BÁO cáo CUỐI kỳ môn THỰC HÀNH hóa SINH phương pháp đo quang phương pháp đo quang

ĐẠI HỌC NGUYỄN TẤT THÀNH KHOA Y PHÂN MƠN HĨA SINH Lớp:20DYK2B Nhóm TH: Nhóm nhỏ: BÁO CÁO CUỐI KỲ MƠN THỰC HÀNH HĨA SINH Họ tên học viên: Lai Wen Chen MSSV: 2000005149 Số ĐT:0896680507 Email: nthivinhtrinh@gmail.com TP HCM 12/2021 Nội dung I II I II I II Chương : Phương pháp đo quang 10 Phương pháp đo quang 10 Định luật hấp thụ ánh sáng: 10 Phương pháp đo quang: 12 Nguyên tắc xét nghiệm hoá sinh lâm sàng thường dùng qua phương pháp đo quang 15 Nội quy phòng thí nghiệm 18 Với sinh viên: 18 Với người hướng dẫn: .19 Sử dụng pipet 20 Giới thiệu tổng quát: .20 Cách dùng pipet: .21 Chương II: Định lượng Lipid 28 I Định lượng Triglyceride 29 Tổng quát: .29 Nguyên tắc định lượng: 29 Thuốc thử: 30 Tiến hành: 31 Khoảng tuyến tính: 32 Tính tốn: 32 Gía trị kỳ vọng: 32 Biện luận: 32 II Định lượng Cholesterol: .35 Tổng quát: .35 Nguyên tắc: .37 Thuốc thử: 38 Tiến hành: 38 Khoảng tuyến tính: 40 Tính toán: 40 Gía trị tham khảo: .41 Biện luận: 41 III Định lượng LDL-C: 42 Tổng quát 42 Nguyên tắc: .42 Thuốc thử: 43 Tiến hành: 43 Tính toán: 44 Gía trị tham khảo: .45 Biện luận: 45 V Định lượng HDL-C: .45 Nguyên tắc: 45 Thuốc thử: 46 Tính tốn: 47 Gía trị tham khảo: 47 Biện luận: 48 Chương III: Định lượngprotid 49 I Định lượng ure: .49 Tổng quát: 49 Nguyên tắc: 49 Thuốc thử: 49 Chuẩn bị: 50 Gía trị tham khảo khoảng tuyến tính: 51 Qúa trình thực hiện: 52 Tính tốn: 53 Biện luận: 53 II Định lượng Creatinin: 56 Tống quát: 56 Nguyên tắc định lượng: 57 Nồng độ dung dịch sử dụng: 57 Gíá trị kỳ vọng: 58 9 Thành phần mẫu thử .58 Độ tuyến tính: 59 Chuyển đổi đơn vị: 59 Quy trình thử nghiệm: .59 Tính tốn: 60 Biện luận: 60 III Định lượng GOT, GPT: 62 Tổng quan: 62 Nguyên tắc định lượng: 63 Thuóc thử: 64 Gía trị kỳ vọng: .66 Thành phần mẫu thử .66 Độ tuyến tính: 66 Chuyển đổi đơn vị: 67 Quy trình thử nghiệm: .67 Tính tốn: 68 Biện luận: 68 Chương 4: Hemoglobin Acid nucleic 69 I Định lượng billirubin toàn phần: 69 Tổng quát: .69 Nguyên tắc: .69 Nồng độ định: 70 10 11 10 11 Lưu trữ bảo quản 71 Mục đích sử dụng 71 Lưu ý 72 Giá trị kỳ vọng: .72 Thành phần mẫu thử: 72 Độ tuyến tính: 72 Chuyển đổi đơn vị: 72 Quy trình thử nghiệm: .73 Biện luận: 74 II Định lượng Billirubin trực tiếp: .76 Tổng quát: .76 Nguyên tắc: .76 Nồng độ định: 77 Lưu trữ bảo quản 77 Mục đích sử dụng 77 Lưu ý 77 Giá trị kỳ vọng: .77 Thành phần mẫu thử: 78 Độ tuyến tính: 78 Chuyển đổi đơn vị: 78 Quy trình thử nghiệm: .78 Biện luận: 79 10 11 III Định lượng acid uric: 80 Tổng quát: 80 Nguyên tắc: 81 Nồng độ định: 81 Lưu trữ bảo quản 82 Mục đích sử dụng 82 Lưu ý 82 Giá trị kỳ vọng: 82 Thành phần mẫu thử: 83 Độ tuyến tính: 83 Chuyển đổi đơn vị: 83 Quy trình thử nghiệm: .83 Biện luận: 84 Chương 5: Glucid 86 I Định lượng Glucose: .86 Tổng quát: 86 Nguyên tắc định lượng: 88 Nồng độ dung dịch sử dụng: 89 Mục đích sử dụng 89 Lưu ý 89 Gía trị kỳ vọng: 89 Thành phần mẫu thử .90 10 11 10 11 I II III IV Độ tuyến tính: 90 Chuyển đổi đơn vị: 90 Quy trình thử nghiệm: .91 Biện luận: 92 II Định lượng Amylase: .93 Tổng quát: .93 Nguyên tắc định lượng: 94 Nồng độ dung dịch sử dụng: 94 Mục đích sử dụng 95 Lưu ý 95 Gía trị kỳ vọng: .95 Thành phần mẫu thử .96 Độ tuyến tính: 96 Chuyển đổi đơn vị: 96 Quy trình thử nghiệm: 96 Biện luận: 97 Chương 6: Phân tích nước tiểu 10 thơng số 100 ♦ vấn đề phân tích nước tiểu: 100 Mục đích sử dụng: 100 Tổng quan: 100 Thận trọng: 100 Bảo quản độ ổn định: 101 V Lấy bảo quản mẫu: 101 VI Hướng dẫn sử dụng: 101 VII Diễn giải kết quả: .102 X Hạn chế: 103 * Cảm quan: 103 IX Chi tiết thông số: 104 Thuốc thử đặc tính hiệu quả: 104 Acid ascorbic: .106 Glucose: 109 Bilirubin: .111 Urobilinogen: 113 Specific Gravity: 115 Máu: 117 pH: 119 Protein: 122 Nitrite: 124 10 Leukocytes: 128 11 Cetone: 131 Tài liệu tham khảo 133 Chương : Phương pháp đo quang Phương pháp đo quang I Định luật hấp thụ ánh sáng: Định luật Beer-Lambert: -> Nhìn vào hình bên ta hiểu chiếu chùm tia sáng đơn sắc có bước sóng (À) cường độ (Io) vào dung dịch đồng chất có nồng độ (C) với chiều dày dung dịch (l) -> Kết chùm sáng qua dung dịch phần chùm sáng bị hấp thụ (Ih), phần bị phản xạ (Ip) phần lại qua dung dịch I Io = I + I p + I h Suy ra: Nhưng thực tế lượng phản xạ khơng đáng kể nên: |lo = I + Ih| Ta có định luật Beer sau: |I/IO = 10 hay log Io/I = kLC| -kLC Tổn thương thận, niệu quản, bàng quang, niệu đạo, u sỏi, làm máu xuất nước tiểu Nhiễm khuẩn tiết niệu có kèm theo triệu chứng tiểu buốt, tiểu dắt Yếu tố gây ảnh hưởng: Âm tính giả: Captopril(Capoten), tỷ trọng cao, pH90% ,xét nghiệm cho kết dương tính mẫu thử có từ 2-3 hồng cầu quang trường Điều phản ánh xét nghiệm có kết âm tính giả thấpũtỉ lệ dương tính giả cao Dùng giấy thử để tầm soát trường hợp tiểu máu,bệnh tiểu đường,bệnh ác tính pH: a Tổng quan: Độ axit nước tiểu cao hay thấp nồng độ axit tự có nước tiểu Thận có chức điều hòa cân nước chất điện giải, có pH nước tiểu Vì thế, thơng qua giá trị pH ta kiểm tra số rối loạn hay bệnh thận Các bệnh dày phát thơng qua độ pH nước tiểu Chỉ số PH đánh giá tính acid kiềm nước tiểuthơng qua nồng độ ion H+ tự nước tiểu, pH = 7,0 giá trị trung tính nước tiểu Ngồi ra, PH giúp đánh giá khả trì nồng độ ion H+ huyết tương dịch ngoại bào ống thận Thận cân acid-base chủ yếu thông qua trình tái hấp thu muối tiết ion H+, ion amoni ống thận cóthể duytrì Q trình thận tiết nước tiểu tính acid tính kiềm chế quan trọng để trì cân pH thể b Nguyên lý kỳ vọng: Xét nghiệm dựa hệ thống số kép, kết khoảng màu rộng bao gồm tồn pH có nước tiểu Khoảng màu từ màu cam đến xanh xanh dương đậm Khoảng giá trị mong đợi mẫu nước tiểu bình thường trẻ sơ sinh 5-7 đối tượng khác 4.6-8 kết trung bình thường c Hạn chế: Nếu khơng tuân thủ quy trình xét nghiệm nước tiểu dư thừa đọng que thử xảy tượng runover, acid đệm từ thuốc thử PRO chạy sang vùng pH gây kết pH thấp giả Đọc kết pH không bị nhr hưởng khác nòng độ đệm niệu d Biện luận: Xét nghiệm dựa nguyên tắc chất thị màu kép đỏ methyl xà xanh bromothymol.Khoảng màu từ màu cam đến xanh xanh dương đậm Khoảng giá trị mong đợi mẫu nước tiểu bình thường: Ở trẻ sơ sinh 5-7 Các đối tượng khác 4.6-8 kết trung bình thường Độ pH>8, nước tiểu có tính kiềm xảy bệnh trường hợp : Sỏi thận Rối loạn chức thận như: toan ống thận, suy thận mạn Nhiễm khuẩn đường tiểu vi khuẩn Proteus Pseudemonas gây phản ứng hủy urea Kiềm chuyển hóa nơn ói Kiềm hơ hấp tăng thơng khí, thở nhanh Rữa dày Tắc môn vị Ăn nhiều rau đặc biệt họ đậu, cam, quýt làm kiềm hóa nước tiểu Độ pH thấp Ý nghĩa: giúp sàng lọc bệnh lý liên quan đến thận hệ tiết niệu b Nguyên lý: Phản ứng dựa tượng biết với tên gọi protein error số pH, mẫu mà số có độ đệm cao thay đổi màu có diện protein (anion) mẫu giải phóng ion H thành protein Tại giá trị pH không đổi, đổi màu xanh + so với màu vàng gốc liên quan đến có mặt protein có mặt bệnh phẩm Khoảng mà từ vàng đến vàng-xanh âm tính từ xanh đến xanh dương duonngư tính Thận bình thường tiết 1-14 mg/dL protein Màu mẫu khớp với ô đậm có vêt (±) cho thấy lượng protein niệu đáng kể Cần kiểm tra lâm sàng để đánh giá ý nghĩa mẫu bệnh phẩm c Hạn chế: Bất kỳ màu xanh cho thấy có mặt PRO nước tiểu Xét nghiệm có độ nhạy cao với albumin thấp Hb, globulin mucoprotein Kết âm tính khơng loại trùe có mặt PRO khác Có thể nhận kết quẩ dương tính giả với nước tiểu có độ kiềm Mẫu nước tiểu nhiễm hợp chât amoni bậc chất tẩy rửa chứa chlorhexidine cho kết dương tính giả Mẫu nước tiểu cí tỉ trọng cao cho dương tính giả d Biện luận: Bình thường thận tiết lượng protein khoảng 150mg/24 mức dó, có 95% lọc qua cầu thận tái hấp thu trở lại qua ống thận Bình thường khơng phát protein nước tiểu Các yếu tố ảnh hưởng: Dương tính giả mẫu nước tiểu có pH 9, dùng phenazopyridine (pyridium azogantrisin), số chất sát trùng, tỉ trọng nước tiểu cao, mẫu thử sau xoa bóp tuyến tiền liệt, máu nhân tạo (truyền polyvinyl pyrrolidon), penicillin liều cao, tolbunamid, acid paraaminosalicylic Âm tính giả protein niệu có chất khơng albumin Bệnh lý: • Protein niệu tăng thật sự: thận tăng tiết protein ống thận, tăng độ lọc cầu thận (bệnh cầu thận), hội chứng thận hư, viêm bể thận, viêm cầu thận, tăng huyết áp ác tính, hệ thống tim mạch tăng huyết áp lành tính (benign hypertension), suy tim tắc nghẽn (congestive cardiac failure: CCF), viêm nội tâm mạc vi khuẩn bán cấp (subacute bacterial endocarditis: SBE) • Protein niệu tăng chức (albumin niệu): sốt, cảm lạnh, căng thẳng, mang thai, sản giật, suy tim xung huyết (congestive heart failure: CHF), sốc, tập thể dục nặng Nitrite: a Tổng quan: Nitrat sản phẩm phụ nitơ thải qua đường nước tiểu, nitrat nước tiểu chuyển thành nitrit có trực khuẩn Gram âm E.coli Klebsiella Sự xuất Nitrit dấu hiệu nhiễm khuẩn đường tiết niệu -> Ý nghĩa: Là dấu hiệu phát tình trạng nhiễm trùng đường tiểu Vi khuẩn gây nhiễm trùng đường tiết niệu tạo loại enzyme có khả chuyển nitrate niệu thành nitrite -> xét nghiệm hỗ trợ chẩn đoán nhiễm trùng đường tiết niệu Có ba yếu tố để xét nghiệm dương tính bao gồm: (1) : Sự diện đủ số lượng vi khuẩn khử nitrat (2) : Sự diện nitrit nước tiểu (3) : Vi khuẩn tiếp xúc với nước tiểu khoảng thời gian thỏa đáng (thường > giờ) b Nguyên lý: Xét nghiệm phụ thuộc vào chuyển hoá nitrate thành nitrite hoạt động vi khuẩn gram âm nước tiểu Trong môi trường acid, nitrit nước tiểu phản ứng với acid p-arsanilic tạo thành hợp chất diazonium Hợp chất diazonium tạo cặp với 1N-(l-naphthyl) enthylenediamine đẻ tạo màu hồng Nitrit khơng có nước tiểu bình thường Nitrite tìm thấy có tình trạng nhiễm trùng tuỳ thuộc vào thời gian mẫu nước tiểu lưu bàng quang trước lấy mẫu Khả dương tính với thử nghiệm 40% thời gian trữ bàng quang 80% thời gian dài diễn c Hạn chế: Xét nghiệm đặc hiệu với nitrite không phản ứng với chất thông thường khác tiết nước tiểu Bất kỳ màu đồng từ hồng đến đỏ đực biện luận dương tính, cho thấy có mặt NIT Cường độ màu khơng tỉ lệ vơi số lượng vi khuẩn có mẫu nước tiểu Các chấm vạch màu khơng biện luận dương tính So sánh vùng thuốc thử phản ứng màu trắng hỗ trợ phát nồng độ nitrate thấp ASC 30 mg/dl gây âm tính giả nước tiểu chứa 0.05 mg/dl nitrite io Độ nhạy xét nghiệm giảm với mẫu nước tiểu có chứa đệm kiềm nồng độ cao tỉ trọng cao Kết âm tính khơng có nghĩa khơng có nhiễm khuẩn niệu Kết âm tính xảy trường hợp lây nhiễm niệu từ vi sinh vật khơng chứa men chuyển hố nitrate thành nitrite, nước tiểu khơng lưu thận đủ thời gian (ít giờ) để giảm nitrate thành nitrite; điều trị kháng sinh chế độ ăn khơng có nitrite d Biện luận: Chỉ số bình thường: Âm tính Chỉ số bất thường: Phát NaNƠ2 từ nồng độ 0.05-0.1 mg/dl nước tiểu với tỉ trọng thấp 30 mg/dL ASC (Acid ascorbic) Yếu tố gây ảnh hưởng: Dương tính giả: Nguyên nhân gây dương tính giả dơ bẩn mãu thử, điều gặp từ khâu sai sót mẫu, lọ chứa bẩn, mẫu để lâu Âm tính giả: Những nguyên nhân thường gặp dẫn đến kết âm tính giả bao gồm diện loại vi khuẩn không khử nitrat, diện vi khuẩn khử nitrat thành amoniac, thời gian lưu giữ nước tiểu bàng quang giờ, không dùng mẫu nước tiểu vào sáng sớm ngủ dậy, nước tiểu loãng (nồng độ vi khuẩn thấp), nước tiểu toan (pH Ý nghĩa: Là dấu hiệu giúp phát tình trạng nhiễm trùng đường niệu Kết xét nghiệm sinh hóa nước tiểu dương tính nghĩa nhiễm trùng đường tiểu, cần vệ sinh uống nhiều nước b Nguyên lý: Xét nghiệm cho biết có mặt granulocyte esterase Các esterases lách-một dẫn xuất ester axit amin pyrazone sinh để giải phóng dẫn xuất hydroxy pyrazone Sau pyrazone phản ứng với muối diazonium tạo thành màu be-hồng đến tím Mẫu nước tiểu thơng thường âm tính Kết vết (trace) có ý nghĩa nghi ngờ lâm sàng Khi kết vết xét nghiệm mẫu khác bệnh nhân Nếu kết lặp lại dương tính c Hạn chế: Kết phải đọc 60 đến 120 giây để phản ứng màu xảy hoàn toàn Cường độ màu tỉ lệ thuận với số lượng LEU có mẫu nước tiểu Tỉ trọng cao nồng độ GLU tăng cao (> 2000 mg/dl) gây kết âm tính giả Sự có mặt cephalexin, cephalothin nồng độ cao acid oxalic cho âm tính giả Tetracycline làm giảm phản ứng nồng độ cao thuốc cho âm tính giả PRO niệu cao làm giảm cường độ phản ứng màu Xét nghiệm không phản ứng với hồng cầu vi khuẩn phổ biến nước tiểu d Biện luận: Mức trị số bình thường Ở trạng thái thể bình thường, số có kết âm tính Ở mức có phát tế bào bạch cầu nước tiểu ngưỡng cho phép, số cho phép từ 10 - 25 Leu/UL Chỉ số Leukocytes nước tiểu tăng gây bệnh lý Nhiễm trùng bàng quang bị kích ứng sỏi thận Tắc nghẽn đường tiết niệu Mang thai Viêm niệu đạo Viêm bàng quang Viêm ống thận mô kẽ Sỏi bàng quang Sỏi niệu quản Chỉ số Leukocytes nước tiểu không đổi gây bệnh lý Có số trường hợp nhiễm khuẩn mà Leukocytes niệu âm tính : + Viêm niệu đạo Chlamydia trachomatis + Lao + Viêm thận kẽ thuốc 11 Cetone: a Tổng quan: Ketone lớp hợp chất hữu tạo thể đốt cháy chất béo để lấy lượng Cơ thể sử dụng chất dinh dưỡng để tạo lượng bao gồm carbohydrate, chất béo protein Carbohydrate thể ưu tiên sử dụng, khơng có sẵn, thể chuyển sang đốt cháy chất béo -> ketone sinh -> Ý nghĩa: Ketone chất tiết qua đường tiểu Chỉ số ketone tức KET xét nghiệm nước tiểu mang ý nghĩa quan trọng giúp xác định tình trạng Ketone niệu hay khơng b Ngun lý: Xét nghiệm dựa phản ứng ketone với nitropureside axit acetoacetic tạo thành màu từ hồng nhạt (dương) đến hồng đậm, tím (âm) Bình thường ketone không diện nước tiểu Phát ketone stress sinh lý đói, mang thai vận động sức thường xuyên c Biện luận Bình thường mức độ ketone nước tiểu âm tính Khi test thử màu ketone nước tiểu dương tính gọi ketone niệu Nồng độ ketone ngồi tăng nhiễm toan đái tháo đường cịn tăng nôn mửa, tiêu chảy nước Trong nước tiểu: Chỉ số cho phép: 2.5-5 mg/dL 0.25-0.5 mmol/L Ketone niệu có tăng lượng mỡ chuyển hóa giảm nhập cacbonhydrat chế độ ăn nhiều mỡ Tình trạng xảy trường hợp sau: Tiểu đường Bệnh lý dự trữ glycogen 13 Tiểu đường thận Nguyên nhân xảy tượng ketone niệu: Thường xuyên nhịn đói, chế độ ăn giàu chất béo Cơ thể bị nơn ói kéo dài, chán ăn, chế độ ăn nghèo carbonhydrat Do sản giật, cường giáp, sốt, mang thai thời kỳ tiết sữa Với người không bị bệnh tiểu đường, ketone niệu thường xuất q trình bệnh cấp tính, bị căng thẳng thần kinh mức hay thể hoạt động sức Hiện tượng xuất bệnh nhân sử dụng liều insulin, thuốc isoniazid rượu Khi đọc thông số nước tiểu cần lưu ý kết hợp đọc thơng số để chẩn đốn xác Ví dụ: với dương tính glucose bệnh nhân ta biện luận bệnh nhân gặp vấn đề ống thận Đái tháo đường Nhưng với dương tính ceton glucose ta biết bệnh nhân mắc Đái tháo đường mức độ nặng mức độ nặng thể sử dụng glucose nên lấy lượng từ lipid từ gây tăng cao ceton Vì việc kết hợp đọc thơng số giúp ta đưa chẩn đốn xác dễ dàng đưa chẩn đoán 13 Tài liệu tham khảo Niên, P L (2020) Hoá Sinh Y học In TS.BS Bùi Thị Hồng Châu, TS Đường Thị Hồng Diệp, Ths.BS Trần Ngọc Minh, PGS.TS.BS Lâm Vĩnh Niên, & PGS.TS.BS Nguyễn Thị Băng Sương Thành Phố Hồ Chí Minh: Nhà xuất Y học PGS.TS.BS Lê Xuân Trường (2017) Thực tập hoá sinh y học In PGS.TS Lê Xuân Trường, PGS.TS Nguyễn Thị Băng Sương, TS.BS Lâm Vĩnh Niên, TS Đường Thị Hồng Diệp, & TS.BS Bùi Thị Hồng Châu Thành Phố Hồ Chí Minh: Nhà xuất Y học LUẬT, PGS TS Nguyễn Nghiêm Ý nghĩa lâm sàng 14 thơng số phân tích nước tiểu ... xét nghiệm hoá sinh lâm sàng thường dùng qua phương pháp đo quang Sơ đồ tổng quát: Phương pháp Nguyên lý Đo lượngPhương sản pháp phẩm điểm hoá học đầu Phương pháp đến chất đo điểm cuối cần xác... II I II Chương : Phương pháp đo quang 10 Phương pháp đo quang 10 Định luật hấp thụ ánh sáng: 10 Phương pháp đo quang: ... C = Co x D~D~| II Phương pháp đo quang: Sử dụng máy đo quang Đặc điểm chủ yếu máy kà dòng sáng qua dung dịch chiếu lên tế bào quang điện để chuyển thành dong điện mà cường độ đo nhờ điện kế nhạy