Bài giảng miễn dịch học thú y chương 5

(Veterinary Immunology ) CHƢƠNG V Kháng thể dịch thể đặc hiệu 1- Khái niệm  Kháng thể dịch thể đặc hiệu phân tử immunoglobulin (Ig), có chất glycoprotein  Kháng thể tế bào plasma (biệt hóa từ lympho B) tiết để hệ miễn dịch nhận biết vơ hiệu hóa tác nhân lạ (virus, vi khuẩn )  Mỗi kháng thể epitope kháng nguyên nhận diện  Trong huyết thanh, Ig chiếm khoảng 20% tổng lượng protein • Truyền thông tin KN sinh KT • San sinh KT từ B cell 2- Cấu trúc kháng thể dịch thể đặc hiệu  Kháng thể dịch thể đặc hiệu có nhiều lớp khác nhau: IgG, IgM, IgA, IgE, IgD  Mỗi phân tử Ig có chuỗi polypeptit gọi chuỗi nặng ký hiệu H (Heavy) chuỗi polypeptit gọi chuỗi nhẹ ký hiệu L (light) Riêng:  IgM có 10 chuỗi nhẹ 10 chuỗi nặng  IgA có chuỗi nhẹ chuỗi nặng  Trong phần tử Ig, chuỗi H L bào có đơi giống hoàn toàn CÁC LỚP GLOBULIN MIỄN DCH Sự khác biệt gia phân tử Ig chuỗi nặng Lớp IgG có chuỗi nặng gamma () Lớp IgM có chuỗi nặng Muy (à) Lớp IgA có chuỗi nặng Alpha () Lớp IgD có chuỗi nặng Delta () Lớp IgE có chuỗi nặng Epxilon () Ngi ta N/C sản xuất KT đơn dòng điều kiện nhân tạo  Đây đóng góp lớn cho MD học nghiên cứu, ứng dụng chẩn đoán trị liệu  Năm 1975, Milstein Kohler đưa phương pháp sản xuất kháng thể đơn dòng kỹ thuật lai (fusion) loại tế bào: - Tế bào Myeloma - Tế bào lympho B hoạt hoá KN chuột  Nguyên tắc phương pháp sản xuất KT đơn dòng: Dùng hai loại tế bào: • Tế bào u tuỷ (tế bào Myeloma) • Tế bào lympho B hoạt hố kháng nguyên chuột (lách, hạch)  Dùng kỹ thuật phịng thí nghiệm để lai (fusion) tế bào để tạo tế bào lai (hybridoma) có khả nuôi cấy môi trường nhân tạo, đặc biệt có khả tiết kháng thể đơn dịng đặc hiệu QUY TRÌNH SẢN XUẤT KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG Chuột BALb/c gây miễn dịch Tế bào lympho B Tế bào Myeloma Lai (fusion) tế bào Tế bào lai Hybridoma Nuôi cấy tế bào lai môi trường chọn lọc HAT Kháng thể đơn dòng  Nguyên lý  Trong môi trường nuôi cấy tế bào Myeloma có chứa Aminopterin (A) A ức chế q trình tổng hợp bazơ nitơ cần thiết cho chép phân tử ADN  Vì tế bào sống loại môi trường  Tuy nhiên ta bổ sung thêm Hypoxanthin (H) Thymidin (T) tế bào có enzyme HPRT (hypoxanthin phosphoribosyl transferase) sống chuyển hóa H T thành bazơ nitơ cần thiết cho chép phân tử ADN  NHƯNG, tế bào Myeloma KHƠNG có khả tự tổng hợp enzyme HPRT nên khơng chuyển hóa H T thành bazơ nitơ  KHƠNG ni cấy mơi trường ni cấy có bổ sung chất HAT (Hypoxanthin Aminopterin - Thymidin)  Tế bào lympho B tiết kháng thể có khả tự tổng hợp enzyme HPRT  có khả phát triển trường ni cấy có bổ sung chất HAT, NHƯNG tế bào không NHÂN lên vi tế bào tận biệt hố  Tế bào lai Hybridoma có có enzyme HPRT nên phát triển mơi trường ni cấy có bổ sung chất HAT, có khả tiết KTĐD QUY TRÌNH SẢN XUẤT KHÁNG THỂ ĐƠN DỊNG Chuột BALb/c gây miễn dịch Tế bào lympho B Tế bào Myeloma Lai (fusion) tế bào Tế bào lai Hybridoma Nuôi cấy tế bào lai môi trường chọn lọc HAT Kháng thể đơn dòng  Để tạo tế bào lai hybridoma, Polyethylenglycol (PEG) dùng để dung hợp hai tế bào lympho B/Myeloma  PEG làm thay đổi màng tế bào để tế bào kết hợp với  Sau ni hỗn hợp tế bào lai mơi trường có HAT  Có trƣờng hợp xảy ra: Tế bào Myeloma Tế bào lympho B Tế bào lai Hybridoma Sản xuất kháng thể đơn dòng xoang phúc mạc chuột Môi trƣờng nuôi cấy tế bào  Ƣu điểm phƣơng pháp SX kháng thể đơn dịng • Khơng cần lượng lớn ĐV SX nhiều KT invitro • KT tinh khiết, tính đặc hiệu cao • Khi gây miễn dịch để tạo lympho B hoạt hố khơng cần KN thật tinh khiết • Phương pháp SX kháng thể đơn dịng cho phép phát nhiều KN chưa biết bề mặt tế bào • Sử dụng KT đơn dịng chẩn đốn làm giảm tượng dương tính giả Tương lai việc lai tế bào Myeloma + tế bào lympho B hoạt hố KN người tiến hành, SX KT đơn dịng người Thuận lợi cho việc dùng KTĐD đăc hiệu điều trị, chẩn đoán bệnh ... ứng miễn dịch gọi đáp ứng miễn dịch sơ cấp hay miễn dịch tiên phát  KN vào thể lần hai, đáp ứng miễn dịch gọi đáp ứng miễn dịch thứ cấp hay miễn dịch thứ phát Đƣờng biểu diễn hình thành kháng... xuất KT sớm  Sự khác biệt đáp ứng miễn dịch sơ cấp thứ cấp vai trò tế bào nhớ miễn dịch: lympho T "nhớ", lympho B "nhớ"  Ở miễn dịch thứ phát tế bào "nhớ" miễn dịch phát triển nhanh mạnh tạo lớp... hiệu vi KT xuất sớm hơn, cường độ đáp ứng miễn dịch dài hơn, mạnh  Đ? ?y sở khoa học cho việc tiêm phòng vacxin nhắc lại, tạo miễn dịch cao cho thể 6 Các y? ??u tố ảnh hƣởng đến hinh thành kháng thể