■^ Định lượng cả Triglycerid, Cholesterol toàn phần, LDL-C và HDL-C để có thể chẩn đốn chính xác tình trạng và nguy cơ của
bệnh
Type Synonym Defect Se rum
abnormality Clinical Eeatures Treatment Serumappearance Type
1 FamlllalHyperchylomicronemia AlteredLow LDL ApoC2
Chylomicron Ỳ Pancreatitis, Lipemia retinalis, skin eruptions, Xanthoma,
Hepatosplenomegaly
Diet Creamy top layer Type
Ila EamilialHypercholestrolemia receptor4/LDL LDLI' Xanthelasma, Arcussenilis, Tendon xanthomas cholestyramine or Cholestipol, Statỉns, Niacin clear Type llb FamilialCombined Hypercholestrolemia 4/LDL receptor & Apo B
LDL & VLDLT* Statins, Niacin,
Pibrate Clear Type
III Pamilialdysbetalipoproteinemia synthesisApo E2 dect
IDLỲ Tubo-eruptive xanthomas, palmar xanthoma
Fibrate, Statins Turbid Type
IV Familial Hyperlipemia production,'t-VLDL •sbeliminatio n
VLDL-t Statins, Niacin,
Fibrate Type
V hypertriglyceridemiaEndogenous production,TVLDL 4/LPL
VLDL&
Chylomicron/b Niacin, Pibrate
Creamy top layer & Turbid bottom I. Định lượng Triglyceride Tổng quát:
Nội sinh: do gan tổng hợp và vận chuyển nhờ VDLD Ngoại sinh: thức ăn và vận chuyển nhờ Chylomicron
• Trị số bình thường là dưới 150 mg% và ở VN là 112 ± 40 mg/dl
-> Đánh giá nguy cơ một số bệnh như tiểu đường, tim mạch,... 1. Nguyên tắc định lượng:
TG được định lượng bằng phương pháp enzyme so màu
Dung dịch cuối cùng để định lượng là 4-(p-Benzoquinone-monoimino)-phenazone có màu đỏ Các loại enzyme chính trong định lượng TG là Peroxidase, Glycerol kinase, Glycerol-3-phosphate oxidase. Các phương trình cụ thể như sau:
Triglyceride + 3H2O LPL Glycerol + 3RCOOH -> Tách TG thành glycerol và acid béo
Glycerol + ATP GK, Mg 2 + 6 6 Glycerol-3-phosphate +ADP Glycerol-3-phosphate + O2 GPO Dihydroxyacetol + H2O2
2. Thuốc thử:
Gồm 2 phần là dung dịch đệm và dung dịch chuẩn
Dung dịch đệm đơn: Dung dịch đệm pipes (pH=7.0) 4-Chlorophenol Mg2+ 5 mmol/1 ATP 1 mmol/1 Peroxidase (POD) Glycerol kinase (GK) 4-aminoantipyrine
Glycerol-3-phosphate oxidase (GPO) Natri azide (NaN3)
Dung dịch triglycerol chuẩn
3. Tiến hành:
40 mmol/1 5 mmol/1 > 1 u/l > 1 u/l 0.4 mmol/1 >3.5U/ml 0.05% 200mg/dl hoặc 2.28 mmol
Ống chuẩn Ống trắng Ống đo
Thuốc thử 1000 ql 1000 ql 1000 ql
Huyết thanh mẫu 10 ql
Huyết thanh bệnh nhân 10 ql
Các giá trị khác:
Bước sóng: 500 nm, 546 nm Nhiệt độ 37 độ C
Thử nghiệm: yêu cầu 1 ống trắng cho mỗi thử nghiệm
Bảo quản thuốc thử đã mở ở 18 đế 22 độ C trong 30 ngày nếu tránh xa ánh sáng
Huyết thanh sử dụng Heparin/EDTA là thuốc chống đông hoặc không dùng chống đông
-> Trộn đều và ủ trong 5 phút ở 25 độ C hoặc 10 phút ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn và ống đo với mẫu trắng trong 60 phút (ổ^)
4. Khoảng tuyến tính:
Thử nghiệm sẽ có dạng tuyến tính đối với nồng độ TG là 10 đến 1000 mg/dl.
5. Tính tốn: Mg/dl -> mmol/l. Hệ số 0.0114 Mmol/l -> mg/dl. Hệ số: 87.5 SAcùamẫu Nồng độ TG = 200 x -777—X (mg/dl) ỊAmẫucnn Lúc này 200 chính là nồng độ dung dịch TG chuẩn
6. Gía trị kỳ vọng:
Người lớn dưới 65 tuổi: < 200mg/dl (< 2.3 mmol/l) Người lớn trên 65 tuổi: < 365mg/dl (<3.7 mmol/l) 7. Biện luận:
Ý nghĩa lâm sàng
Rối loạn trao đổi lipid Cholesterol
Triglycerol <200 mg/dl Khơng
Cholesterol 200-300 mg/dl Có, nếu HDL-Cholesterol < 35mg/dl
Cholesterol Triglycerides > 300 mg/dl > 200 mg/dl Có Riêng với TG: Nồng độ mg/dL Nồng độ mmol/L Gỉai thích
< 150 < 1.69 Bình thường, nguy cơ thấp
150 - 199 1.7 - 2.25 Cảnh báo
200 - 499 2.26 - 5.65 Cao
> 500 > 5.56 Rất cao
Các trường ảnh hưởng đến nồng độ của TG:
• Tăng nồng độ TG:
o Tăng nguyên phát: tăng lipid huyết gia đình
o Tăng thứ phát: ăn nhiều mỡ, xơ gan do rượu, đái tháo đường, viêm tuỵ, viêm gan,...
o Glycerid tăng kéo dài tiềm ẩn nguy cơ bệnh tim mạch và thường do lipase (thành mạch máu) o Sinh lý: thai kỳ
o Thuốc: Estrogen; tamoxifen; glucocorticoids; ức chế protease; ức chế beta không chọn lọc; propofol; isotretinoin; một số thuốc
chống loạn thần (clozapine, olanzapine); tacrolimus; sirolimus; cyclosporine; bexarotene; all-trans retinoic acid; L-asparaginase; interferon-a
II. Định lượng Cholesterol:Tổng qt: Tổng qt:
• Cholesterol là steroid chính trong cơ thể, là lipid khơng tan trong máu, đồng thời đóng vai trị quan trọng trong hoạt
động của tế bào sợi thần kinh, trong việc sản xuất một số hormone
• Cholesterol + protein = phức hợp lipoprotein
1. Chylomicron ở ruột theo bạch mạch và tĩnh mạch cửa 2. Sau đó là VLDL ở gan
3. Nhờ LPL phân cắt tạo IDL 4. Tiếp theo là LDL
Lìpoprotein
Phân đoạn lipĩd Phân đoạn
proỉein Apolíprotein
Cholesterol Triglycerid Phosphỡlìpiđ
Chylomicro
n 5% 90% 3% 2%
VLDL 15% 60% 15% 10%
LDL 45% 10% 20% 25%(98%ApoB)
HDL 17% 8% 25% 50%(67%Apo
Al>22% Apo A2)
Báng 1. Thành phần các lipoprotein
Trong đó, gồm 2 loại:
• LDL + ApoB -> vận chuyển Cholesterol từ gan đến tế bào ngoại biên: Cholesterol xấu
• HDL + ApoA -> vận chuyển Cholesterol dư từ ngoại biên về gan: Cholesterol tốt
Nguồn gốc:
• Nội sinh: tự tổng hợp từ nhiều cơ quan như mô mỡ, tuyến thượng thận và chủ yếu ở gan
Một phần vận chuyển tới tế bào ngoại biên nhờ lipoprotein như VDLD, IDL, LDL Một phần vận chuyển tới mật xuống ruột
D^ Gan là cơ quan duy nhất ester hố cholesterol
Phân bố:
• Tự do: 25 - 40%
• Este hố: 60 - 75%
Trị số bình thường < 200 mg/dl và ở VN là 185 ± 23 mg/dl -> Ước tính nguy cơ mắc bệnh tim mạch
1. Nguyên tắc:
-> Phương pháp enzyme so màu
Các loại enzyme chính Cholesterol oxidase, Cholesterol esterase, Peroxidase
Dung dịch màu cuối cùng: 4-(p-Benzoquinone-monoimino)-phenazone có màu đỏ Các phương trình cụ thể:
Cholesterolesters + H2O Cholesterol esterase Cholesterol + Axit béo ^ Tách Cholesterol ra khỏi Cholesterolesters
——
2 H2O2 + 4-aminoantipirine + Phenol Peroxidase 4-(p-Benzoquinone-monoimino)-phenazone + 4 H2O 2. Thuốc thử:
1 Dung dịch đệm phosphate (pH=6.5) 30 mmol/l
2 4-aminoantipyrine 0.25 mmol/l
3 Phenol 25 mmol/l
4 Peroxidase >5 KU/l
5 Cholesterolesterase > 150 U/l
6 Cholesteroloxydase > 100 U/l
7 Sodium azide (NaN3) < 0.01%
8 Dung dịch Cholesterol chuẩn 200mg/dl hoặc 5.17 mmol/l
3. Tiến hành:
Kỹ thuật Ống trắng Ống đo Ống chuẩn
Thuốc thử R 1000pl 1000pl 1000pl
Huyết thanh (EDTA/Heparin) 10pl
Dung dịch chuẩn 10pl
Các yếu tố khác:
• Bước sóng: 500nm, 546nm
• Nhiệt độ: 25°C hoặc 37°C
• Phép đo: so với ống trắng thuốc thử (RBL).
Yêu cầu 1 ống trắng thuốc thử cho mỗi thử nghiệm. Khi mở thuốc thử ra, tránh để bị nhiễm bẩn.
• -> Trộn và ủ trong 10 phút ở 25oC hoặc 5 phút ở 37oC. o độ hấp thụ của ống đo (Ađo) và ống chuẩn
(Achuẩn) so với ống trắng (ARBL)
ở bước sóng 500nm trong vịng 5 đến 60 phút
4. Khoảng tuyến tính:
Tuyến tính khi nồng độ Cholesterol đạt từ 4 - 750 mg/dl
-> Các mẫu có nồng độ cao hơn phải được pha loãng 1/2 với nước muối sinh lý (0,9%), đo lại, nhân kết quả với 3 5. Tính tốn:
Mg/dl -> mmol/l. Hệ số 0.026 Mmol/l -> mg/dl. Hệ số: 38.66 Với : ỗ A(S) = A(mẫu đo) — A(thuốc thử R)
ÔA(chuẩn) A(dd cholesterol) A(thuốc thử R)
Theo hệ số c(mg/dl) 546 nm 840 x ỖA(S) 500nm 553 x ỖA(S) Theo ống chuẩn: ■XTĂ ôAcủamẫuđo , Nồng độ Cholesterol = 200 x ' ■ ~a. (mg/dl) ° ịAmẫuchuan ~ '
6. Gía trị tham khảo:
Bình thường: < 220 mg/dl
Nguy cơ vừa: > 220 mg/dl hay 5,7 mmol/l Nguy cơ cao: > 260 mg/dl hay 6,7 mmol/l 7. Biện luận:
-> Đánh giá nguy cơ bệnh tim mạch
• < 200 mg/dl (<5,17 mmol/l) -> Ở người bình thường khơng có nguy cơ xơ vữa động mạch
• Từ 200-240 mg/dl (5,17 -6,2 mmol/l) -> Đây là giới hạn cao (nguy cơ vừa) cần chú ý đối với bệnh mạch vành
• 240 mg/dl (>6,2 mmol/l) -> Nguy cơ cao bị bệnh động mạch vành.
• Cholesterol máu giảm hiếm gặp, trong trường hợp cholesterol toàn phần thấp < 2,0 mmol/l là dấu hiệu của suy giảm chuyển hố tế
bào gan.
Yếu tố tăng giảm Cholesterol:
• Tăng nguyên phát: tăng cholesterol huyết gia đình
Khi nồng độ cao q 250 mg/dl thì có nguy cơ mắc bệnh mạch vành. (Khi tỉ số Cholesterol toàn phần so với HDL dưới 4 thì ít nguy cơ mắc bệnh mạch vành)
• Chế độ ăn: dùng nhiều chất béo no như thịt đỏ, ác loại sữa, kem, bơ, phomai, bánh ngọt, gan và các loại nội tạng động vật, các món
chiên rán như khoai tây chiên, gà rán hoặc các loại thực phẩm chế biến từ bơ ca cao,chocolate...
• Thói quen hút thuốc, lười vận động
• Ảnh hưởng của thuốc
• Do tuổi tác: phụ nữ sau tuổi mãn kinh sẽ tăng cao nồng độ Cholesterol
III. Định lượng LDL-C: Tổng qt Trị số bình thường: • LDL-C: < 130mg/dl • HDL-C: < 40mg/dl • Có nồng độ các thành phần khác nhau
• LDL tỉ lệ thuận với nguy cơ mắc bệnh mạch vành và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh
-> Chẩn đoán nguy cơ mắc bệnh tim mạch 1. Nguyên tắc:
-> Phương pháp enzyme so màu qua ly tâm Dung dịch gây kết tủa LDL-C: Natri citrate Phần nổi bao gồm: HDL, Chylomicron và VLDL 2. Thuốc thử:
Dung dịch đệm đơn:
Haparin 0.68 g/1 tương ứng với 100IU/1
Natri Citrate 0.064 mol/1
Chất ổn định 3. Tiến hành:
Dung dịch chuẩn lần này vẫn là Cholesterol 200mg/dl Các yếu tố khác:
Bước sóng: 500 nm, 546 nm
o Thuốc thử kết tủa LDL: 1000 p.1 o Huyết thanh: 100 ụ.1
•> Trộn đều và ủ trong 10 phút ở 18 độ C đến 22 độ C. Đem ly tâm trong 15 phút với tốc độ 4000 vòng trên phút. Xác định nồng
độ C của supernatant (phần nổi lên sau ly tâm) trong 1 giờ kể từ sau ly tâm
• Bước 2: Định lượng LDL-C:
o Thuốc thử C: 1000 ụl
o Supernatant: 100 ụl
•> Trộn đều và ủ trong 10 phút ở 25 độ C hoặc 5 phút ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng
A(RBL) 4. Tính tốn:
Với hệ số Factor:
Độ dài bước sóng c (mg/dl) c (mmol/l)
546 nm 840 x ƠA (S) 25.9 x ÔA (S)
500nm 553 x ỖA (S) 17.1 x ÔA (S)
ÔA của mẫu đo
Nồng độ LDL-C = 200 x (mg/dl)
ƠA mẫu chuẩn
-> Để tính HDL-C sau khi tìm được nồng độ LDL-C ta dùng cơng thức Friedewald: LDL-C = Tổng lượng Cholesterol - (HDL-C - ^5- h (mg/dl)
LDL-C = Tổng lượng Cholesterol - (HDL-C - yy ó (mmol/l).
-^ Khơng áp dụng công thức khi TG > 4.5 mmol/l (> 400 mg/dl)
5. Gía trị tham khảo:
Bình thường: thấp hơn 150 mg/dl
Nguy cơ vừa: hơn 150 mg/dl hoặc 3.9 mmol/l Nguy cơ cao: hơn 190 mg/dl hoặc 4.9 mmol/l 6. Biện luận:
LDL-C tỉ lệ thuận với tần số chết do bệnh mạch vành và nếu có các yếu tố nguy cơ thì LDL-C cần giảm xuống dưới 130 mg/dL Đối với HDL-C thì giá trị bình thường là trên 35 mg/dL và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh mạch vành
-> Lưu ý: khi đã có đủ các trị số của bệnh nhân sau đo lương nếu trị số của Cholesterol và TG bình thường nhưng ngược lại LDL-C lại cao hay HDL-C q thấp thì cần lưu ý vì đây có thể là dấu hiệu của bệnh xơ vữa động mạch
V. Định lượng HDL-C:1. Nguyên tắc: 1. Nguyên tắc:
-ỳ Phương pháp enzyme so màu qua ly tâm
Dung dịch gây kết tủa HDL-C: MgCb 2. Thuốc thử:
Dung dịch đệm đơn:
Phosphotungstic Acid 0.55 mmol/1
MgCb 25 mmol/1
Các yếu tố khác:
• Bước sóng: 546 nm
• Nhiệt độ giữ phần kết tủa ở 25 đến 37 độ c
Có 2 bước: Bước 1: Kết tủa:
-> Trộn đều, ủ trong 10 phút ở nhiệt độ phòng, trọn lại và đem ly tâm trong 5 phút ở 10000g (10 phút ở 4000 g). Sau khi ly tâm tách phần nổi lên từ phần kết tủa trong 1 giờ và xác định nồng độ Cholesterol.Bước 2: Định lượng LDL-C:
Bước 2: Xác định nồng độ:
Đo đối chiếu với ống trắng. Yêu cầu một ống trắng cho mỗi thử nghiệm Cholesterol: 1000 pl (Macro) và 500 pl (semi micro)
Supernatant: 100 pl (macro) và 50 pl (semi micro)
-> Trộn đều và ủ trong 10 phút ở 25 độ C hoặc 5 phút ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(RBL)
ỖA(S) = A(sample) - A(RBL) 3. Tính tốn:
Với factor:
Độ dài bước sóng c (mg/dl) c (mmol/l)
546 nm (Macro) 279 x ỖA(S) 7.21 x ỖA(S)
546 nm (Semi Micro) 325,1 x ỖA(S) 8.41 x ỖA(S)
Sau khi có được kết quả của nồng độ LDL-C sử dụng cơng thức Friedewald để tìm nồng độ của HDL-C: LDL-C = Tổng lượng Cholesterol - (HDL-C - ^5- à (mg/dl)
-^ Không áp dụng công thức khi TG > 4.5 mmol/l (> 400 mg/dl)
4. Gía trị tham khảo:
Tiên lượng thuận lợi Mức nguy cơ Nguy cơ cao
Nữ > 65 mg/dl 45-65 mg/dl < 45 mg/dl
Nam > 55 mg/dl 35-55 mg/dl < 55 mg/dl
5. Biện luận:
Đối với HDL-C thì giá trị bình thường là trên 35 mg/dL và HDL tỉ lệ nghịch với nguy cơ bệnh mạch vành Bởi vì HDL-C là loại protein tốt giúp chở cholesterol từ ngoại vi về trung tâm
Ví dụ: Bệnh nhân có: • Cholesterol 200mg/dl • TG 150mg/dl • LDL-C 180 mg/dl • HDL-C 30 mg/dl
Dù cho nồng độ Cholesterol và TG là bình thường Nhưng LDL-C > 100mg/dl
Chương III: Định lượng protid
I. Định lượng ure:Tổng qt: Tổng qt:
• Sản phẩm thối hố chủ yếu của protein và acid amin
• Tạo thành ở gan
• Định lượng nhằm chẩn đoán chức năng thận nhưng khơng đặc hiệu do cịn bị ảnh hưởng bởi các yếu tố ngoài thận -> thường chỉ
định kèm với định lượng creatinin
• Trị số bình thường là 0.2 - 0.5 g/l trong huyết thanh và BUN = 0.09 - 0.23 g/l
1. Nguyên tắc:
Ure + 2H2O Urease 2NH3 + CO2
^
a-Ketoglutarate + NH3 + NADH2 GLDH L-Glutamate + NAD++ H2O GLDH: Glutamate dehydrogenase
2. Thuốc thử:
Dung dịch đệm:
0.18 mmol/l
50mg/dL (8.35 mmol/l) 3. Chuẩn bị:
Chất nền bắt đầu: Mầu thử và thuốc thử Mẫu đo bắt đầu:
- Trộn 4 lần thể tích R1 và 1 lần thể tích R2
- Để yên thuốc thử trong ít nhất 30 phút ở 15 đến 25 độ C trước khi dùng - Bảo quản 4 tuần ở 2 đến 8 độ C, 5 ngày ở 15 đến 25 độ C
- Không tiếp xúc với ánh sáng -> Mầu:
Huyết thanh, huyết tương khơng có heparin, nước tiểu sạch. Pha loãng nước tiểu với tỉ lệ 1/100 với nước cất và nhân với 101
a-Ketoglutarate 15 mmol/l Urease > 1000 U/l GLDH > 5.4 kU/l Khởi động: NADH Dung dịch chuẩn:
Bảo quản:
• Huyết tương, huyết thanh:
- 7 ngày ở 20 đến 25 độ C hoặc 4 đến 8 độ C - 1 năm ở âm 20 độ C • Nước tiểu: - 2 ngày ở 20 đến 25 độ C - 7 ngày ở 4 đến 8 độ C - 1 tháng ở -20 độ C
4. Gía trị tham khảo và khoảng tuyến tính:
Với huyết thanh Urea-N
Tuổi Mg/dl Mmol/l Mg/dl Mmol/l
Trẻ em 1-3 11-36 1.8-6.0 5.14-16.8 1.8-6
4-13 15-36 2.5-6 7-16.8 2.5-6
14-19 18-45 2.9-7.5 8.4-21 2.9-7.5
Người
Ure niệu
g/24h Mmol/dL
10-35 170-580
Đối với khoảng tuyến tính thì nồng độ đo được cao nhất là 400mg/dl (66.7 mmol/l) ở nồng độ cao hơn cần pha loãng với nước muối sinh lý (0.9%) với tỉ lệ ^ và nhân kết quả với 3