1. Nguyên tắc:
-ỳ Phương pháp enzyme so màu qua ly tâm
Dung dịch gây kết tủa HDL-C: MgCb 2. Thuốc thử:
Dung dịch đệm đơn:
Phosphotungstic Acid 0.55 mmol/1
MgCb 25 mmol/1
Các yếu tố khác:
• Bước sóng: 546 nm
• Nhiệt độ giữ phần kết tủa ở 25 đến 37 độ c
Có 2 bước: Bước 1: Kết tủa:
-> Trộn đều, ủ trong 10 phút ở nhiệt độ phòng, trọn lại và đem ly tâm trong 5 phút ở 10000g (10 phút ở 4000 g). Sau khi ly tâm tách phần nổi lên từ phần kết tủa trong 1 giờ và xác định nồng độ Cholesterol.Bước 2: Định lượng LDL-C:
Bước 2: Xác định nồng độ:
Đo đối chiếu với ống trắng. Yêu cầu một ống trắng cho mỗi thử nghiệm Cholesterol: 1000 pl (Macro) và 500 pl (semi micro)
Supernatant: 100 pl (macro) và 50 pl (semi micro)
-> Trộn đều và ủ trong 10 phút ở 25 độ C hoặc 5 phút ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(RBL)
ỖA(S) = A(sample) - A(RBL) 3. Tính tốn:
Với factor:
Độ dài bước sóng c (mg/dl) c (mmol/l)
546 nm (Macro) 279 x ỖA(S) 7.21 x ỖA(S)
546 nm (Semi Micro) 325,1 x ỖA(S) 8.41 x ỖA(S)
Sau khi có được kết quả của nồng độ LDL-C sử dụng cơng thức Friedewald để tìm nồng độ của HDL-C: LDL-C = Tổng lượng Cholesterol - (HDL-C - ^5- à (mg/dl)
-^ Không áp dụng công thức khi TG > 4.5 mmol/l (> 400 mg/dl)
4. Gía trị tham khảo:
Tiên lượng thuận lợi Mức nguy cơ Nguy cơ cao
Nữ > 65 mg/dl 45-65 mg/dl < 45 mg/dl
Nam > 55 mg/dl 35-55 mg/dl < 55 mg/dl
5. Biện luận:
Đối với HDL-C thì giá trị bình thường là trên 35 mg/dL và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh mạch vành Bởi vì HDL-C là loại protein tốt giúp chở cholesterol từ ngoại vi về trung tâm
Ví dụ: Bệnh nhân có: • Cholesterol 200mg/dl • TG 150mg/dl • LDL-C 180 mg/dl • HDL-C 30 mg/dl
Dù cho nồng độ Cholesterol và TG là bình thường Nhưng LDL-C > 100mg/dl
Chương III: Định lượng protid (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
I. Định lượng ure:Tổng qt: Tổng qt:
• Sản phẩm thối hố chủ yếu của protein và acid amin
• Tạo thành ở gan
• Định lượng nhằm chẩn đoán chức năng thận nhưng khơng đặc hiệu do cịn bị ảnh hưởng bởi các yếu tố ngồi thận -> thường chỉ
định kèm với định lượng creatinin
• Trị số bình thường là 0.2 - 0.5 g/l trong huyết thanh và BUN = 0.09 - 0.23 g/l
1. Nguyên tắc:
Ure + 2H2O Urease 2NH3 + CO2
^
a-Ketoglutarate + NH3 + NADH2 GLDH L-Glutamate + NAD++ H2O GLDH: Glutamate dehydrogenase
2. Thuốc thử:
Dung dịch đệm:
0.18 mmol/l
50mg/dL (8.35 mmol/l) 3. Chuẩn bị:
Chất nền bắt đầu: Mầu thử và thuốc thử Mẫu đo bắt đầu:
- Trộn 4 lần thể tích R1 và 1 lần thể tích R2
- Để yên thuốc thử trong ít nhất 30 phút ở 15 đến 25 độ C trước khi dùng - Bảo quản 4 tuần ở 2 đến 8 độ C, 5 ngày ở 15 đến 25 độ C
- Không tiếp xúc với ánh sáng -> Mầu:
Huyết thanh, huyết tương khơng có heparin, nước tiểu sạch. Pha loãng nước tiểu với tỉ lệ 1/100 với nước cất và nhân với 101
a-Ketoglutarate 15 mmol/l Urease > 1000 U/l GLDH > 5.4 kU/l Khởi động: NADH Dung dịch chuẩn:
Bảo quản:
• Huyết tương, huyết thanh:
- 7 ngày ở 20 đến 25 độ C hoặc 4 đến 8 độ C - 1 năm ở âm 20 độ C • Nước tiểu: - 2 ngày ở 20 đến 25 độ C - 7 ngày ở 4 đến 8 độ C - 1 tháng ở -20 độ C
4. Gía trị tham khảo và khoảng tuyến tính:
Với huyết thanh Urea-N
Tuổi Mg/dl Mmol/l Mg/dl Mmol/l
Trẻ em 1-3 11-36 1.8-6.0 5.14-16.8 1.8-6
4-13 15-36 2.5-6 7-16.8 2.5-6
14-19 18-45 2.9-7.5 8.4-21 2.9-7.5
Người (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Ure niệu
g/24h Mmol/dL
10-35 170-580
Đối với khoảng tuyến tính thì nồng độ đo được cao nhất là 400mg/dl (66.7 mmol/l) ở nồng độ cao hơn cần pha loãng với nước muối sinh lý (0.9%) với tỉ lệ ^ và nhân kết quả với 3
5. Qúa trình thực hiện:- Bước sóng: 340 nm - Bước sóng: 340 nm - Nhiệt độ: 37 độC
-> Trộn R1 (5 lần thể tích) với R2 (1 lần thể tích)
Bảo quản ổn định ở nhiệt độ từ 2 đến 8 độ C trong 20 ngày và từ 18 đến 22 độ C trong 8 ngày
Óng đo Óng chuẩn
Thuốc thử 1000 ựl 1000 ựl
Mầu chuẩn 10 ựl
-> Trộn và ủ 60 giây ở 25 độ C hoặc 30 độ C hoặc 20 đến 40 giây ở 37 độ C sau đó đọc độ hấp thu ánh sáng A1. Đọc lần nữa sau 60 giây A A = A1-A2 6. Tính tốn: Hệ số chuyển đổi: • Mg/dl -> mmol/l Hệ số: 0.167 • Mmol/l -> mg/dl Hệ số: 6.006
• Urea ^ Urea-N (BUN) Hệ số: 0.467
• Mg/dl BUN ^ mmol/l Hệ số: 0.357
Tính tốn:
Nồng độ ure = (BAđo/B.Achuấn) x 50 (mg/dl) Nồng độ BUN = 0.466 x nồng độ ure (Blood urea nitrogen)
7. Biện luận:
Trường hợp khơng can thiệp:
• Hb < 800mg/dl
• Triglyceride < 1750 mg/dl Các trường hợp thay đổi:
• Sinh lý:
o Thay đổi theo tuổi:
Urê huyết bình thường thường gặp ở người lớn là 0,2 - 0,3 g/1 (3,3 - 5 mmol/l) Ở người trên 50 tuổi là 0,4 - 0,5 g/1 (6,7 - 8,3 mmol/l)
Ở trẻ em là 0,1 - 0,25 g/1 (1,67 - 4,2 mmol/l)
o Tăng: người có chế độ ăn giàu protid, người dùng thuốc corticosteroid, tetracycline o Giảm khi có thai, khi dùng thuốc chống động kinh, uống rượu, hút thuốc lá
• Bệnh lý: Tăng ure huyết Nguồn gốc Bệnh lý Vấn đề Nguyên nhân tại thận Viêm thận cấp
0,5 - 1 g/l (8,33 - 16,67 mmol/l), nhưng có khi tới 1 - 2 g/l (16,67 - 33,34 mmol/l) hoặc hơn
Viêm thận bán cấp tăng ure huyết từ từ hoặc theo đợt
mmol/l)
Urê niệu giảm, có khi cịn 1-5 g/l (16,67 - 83,35 mmol/l) Hội chứng ure huyết
urê huyết tăng cao kèm urê niệu giảm, là hội chứng gặp trong suy thận cấp và mạn (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Viêm ống thận cấp
vô niệu
tăng ure huyết tới tới 2 - 5 g/l (33,34 - 83,55mmol/l) hoặc hơn nữa do ngộ độc Hg, P, As, Br, mật cá trắm,... -> sau bốn ngày nếu ure huyết là 2.5 g/l -> sau bốn ngày ngộ độc, nếu urê huyết - 2,5g/l (41,68mmol/l) là tiên lượng tốt, nếu urê huyết 24 g1 (> 66,68 mmol/l) là tiên lượng rất xấu
Nguyên nhân ngoài thận Trước thận Suy tim ứ huyết
lưu lượng máu đến thận giảm. Bệnh nhân tiểu ít, urê huyết tăng ít
Xuất huyết tiêu hố
chấn thương chảy máu, làm giảm áp suất máu và hoặc giảm thể tích huyết tương. Lưu lượng máu đến thận giảm, do đó,
urê huyết tăng Mất muối nước
Chống Sau
Giảm ure huyết
Gan bị tổn thương nặng (suy gan)
Giảm urê huyết < 2 mmol/l (0,12 g/l) ở người lớn và giảm urê niệu gặp ở giai đoạn cuối của suy gan, chứng tỏ chức năng tạo urê giảm và
không hồi phục được Chế độ ăn nghèo protid
Truyền nước nhiều q (làm lỗng máu)
Ure niệu
Trị số bình thường là 200 - 500 mmol, tương đương 12 - 30 g/sau 4 giờ
Thuốc lợi niệu có tác dụng tăng tiểu và tăng urê thải, nồng độ urê là 50 g/l (866 mmol)
II. Định lượng Creatinin:Tống qt: Tống qt:
• Trị số bình thường: 0.6-1.5 mg/dl
• Là sản phẩm thối hố của creatin cơ
• Có 2 nguồn gốc:
o Nguồn gốc ngoại sinh do thức ăn cung cấp.
• Tạo thành qua các bước:
o Tại thận: arginin tác dụng với glycin tạo guanidoacetat và ornithin
o Tại gan: Guanidoacetat tác dụng với methionin ở dạng hoạt hóa S-adenosyl methionin (SAM) tạo nên creatin o Creatin được chuyển qua máu tới cơ, tác dụng với ATP -> Creatin-P: dự trữ năng lượng
o Creatin-P được khử H2O và giải phóng Phosphate tạo thành creatinin -> đào thải qua thận và ra nước tiểu
• Để đánh giá mức lọc thận đặc hiệu hơn nồng độ ure
1. Nguyên tắc định lượng:
Trong dung dịch kiềm, creatinine hình thành phức hợp có màu với picrate (phương pháp Jaffe không khử protein) Creatinine + acid picric -> phức hợp Creatinine-acid picric (vàng cam)
2. Nồng độ của các dung dịch được sử dụng:Dung dịch đệm A Dung dịch đệm A (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
NaOH 187.8 mmol/l
Phosphate 7.5 mmol/l
Dung dịch đệm B
g/24h Mmol/d
Nữ 0.74 - 1.57 6.6 - 15.9
Nam 1.04 - 2.35 9.2 - 20.7
Đối với độ thanh thải Creatinine (thể tích huyết tương được lọc sạch hoàn toàn Creatinine trong 1 đơn vị thời gian)
Ml/min
Người lớn 71 - 151
4. Thành phần mẫu thửHuyết thanh, huyết tương Huyết thanh, huyết tương
Dung dịch chuẩn 2 mg/dl (176.8 ựmol /lL
3. Gíá trị kỳ vọng:
Sử dụng huyết thanh huyết tương
Nước tiểu (trong 24 giờ)
Mg/dl pmol/l Sơ sinh < 1.2 < 106 Trẻ em 2 đến 12 tháng < 0.9 < 80 Lớn hơn 1 tuổi < 1.0 < 88 Người lớn Nữ 0.6 - 1.2 53 -106 Nam 0.6 - 1.4 53 -120
Nước tiểu được pha loãng bằng saline với tỉ lệ 1/49 5. Độ tuyến tính:
20 mg/dl hoặc 1768 pmol /1
Trong trường hợp vượt quá 20 mg/dl creatinine trong huyết tương hoặc nước tiểu đã pha loãng theo tỉ lệ 1/49 và tiếp tục pha loãng với tỉ lệ 1/5 với dung dịch NaCl 0.9% và đem kết quả nhân với 6
Phạm vi định lượng là 0.19 đến 20 mg/dl 6. Chuyển đổi đơn vị:
Mg/dl -> mmol/l. Hệ số 88.4 Mmol/l -> mg/dl. Hệ số: 0.0113 7. Quy trình thử nghiệm: - Bước sóng: 492 hoặc 500nm - Nhiệt độ 25 độ C hoặc 37 độ C
- Pha thuốc thử 1 và 2 theo tỉ lệ 1/1 và đề yên trong 30 phút trước khi dùng - Có thể bảo quản 2 đến 8 độ C trong 28 ngày hoặc 18 đến 22 độ C trong 8 giờ
Ống chuẩn Huyết thanh Nước tiểu
Thuốc thử 1000 pl 1000 pl 1000 pl
Dung dịch chuẩn 150 pl
Dung dịch đo 150 pl 150 pl
-> Trộn đều và ủ trong 1 phút ở 25 độ C hoặc 30 giây ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S1) và ống đo A(STD1); đo lại sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S2) và ống đo A(STD2) sau đó 3 phút ở 25 độ C và 1 phút với 37 độ C
8. Tính tốn:
A( S 2)-A( S1)
Trongmáu = 2 x AÍSTD2)-A(STD1) (mg/dl)
, A(s 2)-A( S1) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Trong nước tiểu = 100 x AÍSTD 2)- A (STD1) 9. Biện luận:
• Sinh lý:
Theo giới tính:
mg/l huyết thanh pmol/l huyết thanh
Nữ 6.6 - 10.9 58 - 96
Nam<50 tuổi 8.4 - 12.5 74 - 110
Nam>50 tuổi 8.1 - 14.4 72 - 127 Theo tuổi:
mg/l huyết thanh pmol/l huyết thanh
Sơ sinh 5 - 12 44 - 106
Trẻ em(1-18 tuổi) 4 - 14 35 - 123
Người lớn 6.6 - 14.4 58 - 127
Ngoài ra cịn có sự cịn phụ thuộc vào 1 số yếu tố:mang thai,sử dụng thuốc lợi niệu,tập thể dục mạnh,.... Bệnh lý:
Creatinin huyết tăng trong các bệnh lý suy thận:
Trước thận: Suy tim mất bù, mất nước, xuất huyết, hẹp động mạch thận.
Tại thận: Tổn thương cầu thận ( tăng huyết áp, đái tháo đường, viêm cầu thận, bệnh thận lupus hệ thống), tổn thương ống thận (viêm thận, bể thận cấp hay mạn, sỏi thận, đau tủy xương, tăng acid uric, nhiễm độc thận).
Sau thận: Sỏi thận, ung thư tiền liệt tuyến, các khối u bàng
Mức độ suy thận. Nồng độ creatinin máu
Đon vị (mg'dl) Đon vị (umol/1) Suy thận độ I (mức độ nhẹ) < 1.5 < 130 Suy thận độ n (mửc độ vừa) l.ỉ - 3.4 130-300 Suy thận độ nia (mức độ nặng) 3.5 - 6 300-500 Suy thận độ mb (múc độ nặng) 6 - 10 500-900
Suy thận độ IV (suy thận giai đoạn cuối)
Creatinin huyết giảm: suy nhược cơ thể, bệnh gan mạn tính, giảm khối lượng cơ (suy cơ, loạn dưỡng cơ bắp, tuổi già),dùng thuốc
chống động kinh,...
-> Độ thanh thải Creatinin:
C (ml/s) Tình trạng
>0.83 Suy thận có thể hồi phục
0.5-0.83 Suy thận cịn bù tốt
0.17-0.5 Suy thận nặng
<0.17 Phải loại bỏ thận/ghép thận
III. Định lượng GOT, GPT: C C
... -
U: Số mg creatinin trong mỗi dl nước tiểu trong vịng 24 giờ; (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
V: Thể tích nước tiểu thải ra mỗi phút (ml); -> Độ thanh thải để tiên lượng mức suy thận
P: Creatinin huyết thanh tính theo mg/dl. Độ thanh thải Creatinin
Nam < 40 tuổi: 107 - 139 ml/phút hoặc 1.78 - 2.32 ml/s Nữ < 40 tuổi: 87 - 107 ml/phút hoặc 1,45 - 1,78 ml/s Trẻ sơ sinh: 40 - 65 ml/phút
Tổng quan:
• Trị số bình thường là dưới 40UI/L
• GOT gặp nhiều ở cơ tim ^ định lượng để đánh giá mức tổn thương tim
• GPT gặp nhiều ở gan -> định lượng để đánh giá mức hư hại của gan
• GOT và GPT là các enzyme transaminase -> giúp chuyển nhóm amin trong các q trình đồng hố dị hố protein với các phản ứng
1. Nguyên tắc định lượng: Phản ứng đặc trưng:
• Với GOT:
a-Ketoglutarate + L-Asparate GOT L-Glutamate + Oxaloacetate
• Với GPT:
a-Ketoglutarate + L-Alanin GG>T L-Glutamate + Pyruvate Phản ứng định lượng:
• Với GOT:
Oxaloteacetate + NADH + H+ MDH L-Malate + NAD+
^
• Với GPT:
Pyruvate + NADH + H+ LDH L-Lactate + NAD+
NADH bị oxi hoá thành NAD. Mức độ giảm của NADH ảnh hưởng trực tiếp tương ứng với sự hình thành của oxaloacetate và cả hoạt động của GOT, GPT
2. Thuóc thử:
Dung dịch đệm Đệm Tris pH 7.8 (30 độ C) L-Aspartate LDH MDH Khởi động NADH a-Ketoglutarate Với GPT: Dung dịch đệm Đệm Tris pH 7.8 (25 độ C) L-Alanin LDH
80 mmol/1 200 mmol/1 > 1.6 U/L >0.5 u/l 0.18 mmol/1 12 mmol/1 70 mmol/1 410 mmol/1 > 1.7 U/L >0.5 u/l
37oC U/L ụkat /l Nam >38 > 0.63 Nữ > 32 >0.53 • Với GPT: 37C U/L ụkat /l Khởi động NADH a-Ketoglutarate 0.3 mmol/l 18 mmol/l 3. Gía trị kỳ vọng: • Với GOT:
Huyết thanh, huyết tương với Heparin hoặc EDTA 5. Độ tuyến tính:
Với giá trị cao trên thang đo nên pha loãng nhiều lần với 20pl mẫu đo với 200pl dung dịch NaCl. Trong trường hợp này nhân với
hệ số là 11
Phạm vi định lượng là 5 đến 280 U/l 6. Chuyển đổi đơn vị:
U/l ^ ựkat/l. Hệ số 0.0167
pkat/ỉ ■> U/l. Hệ số: 60
7. Quy trình thử nghiệm:- Bước sóng: 334, 340, 365 nm- Bước sóng: 334, 340, 365 nm - Bước sóng: 334, 340, 365 nm - Nhiệt độ 37 độ C (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
-> Hỗn hợp phản ứng với huyết thanh: trộn thuốc thử 1 với 5 thể tích và thuốc thử 2 với 1 thể tích -> Nhiệt độ từ 2 đến 8 độ C trong 15 ngày và 18 đến 22 độ C trong 3 ngày
- Bắt đầu với huyết thanh 1000 pl (hỗn hợp phản ứng) và 100 pl (với mẫu đo)
- Bắt đầu với thuốc thử R2 1000 pl (thuốc thử 1), 100 pl (mẫu đo), 200 pl (thuốc thử 2)
-> Trộn đều và ủ trong 30 giây ở 25 độ C. Đo sự thay đổi của sự hấp thụ ánh sáng trong ít nhất 3 phút sẽ cho ra 3 khoảng SA bao gồm SA 1, SA 2, SA 3, SA 4
(8A 2-8A1)+(8A 3-8A2)+(8A 4-8A 3)
8A /phút =--------------—------3^——------------------
8. Tính tốn:
Hệ số với phản ứng bắt đầu bằng huyết thanh
334 nm 340 nm 365 nm F x 8A/phút (Ul) 1780 1746 3235 F x 8A/phút (ụkat/l) 29.67 29.11 53.93 Hệ số với phản ứng bắt đầu R2 334 nm 340 nm 365 nm F x 8A /phút (U/l) 2103 2063 3823 F x 8A /phút (ựkat /l) 35.06 34.39 63.73 9. Biện luận:
Trong bệnh nhồi máu cơ tim thì GPT tăng ít hơn, GOT tăng đến 20 lần