Thành phần mẫu thử - Định lượng Creatinin:- 123docz.net

II. Định lượng Creatinin:

4.Thành phần mẫu thử

Huyết thanh, huyết tương

Dung dịch chuẩn 2 mg/dl (176.8 ựmol /lL

3. Gíá trị kỳ vọng:

Sử dụng huyết thanh huyết tương

Nước tiểu (trong 24 giờ)

Mg/dl pmol/l Sơ sinh < 1.2 < 106 Trẻ em 2 đến 12 tháng < 0.9 < 80 Lớn hơn 1 tuổi < 1.0 < 88 Người lớn Nữ 0.6 - 1.2 53 -106 Nam 0.6 - 1.4 53 -120

Nước tiểu được pha loãng bằng saline với tỉ lệ 1/49 5. Độ tuyến tính:

20 mg/dl hoặc 1768 pmol /1

Trong trường hợp vượt quá 20 mg/dl creatinine trong huyết tương hoặc nước tiểu đã pha loãng theo tỉ lệ 1/49 và tiếp tục pha loãng với tỉ lệ 1/5 với dung dịch NaCl 0.9% và đem kết quả nhân với 6

Phạm vi định lượng là 0.19 đến 20 mg/dl 6. Chuyển đổi đơn vị:

Mg/dl -> mmol/l. Hệ số 88.4 Mmol/l -> mg/dl. Hệ số: 0.0113 7. Quy trình thử nghiệm: - Bước sóng: 492 hoặc 500nm - Nhiệt độ 25 độ C hoặc 37 độ C

- Pha thuốc thử 1 và 2 theo tỉ lệ 1/1 và đề yên trong 30 phút trước khi dùng - Có thể bảo quản 2 đến 8 độ C trong 28 ngày hoặc 18 đến 22 độ C trong 8 giờ

Ống chuẩn Huyết thanh Nước tiểu

Thuốc thử 1000 pl 1000 pl 1000 pl

Dung dịch chuẩn 150 pl

Dung dịch đo 150 pl 150 pl

-> Trộn đều và ủ trong 1 phút ở 25 độ C hoặc 30 giây ở 37 độ C. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S1) và ống đo A(STD1); đo lại sự hấp thụ ánh sáng của ống chuẩn A(S2) và ống đo A(STD2) sau đó 3 phút ở 25 độ C và 1 phút với 37 độ C

8. Tính tốn:

A( S 2)-A( S1)

Trongmáu = 2 x AÍSTD2)-A(STD1) (mg/dl)

, A(s 2)-A( S1)

Trong nước tiểu = 100 x AÍSTD 2)- A (STD1) 9. Biện luận:

• Sinh lý:

Theo giới tính:

mg/l huyết thanh pmol/l huyết thanh

Nữ 6.6 - 10.9 58 - 96

Nam<50 tuổi 8.4 - 12.5 74 - 110

Nam>50 tuổi 8.1 - 14.4 72 - 127 Theo tuổi:

mg/l huyết thanh pmol/l huyết thanh

Sơ sinh 5 - 12 44 - 106

Trẻ em(1-18 tuổi) 4 - 14 35 - 123 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Người lớn 6.6 - 14.4 58 - 127

Ngoài ra cịn có sự cịn phụ thuộc vào 1 số yếu tố:mang thai,sử dụng thuốc lợi niệu,tập thể dục mạnh,.... Bệnh lý:

Creatinin huyết tăng trong các bệnh lý suy thận:

Trước thận: Suy tim mất bù, mất nước, xuất huyết, hẹp động mạch thận.

Tại thận: Tổn thương cầu thận ( tăng huyết áp, đái tháo đường, viêm cầu thận, bệnh thận lupus hệ thống), tổn thương ống thận (viêm thận, bể thận cấp hay mạn, sỏi thận, đau tủy xương, tăng acid uric, nhiễm độc thận).

Sau thận: Sỏi thận, ung thư tiền liệt tuyến, các khối u bàng

Mức độ suy thận. Nồng độ creatinin máu

Đon vị (mg'dl) Đon vị (umol/1) Suy thận độ I (mức độ nhẹ) < 1.5 < 130 Suy thận độ n (mửc độ vừa) l.ỉ - 3.4 130-300 Suy thận độ nia (mức độ nặng) 3.5 - 6 300-500 Suy thận độ mb (múc độ nặng) 6 - 10 500-900

Suy thận độ IV (suy thận giai đoạn cuối)

Creatinin huyết giảm: suy nhược cơ thể, bệnh gan mạn tính, giảm khối lượng cơ (suy cơ, loạn dưỡng cơ bắp, tuổi già),dùng thuốc

chống động kinh,...

-> Độ thanh thải Creatinin:

C (ml/s) Tình trạng

>0.83 Suy thận có thể hồi phục

0.5-0.83 Suy thận cịn bù tốt

0.17-0.5 Suy thận nặng

<0.17 Phải loại bỏ thận/ghép thận

III. Định lượng GOT, GPT: C C

... -

U: Số mg creatinin trong mỗi dl nước tiểu trong vịng 24 giờ;

V: Thể tích nước tiểu thải ra mỗi phút (ml); -> Độ thanh thải để tiên lượng mức suy thận

P: Creatinin huyết thanh tính theo mg/dl. Độ thanh thải Creatinin

Nam < 40 tuổi: 107 - 139 ml/phút hoặc 1.78 - 2.32 ml/s Nữ < 40 tuổi: 87 - 107 ml/phút hoặc 1,45 - 1,78 ml/s Trẻ sơ sinh: 40 - 65 ml/phút

Tổng quan:

• Trị số bình thường là dưới 40UI/L

• GOT gặp nhiều ở cơ tim ^ định lượng để đánh giá mức tổn thương tim

• GPT gặp nhiều ở gan -> định lượng để đánh giá mức hư hại của gan

• GOT và GPT là các enzyme transaminase -> giúp chuyển nhóm amin trong các q trình đồng hố dị hố protein với các phản ứng

1. Nguyên tắc định lượng: Phản ứng đặc trưng:

• Với GOT: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

a-Ketoglutarate + L-Asparate GOT L-Glutamate + Oxaloacetate

• Với GPT:

a-Ketoglutarate + L-Alanin GG>T L-Glutamate + Pyruvate Phản ứng định lượng:

• Với GOT:

Oxaloteacetate + NADH + H+ MDH L-Malate + NAD+

• Với GPT:

Pyruvate + NADH + H+ LDH L-Lactate + NAD+

NADH bị oxi hoá thành NAD. Mức độ giảm của NADH ảnh hưởng trực tiếp tương ứng với sự hình thành của oxaloacetate và cả hoạt động của GOT, GPT

2. Thuóc thử:

Dung dịch đệm Đệm Tris pH 7.8 (30 độ C) L-Aspartate LDH MDH Khởi động NADH a-Ketoglutarate Với GPT: Dung dịch đệm Đệm Tris pH 7.8 (25 độ C) L-Alanin LDH

80 mmol/1 200 mmol/1 > 1.6 U/L >0.5 u/l 0.18 mmol/1 12 mmol/1 70 mmol/1 410 mmol/1 > 1.7 U/L >0.5 u/l

37oC U/L ụkat /l Nam >38 > 0.63 Nữ > 32 >0.53 • Với GPT: 37C U/L ụkat /l Khởi động NADH a-Ketoglutarate 0.3 mmol/l 18 mmol/l 3. Gía trị kỳ vọng: • Với GOT:

Huyết thanh, huyết tương với Heparin hoặc EDTA 5. Độ tuyến tính:

Với giá trị cao trên thang đo nên pha loãng nhiều lần với 20pl mẫu đo với 200pl dung dịch NaCl. Trong trường hợp này nhân với

hệ số là 11

Phạm vi định lượng là 5 đến 280 U/l 6. Chuyển đổi đơn vị:

U/l ^ ựkat/l. Hệ số 0.0167

pkat/ỉ ■> U/l. Hệ số: 60

7. Quy trình thử nghiệm:- Bước sóng: 334, 340, 365 nm- Bước sóng: 334, 340, 365 nm - Bước sóng: 334, 340, 365 nm - Nhiệt độ 37 độ C

-> Hỗn hợp phản ứng với huyết thanh: trộn thuốc thử 1 với 5 thể tích và thuốc thử 2 với 1 thể tích -> Nhiệt độ từ 2 đến 8 độ C trong 15 ngày và 18 đến 22 độ C trong 3 ngày

- Bắt đầu với huyết thanh 1000 pl (hỗn hợp phản ứng) và 100 pl (với mẫu đo)

- Bắt đầu với thuốc thử R2 1000 pl (thuốc thử 1), 100 pl (mẫu đo), 200 pl (thuốc thử 2)

-> Trộn đều và ủ trong 30 giây ở 25 độ C. Đo sự thay đổi của sự hấp thụ ánh sáng trong ít nhất 3 phút sẽ cho ra 3 khoảng SA bao gồm SA 1, SA 2, SA 3, SA 4

(8A 2-8A1)+(8A 3-8A2)+(8A 4-8A 3)

8A /phút =--------------—------3^——------------------

8. Tính tốn:

Hệ số với phản ứng bắt đầu bằng huyết thanh

334 nm 340 nm 365 nm F x 8A/phút (Ul) 1780 1746 3235 F x 8A/phút (ụkat/l) 29.67 29.11 53.93 Hệ số với phản ứng bắt đầu R2 334 nm 340 nm 365 nm F x 8A /phút (U/l) 2103 2063 3823 F x 8A /phút (ựkat /l) 35.06 34.39 63.73 9. Biện luận:

Trong bệnh nhồi máu cơ tim thì GPT tăng ít hơn, GOT tăng đến 20 lần (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

Chương 4: Hemoglobin và Acid nucleicI. Định lượng billirubin toàn phần: I. Định lượng billirubin tồn phần:

Tổng qt:

• Billirubin là sắc tố có màu vàng

• Billirubin tự do (Billirubin gián tiếp) là sản phẩm của q trình thối hố Hb (Hem)

• Sau đó Billurubin tự do kết hợp với acid glucuronic tạo Billirubin liên hợp ở gan và mất tính độc đồng thời tan được trong nước

• Billirubin tồn phần = Billirubin tự do (85%) + Billirubin liên hợp (15%)

• Billirubin tự do khuếch tán qua thành mạch và các tổ chức do có thể đi trực tiếp qua màng bán thấm gây vàng da

• Định lượng Billirubin tồn phần nhằm chẩn đốn chức năng gan, màt....

• Định lượng Billirubin trực tiếp nhằm xác định nguyên nhân của hiện tượng vàng da là trước, tại hay sau gan

1. Nguyên tắc:

Cần chất gia tốc như: DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine

Cho billirubin tác dụng với diazotized 2,4-dichloroaniline để tạo nên azobillirubin màu đỏ. Albumin bao lấy bilirubin sẽ giải phóng

Do đặc tính nhiều vịng thơm nên hợp chất nhạy với ánh sáng

-> Độ đậm nhạt dung dịch sẽ quyết định trực tiếp bởi nồng độ Billirubin 2. Nồng độ chỉ định:

HCl 33 mmol/l Chất tẩy rửa Thuốc thử B: NaNŨ2 1.5 mmol/l Thuốc thử C: Chất ổn định

Diazotized 2,4-dichloroaniline 0.8 mmol/l

HCl 17 mmol/l

Chất tẩy rửa

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2ođến +8oC. Thuốc thử A và C

có chứa Diazotized 2,4-dichloroaniline nên tránh ánh sáng 4. Mục đích sử dụng

Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Billirubon trong huyết thanh và huyết tương người

5. Lưu ý

Chỉ dùng cho các thí nghiệm chẩn đốn trong phịng thí nghiệm. Sử dụng các phương tiện bảo hộ trong khi dùng thuốc thử. Thuốc thử có chứa các chất gây kích thích. Khơng được ăn và tránh tiếp xúc với da và niêm mạc. Khi lỡ chạm phải rửa sạch vùng da đó với nước và can thiệp y tế khi chạm phải mắt, hít hay nuốt phải.

6. Giá trị kỳ vọng: Mg/dl ựmol /1 1 ngày tuổi <6 < 103 2 ngày tuổi < 7 < 120 3 -5 ngày tuổi < 12 < 205 Trẻ em và người lớn < 1 < 17 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu 8. Độ tuyến tính:

Nồng độ tuyến tính là 30 mg/dl hoặc 510 pmol/1. Trong trường hợp cao hơn cần pha loãng với nước cất ở tỉ lệ ^ và nhân kết quả với 3

9. Chuyển đổi đơn vị:Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1 Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1

10. Quy trình thử nghiệm:

-> Phương pháp đo điểm cuối hố học - Bước sóng: 546 nm (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

- Nhiệt độ 25 độ C

-> Trộn thuốc thử 1 với 2 ở tỉ lệ 1/1. Trước khi dùng điều chỉnh nhiệt độ phòng trước 15 phút và trong điều kiện tối; chuẩn bị ống trắng thứ 3 với thuốc thử 3

- Bảo quản thuốc thử đã mở ở 2 đến 8 độ C trong 21 ngày và 18 đến 22 độ C trong 7 ngày -> Thử nghiệm bình thường:

Ống trắng Ống đo

Thuốc thử R1+2 1000 ựl

Huyết thanh bệnh nhân 100 pl 100 pl

Thuốc thử 3 1000 Ịỉl

-> Thử nghiệm cho trẻ em:

Ống trắng Ống đo

Thuốc thử R1+2 1000 pl

-> Trộn đều và ủ trong ít nhất 10 phút trong điều kiện không ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(B)

SA (S) — A(sample) — A(B)

-> Tính tốn: Với hệ số:

11. Biện luận:Trị số bình thường:Trị số bình thường:Trị số bình thường:Trị số bình thường: Trị số bình thường:

Bi tồn phần từ 0.5 - 1 mg/dl

Bi trực tiếp không quá 30%: < 0.3 mg/dl Bi gián tiếp không quá 70%: < 0.7 mg/dl

Khi Bi vượt quá mức đến 2 - 2.5 mg/dl thì gây vàng da

-> Lượng Bi tăng cao so với mức bình thường là dấu hiệu cho thấy mắc các bệnh về gan cao hơn và lượng hồng cầu bị phá huỷ cao hơn. Đối với trẻ em, việc xác định nồng độ Billirubin sẽ giúp can thiệp kịp thời vào lượng Bi dư thừa để hạn chế khả năng tổn thương tế bào não.

Các bệnh lý gây tăng giảm lượng Bi:

Các trường hợp gây vàng da trước gan: vàng da sinh lý ở trẻ sơ sinh, truyền nhầm nhóm máu, thiếu men G6PD, sốt rét, bệnh

thiếu máu Biermer ... tăng bilirubin gián tiếp là chủ yếu

Thử nghiệm bình thường

Thử nghiệm cho trẻ

Mg/dl SA (S) x 12.5 SA (S) x 58

ựmol /1 SA (S) x 214 SA (S) x 992

• Các trường hợp gây vàng da tại gan và sau gan: viêm gan siêu vi, viêm và xơ gan do rượu, ung thư tụy tạng, bệnh Dubin-

Johnson, ung thư gan, tắc đường mật do giun,... tăng bilirubin trực tiếp là chính Một số lưu ý khác:

• Tập luyện thể lực q sức trước khi xét nghiệm sẽ làm cho nồng độ bilirubin tăng

• Khơng ăn trong một thời gian dài (nhịn ăn), điều này thường làm tăng nồng độ bilirubin gián tiếp

• Bệnh phẩm bị tán huyết (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

• Để mẫu bệnh phẩm tiếp xúc trực tiếp với ánh sáng mặt trời hay ánh sáng nhân tạo > 1 giờ sẽ làm giảm nồng độ bilirubin của bệnh

phẩm (mức độ giảm nồng độ bilirubin tồn phần có thể lên tới 50% mỗi giờ).

• Tiếp xúc trong vịng 24 giờ trước đó với thuốc cản quang sẽ làm thay đổi kết quả xét nghiệm.

• Mẫu huyết thanh đục có thể làm ảnh hưởng đến kết quả xét nghiệm.

• Ngồi ra một số thuốc có thể gây tăng hay giảm Bill

II. Định lượng Billirubin trực tiếp:Tổng quát: Tổng quát:

• Xác định căn nguyên là do tan máu hay do tạo hồng cẩu khơng hiệu quả

• Trong thăm dị các tắc mật (trong và ngồi gan): nồng độ bilirubin toàn tăng > 40 mg / dL chỉ dẫn tình trạng tắc nghẽn ở mức độ tế bào gan

• Đánh giá mức độ tăng thành phần bilirubun trực tiếp hay gián tiếp có thể gợi ý các chẩn đốn:

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 20 - 40% bilirubin toàn phần: gợi ý nhiều cho vàng da nguyên nhân tại gan hơn lànguyên

nhân sau gan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm 40 - 60% bilirubin toàn phần: gặp ở cả vàng da do nguyên nhân tại gan và saugan.

o Khi tăng bilirubin trực tiếp và chiếm >50% bilirubin toàn phần gợi ý nhiều cho vàng da do nguyên nhân sau gan

1. Nguyên tắc:

Cho Billurubin toàn phần tác dụng với DMSO (dimethyl sulfoxide) hoặc coffeine và diazotized sulfanic acid để hình thành azo màu đỏ. Bil trực tiếp (Slucuronized billirubin thuỷ phân) phản ứng trực tiếp không cần DMSO hay coffeine. Sự tăng độ hấp thụ của azo ở 546 nm bị tác động trực tiwwps bởi nồng độ bil trưc tiếp trong mẫu và đo bằng máy quang phổ

2. Nồng độ chỉ định:Thuốc thử A:Thuốc thử A:Thuốc thử A: Thuốc thử A:

Sulfanilic acid 29 mmol/l

HCl

Thuốc thử B:

3. Lưu trữ và bảo quản

Thuốc thử cịn ngun niêm phong sẽ có thể sử dụng đến hạn ghi trên nhãn nếu được bảo quản ở +2ođến +8oC. Thuốc thử A và C

có chứa Diazotized 2,4-dichloroaniline nên tránh ánh sáng 4. Mục đích sử dụng

Sử dụng trong phịng thí nghiệm định lượng Billirubon trong huyết thanh và huyết tương người 5. Lưu ý

6. Giá trị kỳ vọng:

Lên đến 5.1 ựmol/1(0.3 mg/dl) 7. Thành phần mẫu thử:

Huyết thanh sạch và không tán huyết hoặc huyết tương với heparin hoặc EDTA bảo quản trong phòng tối và làm thử nghiệm ngay khi lấy mẫu

8. Độ tuyến tính:

Nồng độ tuyến tính là 8 mg/dl hoặc 137 pmol/1. Trong trường hợp cao hơn cần pha lỗng với nước mi sinh lý (0.9%) ở tỉ lệ 1/5 và nhân kết quả với 6

9. Chuyển đổi đơn vị: Mg/dl -> pmol/l. Hệ số 17.1 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

pmol/l -> mg/dl. Hệ số: 0.0585

10. Quy trình thử nghiệm:

-> Phương pháp đo điểm cuối hố học - Bước sóng: 546 nm

- Nhiệt độ 25 độ C

Ống trắng Ống đo

Thuốc thử R1 1000 ịll 1000 ịll

Thuốc thử R2 20 ịil

Huyết thanh 100 ịll 100 ịil

-> Trộn đều và ủ trong điều kiện không ánh sáng. Đo sự hấp thụ ánh sáng của ống đo A(sample) so với ống trắng A(B) sau đúng 5