KT đơn clon khụng cú trong điều kiện tự nhiờn.

- hoặc gõy tờ liệt miễn dịch, cú thể dung nạp miễn dịch, khỏng thể khụng được sản xuất ra.

KT đơn clon khụng cú trong điều kiện tự nhiờn.

 Người ta đó N/C và sản xuất được KT đơn dũng trong điều kiện nhõn tạo

 Đõy là một đúng gúp lớn cho MD học về nghiờn cứu, ứng dụng trong chẩn đoỏn và trị liệu.

 Năm 1975, Milstein và Kohler đưa ra phương phỏp sản xuất khỏng thể đơn dũng bằng kỹ thuật lai (fusion) 2 loại tế bào:

- Tế bào Myeloma

 Nguyờn tắc của phương phỏp sản xuất KT đơn dũng:

Dựng hai loại tế bào:

• Tế bào u tuỷ (tế bào Myeloma)

• Tế bào lympho B đó hoạt hoỏ bởi khỏng nguyờn của chuột (lỏch, hạch)

 Dựng kỹ thuật trong phũng thớ nghiệm để lai (fusion) giữa 2 tế bào trờn để tạo tế bào lai (hybridoma) cú khả năng nuụi cấy trong mụi trường nhõn tạo, và đặc biệt là cú khả năng tiết khỏng thể đơn dũng đặc hiệu.

QUY TRèNH SẢN XUẤT KHÁNG THỂ ĐƠN DềNG

Chuột BALb/c được gõy miễn dịch

Tế bào Myeloma Tế bào lympho B

Tế bào lai Hybridoma

Lai (fusion) 2 tế bào

Khỏng thể đơn dũng Nuụi cấy tế bào lai trong

 Nguyờn lý

 Trong mụi trường nuụi cấy tế bào Myeloma cú chứa Aminopterin (A) thỡ A sẽ ức chế quỏ trỡnh tổng hợp cỏc bazơ nitơ cần thiết cho sự sao chộp của phõn tử ADN 

Vỡ vậy tế bào sẽ khụng thể sống được trong loại mụi trường này.

 Tuy nhiờn nếu ta bổ sung thờm Hypoxanthin (H) và Thymidin (T) thỡ cỏc tế bào cú enzyme HPRT (hypoxanthin phosphoribosyl transferase) vẫn sống được do chuyển húa H và T thành cỏc bazơ nitơ cần thiết cho sự sao chộp của phõn tử ADN.

 NHƯNG, tế bào Myeloma KHễNG cú khả năng tự tổng hợp enzyme HPRT nờn khụng chuyển húa H và T thành cỏc bazơ nitơ  KHễNG nuụi cấy được trờn mụi trường nuụi cấy cú bổ sung chất HAT (Hypoxanthin - Aminopterin - Thymidin)

 Tế bào lympho B tiết khỏng thể cú khả năng tự tổng hợp enzyme HPRT  cú khả năng phỏt triển trong trường nuụi cấy cú bổ sung chất HAT, NHƯNG tế bào khụng NHÂN lờn được vi nú là tế bào tận cựng của sự biệt hoỏ.

 Tế bào lai Hybridoma cú cú enzyme HPRT nờn phỏt triển được trong mụi trường nuụi cấy cú bổ sung chất HAT, cú khả năng tiết KTĐD.

QUY TRèNH SẢN XUẤT KHÁNG THỂ ĐƠN DềNG

Chuột BALb/c được gõy miễn dịch

Tế bào Myeloma Tế bào lympho B

Tế bào lai Hybridoma

Lai (fusion) 2 tế bào

Khỏng thể đơn dũng Nuụi cấy tế bào lai trong

 Để tạo tế bào lai hybridoma, Polyethylenglycol (PEG) được dựng để dung hợp hai tế bào lympho B/Myeloma

 PEG làm thay đổi màng tế bào để 2 tế bào kết hợp với nhau

 Sau đú nuụi hỗn hợp tế bào lai trong mụi trường cú HAT.