I. Định lượng billirubin tồn phần:
Tổng qt:
• Billirubin là sắc tố có màu vàng
• Billirubin tự do (Billirubin gián tiếp) là sản phẩm của q trình thối hố Hb (Hem)
• Sau đó Billurubin tự do kết hợp với acid glucuronic tạo Billirubin liên hợp ở gan và mất tính độc đồng thời tan được trong nước
• Billirubin tồn phần = Billirubin tự do (85%) + Billirubin liên hợp (15%)
• Billirubin tự do khuếch tán qua thành mạch và các tổ chức do có thể đi trực tiếp qua màng bán thấm gây vàng da
• Định lượng Billirubin tồn phần nhằm chẩn đốn chức năng gan, màt....
• Định lượng Billirubin trực tiếp nhằm xác định nguyên nhân của hiện tượng vàng da là trước, tại hay sau gan
1. Nguyên tắc:
Cần chất gia tốc như: DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine
Cho billirubin tác dụng với diazotized 2,4-dichloroaniline để tạo nên azobillirubin màu đỏ. Albumin bao lấy bilirubin sẽ giải phóng
Do đặc tính nhiều vịng thơm nên hợp chất nhạy với ánh sáng
-> Độ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độ Billirubin 2. Nồng độ chỉ định:
HCl 33 mmol/l Chất tẩy rửa Thuốc thử B: NaNŨ2 1.5 mmol/l Thuốc thử C: Chất ổn định
Diazotized 2,4-dichloroaniline 0.8 mmol/l
HCl 17 mmol/l
Chất tẩy rửa
3. Lưu trữ và bảo quản
Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2ođến +8oC. Thuốc thử A và C
có chứa Diazotized 2,4-dichloroaniline nên tránh ánh sáng 4. Mục đích sử dụng
Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Billirubon trong huyết thanh và huyết tương người
5. Lưu ý
Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa các chất gây kích thích. Khơng được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc. Khi lỡ chạm phải rửa sạch vùng da đó với nước và can thiệp y tế khi chạm phải mắt, hít hay nuốt phải.
6. Giá trị kỳ vọng: Mg/dl ựmol /1 1 ngày tuổi <6 < 103 2 ngày tuổi < 7 < 120 3 -5 ngày tuổi < 12 < 205 Trẻ em và người lớn < 1 < 17 7. Thành phần mẫu thử:
Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu 8. Độ tuyến tính:
Nồng độ tuyến tính là 30 mg/dl hoặc 510 pmol/1. Trong trường hợp cao hơn cần pha loãng với nước cất ở tỉ lệ ^ và nhân kết quả với 3
9. Chuyển đổi đơn vị:Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1 Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1
10. Quy trình thử nghiệm:
-> Phương pháp đo điểm cuối hố học - Bước sóng: 546 nm
- Nhiệt độ 25 độ C
-> Trộn thuốc thử 1 với 2 ở tỉ lệ 1/1. Trước khi dùng điều chỉnh nhiệt độ phòng trước 15 phút và trong điều kiện tối; chuẩn bị ống trắng thứ 3 với thuốc thử 3
- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đến 8 độ C trong 21 ngày và 18 đến 22 độ C trong 7 ngày -> Thử nghiệm bình thường:
Ống trắng Ống đo
Thuốc thử R1+2 1000 ựl
Huyết thanh bệnh nhân 100 pl 100 pl
Thuốc thử 3 1000 Ịỉl
-> Thử nghiệm cho trẻ em:
Ống trắng Ống đo
Thuốc thử R1+2 1000 pl
-> Trộn đều và ủ trong ít nhất 10 phút trong điều kiện khơng ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(B)
SA (S) — A(sample) — A(B)
-> Tính tốn: Với hệ số:
11. Biện luận:Trị số bình thường:Trị số bình thường:Trị số bình thường:Trị số bình thường: Trị số bình thường:
Bi tồn phần từ 0.5 - 1 mg/dl
Bi trực tiếp không quá 30%: < 0.3 mg/dl Bi gián tiếp không quá 70%: < 0.7 mg/dl
Khi Bi vượt quá mức đến 2 - 2.5 mg/dl thì gây vàng da
-> Lượng Bi tăng cao so với mức bình thường là dấu hiệu cho thấy mắc các bệnh về gan cao hơn và lượng hồng cầu bị phá huỷ cao hơn. Đối với trẻ em, việc xác định nồng độ Billirubin sẽ giúp can thiệp kịp thời vào lượng Bi dư thừa để hạn chế khả năng tổn thương tế bào não.
Các bệnh lý gây tăng giảm lượng Bi:
Các trường hợp gây vàng da trước gan: vàng da sinh lý ở trẻ sơ sinh, truyền nhầm nhóm máu, thiếu men G6PD, sốt rét, bệnh
thiếu máu Biermer ... tăng bilirubin gián tiếp là chủ yếu
Thử nghiệm bình thường
Thử nghiệm cho trẻ
Mg/dl SA (S) x 12.5 SA (S) x 58
ựmol /1 SA (S) x 214 SA (S) x 992
• Các trường hợp gây vàng da tại gan và sau gan: viêm gan siêu vi, viêm và xơ gan do rượu, ung thư tụy tạng, bệnh Dubin-
Johnson, ung thư gan, tắc đường mật do giun,... tăng bilirubin trực tiếp là chính Một số lưu ý khác:
• Tập luyện thể lực quá sức trước khi xét nghiệm sẽ làm cho nồng độ bilirubin tăng
• Khơng ăn trong một thời gian dài (nhịn ăn), điều này thường làm tăng nồng độ bilirubin gián tiếp
• Bệnh phẩm bị tán huyết
• Để mẫu bệnh phẩm tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời hay ánh sáng nhân tạo > 1 giờ sẽ làm giảm nồng độ bilirubin của bệnh
phẩm (mức độ giảm nồng độ bilirubin tồn phần có thể lên tới 50% mỗi giờ).
• Tiếp xúc trong vịng 24 giờ trước đó với thuốc cản quang sẽ làm thay đổi kết quả xét nghiệm.
• Mẫu huyết thanh đục có thể làm ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.
• Ngồi ra một số thuốc có thể gây tăng hay giảm Bill
II. Định lượng Billirubin trực tiếp:Tổng quát: Tổng quát:
• Xác định căn nguyên là do tan máu hay do tạo hồng cẩu không hiệu quả
• Trong thăm dị các tắc mật (trong và ngồi gan): nồng độ bilirubin toàn tăng > 40 mg / dL chỉ dẫn tình trạng tắc nghẽn ở mức độ tế bào gan
• Đánh giá mức độ tăng thành phần bilirubun trực tiếp hay gián tiếp có thể gợi ý các chẩn đốn:
o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 20 - 40% bilirubin toàn phần: gợi ý nhiều cho vàng da nguyên nhân tại gan hơn lànguyên
nhân sau gan.
o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 40 - 60% bilirubin toàn phần: gặp ở cả vàng da do nguyên nhân tại gan và saugan.
o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm >50% bilirubin toàn phần gợi ý nhiều cho vàng da do nguyên nhân sau gan
1. Nguyên tắc:
Cho Billurubin toàn phần tác dụng với DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine và diazotized sulfanic acid để hình thành azo màu đỏ. Bil trực tiếp (Slucuronized billirubin thuỷ phân) phản ứng trực tiếp không cần DMSO hay coffeine. Sự tăng độ hấp thụ của azo ở 546 nm bị tác động trực tiwwps bởi nồng độ bil trưc tiếp trong mẫu và đo bằng máy quang phổ
2. Nồng độ chỉ định:Thuốc thử A:Thuốc thử A:Thuốc thử A: Thuốc thử A:
Sulfanilic acid 29 mmol/l
HCl
Thuốc thử B:
3. Lưu trữ và bảo quản
Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2ođến +8oC. Thuốc thử A và C
có chứa Diazotized 2,4-dichloroaniline nên tránh ánh sáng 4. Mục đích sử dụng
Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Billirubon trong huyết thanh và huyết tương người 5. Lưu ý
Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa các chất gây kích thích. Khơng được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc. Khi lỡ chạm phải rửa sạch vùng da đó với nước và can thiệp y tế khi chạm phải mắt, hít hay nuốt phải.
6. Giá trị kỳ vọng:
Lên đến 5.1 ựmol/1(0.3 mg/dl) 7. Thành phần mẫu thử:
Huyết thanh sạch và không tán huyết hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu
8. Độ tuyến tính:
Nồng độ tuyến tính là 8 mg/dl hoặc 137 pmol/1. Trong trường hợp cao hơn cần pha lỗng với nước mi sinh lý (0.9%) ở tỉ lệ 1/5 và nhân kết quả với 6
9. Chuyển đổi đơn vị: Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1
pmol/l -> mg/dl. Hệ số: 0.0585
10. Quy trình thử nghiệm:
-> Phương pháp đo điểm cuối hố học - Bước sóng: 546 nm
- Nhiệt độ 25 độ C
Ống trắng Ống đo
Thuốc thử R1 1000 ịll 1000 ịll
Thuốc thử R2 20 ịil
Huyết thanh 100 ịll 100 ịil
-> Trộn đều và ủ trong điều kiện không ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(B) sau đúng 5 phút
SA (S) — A(sample) — A(B)
ỖA (S) x 12.8
ỖA (S) x 219
-> Tán huyết có thể gây ảnh hưởng đến kết quả
Bil rất nhạy với ánh sáng nên q trình định tính cần diễn ra ngay khi lấy mẫu 11. Biện luận:
-> Triệu chứng liên quan đến tăng bilirubin có thể gồm vàng da - vàng của da và mắt, mệt mỏi, ngứa da, nước tiểu sậm màu và chán ăn.
Các trường hợp tăng Bil trực tiếp:
• Giảm bài tiết Bi TT vào trong các tiểu quản mật.
• Khi gan bị tổn thương, khả năng bài tiết Bi TT giảm nặng hơn nhiều so với khả năng kết hợp
• Khi khơng được bài tiết vào mật thì Bi TT sẽ quay ngược vào hệ tuần hồn do5cơ chế sau:
o Vỡ các tiểu quản mật thứ phát do hoạt tử tế bào gan.
o Tắc các tiểu quản mật do tế bào gan phù nề gây chèn ép hoặc cô đặc mật.
o Tắc các tiểu quản mật trong gan do tế bào viêm.
o Thay đổi tính thấm của tế bào gan.
o Ứ đọng Bi TT trong tế bào gan, gây khuếch tán thứ phát vào huyết tương.
Mg/dl
pmol / 1
• Bệnh lý tế bào gan: viêm gan do virus, viêm gan do thuốc (INH, Rifampicin, Halothan, Methyldopa, Chlorpromazine, Paracetamol, Salicylat..., viêm gan nhiễm độc;
• Suy tim mất bù.
• Xơ gan, xơ gan mật tiên phát, viêm đường mật xơ hố
• Xâm nhiễm gan hoặc các tổn thương (ví dụ: bệnh lý khối u, di căn gan, bệnh Wilson, u hạt...).
III. Định lượng acid uric:Tổng quát: Tổng quát:
• Là sản phẩm thối hố của nhân purin
• Việc dư thừa Acid uric có thể gây lắng đọng và dẫn đến hình thành các tinh thể urat gây bệnh Gout
• Tuy nhiên ở pH bình thường thì Acid uric ở dạng ion, khi dư thừa và pH giảm thì sẽ gây lắng đọng tinh thể urat (kết hợp với các
ion kim loại như Na,...) ở các khớp tạo nốt tophi
• Định lượng Acid uric để theo dõi bệnh Gout hoặc điều trị bằng hoá xạ trị và theo dõi chức năng thận
1. Nguyên tắc:
-> Phương pháp PAP
-> Độ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độ acid uric 2. Nồng độ chỉ định:
Dung dịch đệm:
Dung dịch đệm phosphate (pH=7.8) 100 mol/l
2,4,6 Triiodine-3-hydroxibenzone 5 mmol/l Chất tẩy màu 2 g/l Chất khởi động: Peroxidase 40 U/ml PAP 4.5 mmol/l Uricase 3 U/ml Chất ổn định
Dung dịch Acid uric chuẩn 6 mg/dl hoặc 357 ựmol /1
3. Lưu trữ và bảo quản
Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2ođến +8oC.
4. Mục đích sử dụng
5. Lưu ý
Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc
thử có chứa muối Natri azide (NaNs) như chất bảo quản. Không được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc
6. Giá trị kỳ vọng:
Huyết tương/huyết thanh Mg/dl ựmol /1
Trẻ em Dưới 12 tháng <6.2 < 372 Trên 12 tháng < 6.1 < 362 Người lớn Nam 3.4 - 7 202 - 416 Nữ 2.4 - 5.7 142 - 339 g/24 giờ Mmol/ngày Nước tiểu 0.2 - 1 1.2 - 6 7. Thành phần mẫu thử:
Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA Nước tiểu sạch:
8. Độ tuyến tính:
Phạm vi định lượng là 0.25 đến 25 mg/dl 9. Chuyển đổi đơn vị:
Mg/dl -> mmol/l. Hệ số 59.5 Mmol/l -> mg/dl. Hệ số: 0.0168 10. Quy trình thử nghiệm:
- Bước sóng: 500 - 550 nm, 546 nm - Nhiệt độ 37 độ C
- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đế 8 độ C trong 40 ngày và 18 đến 22 độ C trong 10 ngày
Ống trắng Ống đo Ống chuẩn Thuốc thử R 1000 Ịỉl 1000 Ịỉl 1000 Ịỉl Dung dịch chuẩn 20 pl Huyết thanh bệnh nhân 20 ựl Nước cất 20 ựl
-> Trộn đều và ủ trong 5 phút ở 37 độ C. Trong 20 phút sau, đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample), đo A(standard)
SA (S) — A(sample) — A(RBL)
ATÀ ATTNông độ AU = 6 x ... ă _ Ị. (mg/dl)ỖAcùamẫu ÒAmẫucnuãn
11. Biện luận:
Trị số bình thường của Acid uric là 3 đến 7 mg/dl -> Tăng trên 7 mg/dl có ý nghĩa lâm sàng
Các bệnh lý liên quan đến tăng AU:
Nguyên phát:
Do giảm HGPRT gây tăng PRPP kích thích tăng tổng hợp purine lên 200 lần và tăng sản phẩm thoái hoá của purine là AU lên: hội chứng Lesch-Nyham (thiếu hoàn toàn), hội chứng Seegmiller (thiếu một phần)
Tăng hoạt PRPP synthetase -> Tính tốn: Với hệ số: Độ dài bước sóng 546 nm Với chuẩn: c (mg/dl) 53 x ỖA (S)
Thứ phát: do ăn nhiều purine, dung huyết, hoá xạ trị, thiếu G-phosphatase (gây tan huyêt và giảm tuổi thọ hồng cầu), suy thận, tiểu đường, béo phì, cao huyết áp, nhiễm toan, cường giáp, nhược giáp, hội chứng Down,...
-> Khi có triệu chứng Gout có thể xét nnghiệm xem trong dịch khớp có tinh thể Acid uric
Các yếu tố ảnh hưởng đến trị số acid uric:
Sử dụng các loại thuốc nhất là với bệnh tim Sử dụng rượu bia
Do ngộ độc chì hay thuốc trừ sâu Ăn kiêng quá mức
Chương 5: Glucid I. Định lượng Glucose:
1. Tổng quát:Nguồn gốc: Nguồn gốc:
• Ngoại sinh: từ thức ăn
• Nội sinh: qua q trình phân giải glycogen ở gan và q trình tân tạo glucose nhờ thối hố lipid và protid
Là đơn vị cấu tạo cơ bản của carbohydrat, là monosaccảide
Là đơn vị cung cấp năng lượng quan trọng cho cơ thể, có thể cung cấp từ 2 đến 33 ATP tuỳ vào nguồn gốc glucose và phân giải trong điều kiện hiếu khí hay kị khí
Vai trị cân bằng áp suất thẩm thấu của gan
mau
Qúa trình điều hồ nhờ vào nhiều loại hormone bao gồm:
• Tăng đường huyết:
Adrenalin và Glucagon: Khi đường huyết giảm thì kích thích tế bào a ở tuỵ tiết ra glucagon và tác động lên gan kích thích gan
phân giải glycogen thành glucose vào máu -> tăng đường huyết
Glucocorticoid: tạo ra ở vỏ thượng thận, tăng tân tạo glucose, tăng hấp thụ glucose ruột, ức chế tiêu dùng glucose các mô, tăng
phân ly glycogen -> tăng đường huyết
GH: ở thuỳ trước tuyến n, giảm tính thấm glucose vào mơ, giảm tổng hợp glycogen, tăng phân ly glycogen -> tăng đường huyết ACTH: ở thuỳ trước tuyến yên, kích thích vỏ thượng thận sinh hormon steroid trong đó có glucocorticoid gây tăng đường huyết
• Giảm đường huyết:
Insullin: do tế bào p đảo Langerhans tuyến tuỵ tiết ra, tăng tính thấm màng tế bào đối với glucose, tăng sự sự dụng glucose ở các
mô -> giảm đường huyết
-> Vì insullin là hormone duy nhất giúp làm giảm nồng độ glucose nên nó rất quan trọng trong việc điều hoà đường huyết và là cơ sở phân loại đái tháo đường
2. Nguyên tắc định lượng:
Glucose được oxi hoá nhờ glucose oxidase trong điều kiện có oxi thành gluconolactone. Phản ứng tạo hydrogen peroxide và được ly giải với phenol và 4-aminophenazone thành quinoneimine màu đỏ tím. Độ đậm nhạt của màu sẽ bị ảnh hưởng trực tiếp bởi lượng