference Dependent Variable (I) Dong Dong PH -4.16667 2.69316 371 -11.1077 2.7744 -3.55556 2.69316 512 -10.4966 3.3855 -2.00000 3.80870 962 -11.8162 7.8162 -4.83333 2.69316 247 -11.7744 2.1077 -1.77778 2.70687 919 -8.7542 5.1987 -4.50000 2.70687 309 -11.4764 2.4764 LRL (I-J) Std Error Sig Lower Bound Upper Bound 69 download by : skknchat@gmail.com FWS DWS FWR DWR -2.55556 3.82810 914 -12.4217 7.3106 -3.83333 2.70687 450 -10.8098 3.1431 216444 117718 228 -.08695 51984 156778 117718 504 -.14662 46017 256333 166479 375 -.17273 68540 376889 * 117718 011 07349 68028 006222 010937 949 -.02197 03441 005111 010937 974 -.02308 03330 013889 015467 795 -.02598 05375 027444 010937 058 -.00074 05563 032000 105708 995 -.24044 30444 -.037333 105708 991 -.30978 23511 035000 149494 998 -.35029 42029 117556 105708 654 -.15489 39000 -.002778 017916 1.000 -.04895 04340 004778 017916 997 -.04140 05095 -.011889 025338 974 -.07719 05341 000222 017916 1.000 -.04595 04640 ng ph n t h: M8.I.1.1, M8.I.2.6, * The mean difference is significant at the 0.05 level Nh lưới số hú th h: M8.I.8.4 v i n 1,2,3,4 l n lượt l M8 70 download by : skknchat@gmail.com Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N PH Upper Bound Minimum Maximum 7.23952 2.55956 22.0726 34.1774 18.50 40.00 29.0000 8.04984 3.28634 20.5522 37.4478 20.00 41.00 34.2222 4.19904 1.39968 30.9946 37.4499 27.00 40.00 23.2500 3.99812 1.33271 20.1768 26.3232 18.25 32.00 32 28.6328 6.96681 1.23157 26.1210 31.1446 18.25 41.00 42.0833 9.29740 3.79565 32.3263 51.8404 32.00 59.00 41.1250 11.85252 4.19050 31.2160 51.0340 20.00 60.00 33.9444 6.71027 2.23676 28.7865 39.1024 23.00 44.00 48.2778 8.87451 2.95817 41.4562 55.0993 33.00 62.50 32 41.2969 10.37200 1.83353 37.5574 45.0364 20.00 62.50 9046 20093 07104 7366 1.0726 66 1.21 7140 22602 09227 4768 9512 48 1.00 9738 19340 06447 8251 1.1224 74 1.34 6165 14536 05934 4640 7690 37 80 29 8270 23357 04337 7382 9159 37 1.34 4990 11146 04550 3820 6160 36 65 6222 23493 08306 4258 8187 31 92 1.1305 22172 09052 8978 1.3632 76 1.35 7591 26936 08979 5521 9662 36 1.09 29 7444 30775 05715 6273 8614 31 1.35 1034 03636 01285 0730 1338 05 17 Total DWS Lower Bound 28.1250 Total FWR Std Error Total FWS Std Deviation Total LRL Mean 71 download by : skknchat@gmail.com 1403 02932 01197 1096 1711 08 17 2022 04546 01515 1673 2372 13 25 0699 01941 00647 0550 0848 05 11 32 1287 06191 01094 1064 1510 05 25 2365 05082 02075 1832 2898 17 32 2902 08268 02923 2211 3594 20 46 4547 07538 03077 3756 5338 35 56 4324 06965 02322 3789 4860 33 54 29 3573 11326 02103 3142 4004 17 56 PH_WW 35.8889 7.51157 2.50386 30.1150 41.6628 22.00 47.00 36.8571 5.69879 2.15394 31.5866 42.1276 27.00 44.00 38.0556 8.55294 2.85098 31.4812 44.6299 21.00 49.00 44.5000 8.94427 2.98142 37.6248 51.3752 28.50 57.50 34 38.9412 8.29546 1.42266 36.0468 41.8356 21.00 57.50 LRL_W W 43.0833 5.55353 2.26722 37.2553 48.9114 35.00 49.00 48.5714 14.88688 5.62671 34.8034 62.3395 33.00 78.00 41.0000 10.46721 3.48907 32.9542 49.0458 24.50 54.00 48.4444 11.98031 3.99344 39.2356 57.6533 29.00 69.00 31 45.2742 11.35550 2.03951 41.1090 49.4394 24.50 78.00 FWS_W W 1.2842 22640 09243 1.0466 1.5218 97 1.62 1.4594 35942 13585 1.1270 1.7918 1.20 2.23 1.6333 31925 10642 1.3879 1.8787 1.20 2.13 1.7151 60307 20102 1.2516 2.1787 68 2.50 31 1.5502 42994 07722 1.3925 1.7079 68 2.50 7505 21129 08626 5288 9722 48 1.04 Total DWR Total Total Total Total FWR_W 72 download by : skknchat@gmail.com W 8679 21769 08228 6665 1.0692 52 1.11 1.1543 50900 16967 7631 1.5456 49 1.99 1.0553 39726 13242 7500 1.3607 53 1.99 31 9827 39035 07011 8396 1.1259 48 1.99 DWS_W W 1674 06176 02059 1200 2149 08 25 1799 03536 01179 1527 2071 11 24 2110 04331 01444 1777 2443 16 31 2297 05631 01877 1864 2729 13 32 36 1970 05418 00903 1787 2153 08 32 3226 06430 02430 2631 3820 22 42 3396 05180 01958 2917 3875 26 40 3397 05762 01921 2954 3840 27 45 4098 08896 02965 3414 4782 30 60 32 3556 07382 01305 3290 3822 22 60 Total Total DWR_ WW Total Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic df1 df2 Sig PH 2.696 28 065 LRL 678 28 573 FWS 635 25 599 FWR 1.441 25 255 DWS 2.683 28 066 DWR 552 25 651 PH_WW 536 30 661 LRL_WW 671 27 577 73 download by : skknchat@gmail.com FWS_WW 1.768 27 177 FWR_WW 2.061 27 129 DWS_WW 1.547 32 221 DWR_WW 478 28 700 ANOVA Sum of Squares PH FWS FWR DWS Mean Square Between Groups 544.817 181.606 Within Groups 959.811 28 34.279 1504.628 31 929.069 309.690 Within Groups 2405.861 28 85.924 Total 3334.930 31 Between Groups 585 195 Within Groups 943 25 038 Total 1.527 28 Between Groups 1.377 459 Within Groups 1.275 25 051 Total 2.652 28 Between Groups 086 029 Within Groups 033 28 001 Total 119 31 Total LRL df Between Groups 74 download by : skknchat@gmail.com F Sig 5.298 005 3.604 026 5.166 006 9.002 000 24.174 000 DWR PH_WW LRL_WW FWS_WW FWR_WW DWS_WW DWR_WW Between Groups 231 077 Within Groups 128 25 005 Total 359 28 399.414 133.138 Within Groups 1871.468 30 62.382 Total 2270.882 33 359.775 119.925 Within Groups 3508.645 27 129.950 Total 3868.419 30 789 263 Within Groups 4.756 27 176 Total 5.546 30 728 243 Within Groups 3.843 27 142 Total 4.571 30 Between Groups 022 007 Within Groups 081 32 003 Total 103 35 Between Groups 038 013 Within Groups 131 28 005 Total 169 31 Between Groups Between Groups Between Groups Between Groups 75 download by : skknchat@gmail.com 15.055 000 2.134 117 923 443 1.494 239 1.706 189 2.883 051 2.722 063 Multiple Comparisons Dunnett t (2-sided) 95% Confidence Interval Dependent (J) Mean Difference Variable (I) Lines Lines PH 4.87500 2.84493 233 -2.2148 11.9648 5.75000 3.08576 179 -1.9400 13.4400 10.97222 * 2.75999 001 4.0941 17.8503 -6.19444 4.88545 463 -18.3694 5.9805 -7.15278 4.50417 288 -18.3775 4.0720 -14.33333 * 4.36968 008 -25.2229 -3.4437 28813 * 10488 028 0274 5489 09750 11213 705 -.1813 3763 35728 * 10236 005 1028 6117 -.26011 11901 099 -.5595 0393 -.13686 10972 484 -.4129 1391 37139 * 11901 013 0720 6708 03349 01671 137 -.0081 0751 07044 * 01812 002 0253 1156 13233 * 01621 000 0919 1727 -.19594 * 03771 000 -.2908 -.1011 -.14219 * 03477 001 -.2297 -.0547 02222 03771 893 -.0726 1171 LRL FWS FWR DWS DWR (I-J) Std Error Sig Lower Bound * The mean difference is significant at the 0.05 level 76 download by : skknchat@gmail.com Upper Bound ... vi M Đ U Ch ng –T NG QUAN 1.1 Nguồn gốc ngô 1.2 T nh h nh nghiên cứu ngô th giới 1.3 T nh h nh nghiên cứu ngô Vi? ??t Nam: ... ti n h nh mang gen isopentenyl transferase (ipt) huẩn Agrobacterium tumefaciens” với m  Bi n n p th nh  Kiểm tra  ướ y tr ng K t u ng [58], l c[78] u t o giống ng t i ? ?Nghiên cứu tạo c c dịng... quố 1.4 C sở ho học v nghiên cứu nạp gen vào thực vật ph ng ph p Agrobacterium tumefaciens Hiện n y nhi u kỹ thu t chuyển gen kh nh u v o t o song kỹ thu t chuyển gen vi khuẩn A tumefaciens ược