Định lượng acid uric:

Tổng quát:

• Là sản phẩm thối hố của nhân purin

• Việc dư thừa Acid uric có thể gây lắng đọng và dẫn đến hình thành các tinh thể urat gây bệnh Gout

• Tuy nhiên ở pH bình thường thì Acid uric ở dạng ion, khi dư thừa và pH giảm thì sẽ gây lắng đọng tinh thể urat (kết hợp với các

ion kim loại như Na,...) ở các khớp tạo nốt tophi

• Định lượng Acid uric để theo dõi bệnh Gout hoặc điều trị bằng hoá xạ trị và theo dõi chức năng thận

1. Nguyên tắc:

-> Phương pháp PAP

-> Độ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độ acid uric 2. Nồng độ chỉ định:

Dung dịch đệm:

Dung dịch đệm phosphate (pH=7.8) 100 mol/l

2,4,6 Triiodine-3-hydroxibenzone 5 mmol/l Chất tẩy màu 2 g/l Chất khởi động: Peroxidase 40 U/ml PAP 4.5 mmol/l Uricase 3 U/ml Chất ổn định

Dung dịch Acid uric chuẩn 6 mg/dl hoặc 357 ựmol /1

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2ođến +8oC.

4. Mục đích sử dụng

5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc

thử có chứa muối Natri azide (NaNs) như chất bảo quản. Không được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc

6. Giá trị kỳ vọng:

Huyết tương/huyết thanh Mg/dl ựmol /1

Trẻ em Dưới 12 tháng <6.2 < 372 Trên 12 tháng < 6.1 < 362 Người lớn Nam 3.4 - 7 202 - 416 Nữ 2.4 - 5.7 142 - 339 g/24 giờ Mmol/ngày Nước tiểu 0.2 - 1 1.2 - 6 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA Nước tiểu sạch:

8. Độ tuyến tính:

Phạm vi định lượng là 0.25 đến 25 mg/dl 9. Chuyển đổi đơn vị:

Mg/dl -> mmol/l. Hệ số 59.5 Mmol/l -> mg/dl. Hệ số: 0.0168 10. Quy trình thử nghiệm:

- Bước sóng: 500 - 550 nm, 546 nm - Nhiệt độ 37 độ C

- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đế 8 độ C trong 40 ngày và 18 đến 22 độ C trong 10 ngày

Ống trắng Ống đo Ống chuẩn Thuốc thử R 1000 Ịỉl 1000 Ịỉl 1000 Ịỉl Dung dịch chuẩn 20 pl Huyết thanh bệnh nhân 20 ựl Nước cất 20 ựl

-> Trộn đều và ủ trong 5 phút ở 37 độ C. Trong 20 phút sau, đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample), đo A(standard)

SA (S) — A(sample) — A(RBL) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

ATÀ ATTNông độ AU = 6 x ... ă _ Ị. (mg/dl)ỖAcùamẫu ỊAmẫucnn

11. Biện luận:

Trị số bình thường của Acid uric là 3 đến 7 mg/dl -> Tăng trên 7 mg/dl có ý nghĩa lâm sàng

Các bệnh lý liên quan đến tăng AU:

Nguyên phát:

Do giảm HGPRT gây tăng PRPP kích thích tăng tổng hợp purine lên 200 lần và tăng sản phẩm thoái hoá của purine là AU lên: hội chứng Lesch-Nyham (thiếu hoàn toàn), hội chứng Seegmiller (thiếu một phần)

Tăng hoạt PRPP synthetase -> Tính tốn: Với hệ số: Độ dài bước sóng 546 nm Với chuẩn: c (mg/dl) 53 x ỖA (S)

Thứ phát: do ăn nhiều purine, dung huyết, hoá xạ trị, thiếu G-phosphatase (gây tan huyêt và giảm tuổi thọ hồng cầu), suy thận, tiểu đường, béo phì, cao huyết áp, nhiễm toan, cường giáp, nhược giáp, hội chứng Down,...

-> Khi có triệu chứng Gout có thể xét nnghiệm xem trong dịch khớp có tinh thể Acid uric

Các yếu tố ảnh hưởng đến trị số acid uric:

Sử dụng các loại thuốc nhất là với bệnh tim Sử dụng rượu bia

Do ngộ độc chì hay thuốc trừ sâu Ăn kiêng quá mức

Chương 5: Glucid I. Định lượng Glucose:

1. Tổng quát:Nguồn gốc: Nguồn gốc:

• Ngoại sinh: từ thức ăn

• Nội sinh: qua q trình phân giải glycogen ở gan và quá trình tân tạo glucose nhờ thoái hoá lipid và protid

Là đơn vị cấu tạo cơ bản của carbohydrat, là monosaccảide

Là đơn vị cung cấp năng lượng quan trọng cho cơ thể, có thể cung cấp từ 2 đến 33 ATP tuỳ vào nguồn gốc glucose và phân giải trong điều kiện hiếu khí hay kị khí

Vai trị cân bằng áp suất thẩm thấu của gan

mau

Qúa trình điều hồ nhờ vào nhiều loại hormone bao gồm:

• Tăng đường huyết:

Adrenalin và Glucagon: Khi đường huyết giảm thì kích thích tế bào a ở tuỵ tiết ra glucagon và tác động lên gan kích thích gan

phân giải glycogen thành glucose vào máu -> tăng đường huyết

Glucocorticoid: tạo ra ở vỏ thượng thận, tăng tân tạo glucose, tăng hấp thụ glucose ruột, ức chế tiêu dùng glucose các mô, tăng

phân ly glycogen -> tăng đường huyết

GH: ở thuỳ trước tuyến n, giảm tính thấm glucose vào mơ, giảm tổng hợp glycogen, tăng phân ly glycogen -> tăng đường huyết ACTH: ở thuỳ trước tuyến yên, kích thích vỏ thượng thận sinh hormon steroid trong đó có glucocorticoid gây tăng đường huyết

• Giảm đường huyết:

Insullin: do tế bào p đảo Langerhans tuyến tuỵ tiết ra, tăng tính thấm màng tế bào đối với glucose, tăng sự sự dụng glucose ở các

mơ -> giảm đường huyết (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

-> Vì insullin là hormone duy nhất giúp làm giảm nồng độ glucose nên nó rất quan trọng trong việc điều hồ đường huyết và là cơ sở phân loại đái tháo đường

2. Nguyên tắc định lượng:

Glucose được oxi hoá nhờ glucose oxidase trong điều kiện có oxi thành gluconolactone. Phản ứng tạo hydrogen peroxide và được ly giải với phenol và 4-aminophenazone thành quinoneimine màu đỏ tím. Độ đậm nhạt của màu sẽ bị ảnh hưởng trực tiếp bởi lượng glucose ban đầu

Glucose + O2 + H2O GOD Gluconolactone + H2O2

^

4-aminophenazne 0.3 mmol/l Phenol 1 mmol/l Glucose oxidase > 20.0 KU/L Peroxidase > 1.5 KU/l Dung dịch chuẩn 100 mg/dl

-> Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử còn nguyên niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2o đến +8oC 4. Mục đích sử dụng

Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Glucose trong huyết thanh và huyết tương người 5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trg khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa muối Natri azide (NaN3). Khơng được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc

6. Gía trị kỳ vọng:

Sử dụng huyết thanh huyết tương cho kết quả nhanh

0.1 mol/l 3. Nồng độ của các dung dịch được sử dụng:

Mg/dl Mmol/l Sơ sinh 40-80 2.22-4.44 Trẻ em 60-110 3.33-6.11 Người lớn 70-105 3.89-5.83 >60 tuổi 80-115 4.44-6.38 >70 tuổi 83-110 4.61-6.11 7. Thành phần mẫu thử

Huyết thanh, huyết tương, nước tiểu

Lượng glucose sẽ ổn định trong 24 giờ với nhiệt độ từ 2 đến 8 độ C

Nếu là huyết thanh hay huyết tương thì phải được thủe trong vịng 30 phút sau khi lấy 8. Độ tuyến tính:

Thử nghiệm sẽ có dạng tuyến tính đơi svới nồng độ glucose là 400mg/dl hoặc 22.2 mmol/l. Nếu nồng độ glucose của mẫu cao hơn mức trên, pha loãng mẫu với dung dịch saline (0.9%) với tỉ lệ 1:2. Nhân kết quả với 3

Phạm vi định lượng là 1.1 đến 400 mg/dl 9. Chuyển đổi đơn vị:

10. Quy trình thử nghiệm: - Bước sóng: 500 nm, 546 nm - Nhiệt độ 25 độ C hoặc 37 độ C

- Thử nghiệm: yêu cầu 1 ống trắng cho mỗi thử nghiệm

Óng chuẩn Ĩng thử Ĩng trắng

Thuốc thử 1000 pÌ 1000 pÌ 1000 pÌ

Mầu thử 10 ỊJÌ

Dung dịch chuẩn 10 ựÌ

-> Trộn đều và ủ trong 15 phút ở 25 độ C hoặc 10 phút ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn và ống đo với mẫu trắng trong 60 phút (ơA 6

■^ Tính tốn:

ỖAcủamẫu

Nơng độ glucose = 100 x c, » ,ôAmẫ uchuãn (mg/dl)

Nông độ glucose = 5.55 x ôAcủ amẫu (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

11. Biện luận:

Nhằm đánh giá sự điều hồ đường huyết

Lấy máu khi nhịn ăn được ít nhất 8 giờ với đo lượng đường huyết lúc đói và sau bữa ăn 2 giời đối với đo lượng đường huyết lúc no Trị số đường huyết bình thường là 70 - 120 mg/dl

Các bệnh lý gây ảnh hưởng đến nồng độ Glucose máu: -> Tăng Glucose máu:

• Bệnh tiểu đường

• Viêm tụy cấp hay mạn tính

• Các bệnh về tuyến n hay tuyến thượng thận

• Nhiễm độc giáp nặng

• Chống

• Bỏng

• Viêm màng não

• Tình trạng stress.... -> Giảm Glucose máu:

• Thiểu năng gan, xơ gan giai đoạn cuối

• Sau cắt đoạn dạ dày

• Rối loạn hệ thần kinh tự động

Các yếu tố khác có thể gây ảnh hưởng:

• Do lấy máu sau khi ăn

• Bệnh nhân đang dùng ACTH, corticoid gây tăng đường huyết

• Do chế độ ăn

• Thiếu ngủ

• Dùng quá liều insulin hay thuốc điều trị tiểu đường

-> Thường được dùng để chẩn đoán các bệnh lý liên quan đến ống thận đặc biệt là ống lượn gần II. Định lượng Amylase:

Có 3 loại amylase là alpha, beta và grama nhưng chỉ có alpha-amylase ở người Chia làm 2 loại:

• P-amylase ở tuỵ: 40%

• S-amylase ở tuyến nước bọt: 60%

Chức năng là phân giải liên kết 1, 4 - glycozid

Định lượng amylase chỉ dấu các bệnh lý liên quan đến tuyến nước bọt và tuyến tuỵ là chủ yếu 2. Nguyên tắc định lượng:

Phản ứng màu enzyme với 4.6-Ethylidene-(G7)-1,4-nitrophenyl-(G1)-a-maltoheptaoside

5-Ethylidene-G7PNP + 5H2O a - amylase 2Ethylidene-G5 + 2G2PNP + 2Ethylidene-G4 + 2G3PNP + Ethyliden-G3 + G4PNP

2 G2PNP + 2G3PNP + 14 H2O -^ a-Glucosidase 5PNP +14G (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Trong đó: PNP là p.Nitrophenol và G là Glucose

Độ đậm nhạt của màu p-Nitrophenol sẽ ảnh hưởng trực tiếp bởi mức hoạt động của Amylase

-> Nguyên nhân sử dụng chất mơ phỏng tinh bột là 5-Ethylidene-G7PNP vì thời gian phân giải tinh bột sẽ kéo dài do cấu trúc phức tạp, đồng thời. tinh bột sẽ có 2 lại liên kết là 1,4 glycozid và 1,6 glycozid nếu dùng thì sẽ khơng định lượng được chính xác amylase 3 Nồng độ của các dung dịch được sử dụng:

MgCl2 8 mmol/l

a-Glucosidase > 2 KU/L

NaN3 0.09%

Ethylidene-G7-PNP 3 mmol/dl

-> Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2oC đến +8oC

4. Mục đích sử dụng

Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng amylase trong huyết thanh và huyết tương người 5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. 6. Gía trị kỳ vọng:

Ở 37 độ C

Huyết thanh/Huyết tương

Tỉ số

a-amylase/Creatinine Nước tiểu

28 -100 U/l <310U/g < 460U/l

0.47 - 1.67 ụkal/l <5.17 ụkat / g < 7.67 ụkat/l

7. Thành phần mẫu thử

Huyết thanh, huyết tương, nước tiểu

Sẽ khơng có sự giảm đáng kể của amylase trong huyết thanh trong 5 ngày ở 4 độ C Amylase không ổn định trong nước tiểu điều chỉnh độ pH về 7 khi lưu trữ

8. Độ tuyến tính:

1500 U/l khi đo trong 3 phút

Nếu nồng độ mẫu thử cao hơn pha 0.1 ml mẫu thử với 1 ml NaCl (0.9%) và lặp lại thử nghiệm nhân kết quả với 11 Phạm vi định lượng là 3 đến 1500 mg/dl

9. Chuyển đổi đơn vị:

U/l ^ pkat/l. Hệ số 0.0167 gkat/l ^ U/l. Hệ số: 60 10. Quy trình thử nghiệm: - Bước sóng: Hg 405 nm - Nhiệt độ 37 độ C - Đường sáng: 1 cm

Huyết thanh Nước tiểu

R1 1000 ựl 1000 ựl

R2 200Ịdl 200Ịdl

Mầu thử 40pl 20pl (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

-> Trộn và đọc sự hấp thu ánh sáng (A) sau 2 phút. Lặp lại phép đọc sau chính xác 1, 2 và 3 phút. Xác định độ thay đổi của độ hấp thu (SA /min L

. (A1 -A0)+(A2-A1)+(A3-A2)

SA /min = ----------—------3 ' v - --

■^ Tính tốn:

Hoạt độ trong huyết thanh U/l = 2930 x SA/min Hoạt độ trong nước tiểu U/l = 5800 x SA /min 11. Biện luận:

Trị số bình thường là từ 53 - 123 U/l Nguyên nhân sinh lý:

• Độ tuổi: tăng nhẹ ở người lớn tuổi

• Với tuyến tuỵ như:

Viêm tụy cấp hay mạn tính. Trong viêm tụy cấp, amylase trong máu thường tăng lên gấp 4-6 lần so với giá trị tham khảo và thường cao song song với nồng độ lipase.

Tắc nghẽn ống tụy và ung thư tuyến tụy.

Amylase cũng tăng trong viêm tụy mạn tính thường liên quan với chứng nghiện rượu, chấn thương, tắc nghẽn ống tụy. Viêm tụy cấp do thuốc (corticosteroid, dexamethason, mercaptopurin, furocemid...).

• Bệnh lý tuyến nước bọt:

Viêm tuyến nước bọt Quai bị Tắc nghẽn ống đẫn nước bọt • Các trường hợp khác: Ngộ độc rượu cấp Tắc ống mật Bênh lý suy thận

-> Nồng độ amylase máu giảm ở một người có các triệu chứng viêm tụy có thể cho biết các tế bào sản xuất amylase của tuyến tụy bị tổn thương vĩnh viễn.

Chương 6: Phân tích nước tiểu 10 thơng số

♦ về vấn đề phân tích nước tiểu:

I. Mục đích sử dụng:

Que thử nước tiểu là dạng tấm nhựa mỏng trên bề mặt có các vùng được phủ sẵn thuốc thử riêng biệt. Được dùng phát hiện định tính hoặc bán định lượng một hoặc vài chất cần phân tích sau trong nước tiểu: Ascorbic Acid, Glucose, Billirubin, Ketone (Acetonic Acid), trọng lượng riêng, máu, pH, protein, urobilinogen, nitrite, leukocytes. Que thử nước tiểu đucợ sử dụng cho xét nghiệm tại chỗ và các phịng thí nghiệm

II. Tổng quan:

Thành phần nước tiểu thay đổi trong suốt giai đoạn của bệnh hoặc rối loạn chức năng của cơ thể trước khi các thành phần của máu thay đổi rõ rệt. Phân tích nước tiểu là một quy trình hữu ích, mỗi một chỉ số sẽ phản ánh sức khoẻ; tình trạng bệnh và là một phần của kiểm tra sức khoẻ định kỳ. Que thử nước tiểu có thể dùng để đánh giá tổng quan sức khoẻ và hỗ trợ trong chẩn đoán, theo dõi quá trình chuyển hố hoặc bệnh trên cơ thể gây ảnh hưởng đến chức năng thận, rối loạn nội tiết và bệnh rối loạn đường tiết niệu. III. Thận trọng:

Chỉ dùng chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Khơng dùng que thử đã hết hạn Que thử phải được bảo quản trong lọ đóng kín cho đến khi sử dụng

Tất cả mẫu bệnh phẩm được xem là nguy cơ đọc hại và xử lý như tác nhân gây bệnh Que thử sau khi dùng được huỷ theo quy định

IV. Bảo quản và độ ổn định:

Bảo quản trong lọ đóng kín nắp ở nhiệt độ phịng hoặc bảo quản lạnh (2-30oC). Tránh ánh sáng mặt trời. Que thử giữ ổn định trong

khoảng thời gian sử dụng ghi trên nhãn. Không được lấy túi hạt chống ẩm của lọ ra ngoài. Lấy lượng que thử vừa đủ và dùng ngay, đậy chặt nắp lọ ngay sau khi lấy que thử. Tránh đóng băng. Khơng sử dụng khi hết hạn

Lưu ý: Một khi mở lọ, que thử còn lại giữ ổn định đến 3 tháng. Độ ổn định có thể giảm trong điều kiện độ ẩm cao

V. Lấy và bảo quản mẫu:

Mẫu nước tiểu phải được chứa trong dụng cụ đựng mẫu khô, sạch và phải được xét nghiệm càng nhanh càng tốt. Không được ly tâm. Khơng sử dụng nước tiểu có chất bảo quản. Nếu xét nghiệm khơng thực hiện trong vịng 1 giờ sau lấy mẫu, ngay lập tức bảo