GIẢI PHÁP DI TRUYỀN CHO HỖ TRỢ SINH SẢN PGT-A & PGT-M. GS.TS Nguyễn Đình Tảo

GIẢI PHÁP DI TRUYỀN CHO HỖ TRỢ SINH SẢN PGT-A & PGT-M GS.TS Nguyễn Đình Tảo Chủ tịch Hội hỗ trợ sinh sản Hà Nội GĐ TT Hỗ trợ sinh sản BV Đa khoa 16A NỘI DUNG  Thụ tinh ống nghiệm  Ứng dụng PGT-A: Sàng lọc di truyền trước chuyển phơi  Ứng dụng PGT-M: Chẩn đốn di truyền trước chuyển phôi IVF THƢỜNG QUY THÁCH THỨC: ĐA THAI TỈ LỆ ĐẬU THAI PGT - A (PGS) Là xét nghiệm sàng lọc xác định bất thƣờng số lƣợng NST bất thƣờng cấu trúc lớn (mất đoạn, thêm đoạn) Mục đích:  Giúp chọn lựa phơi có chất lƣợng, khỏe mạnh chuyển vào tử cung mẹ q trình IVF Chuyển phơi thành công Sảy thai sau làm IVF PGT – A Chọn lựa phôi bào  Xác định bất thƣờng Không mang bất thƣờng số lƣợng NST, thể khảm cho q trình chuyển phơi QUY TRÌNH PHÂN TÍCH MẪU Sử dụng quy trình theo kit VeriSeq PGS - Illumina Khuếch đại ADN Tạo thư viện gắn Index cho mẫu Đọc trình tự đoạn ADN máy MiSeq Phân tích kết Khuếch ADN từ tế bào ( Ngày 3) nhiều tế bào ( Ngày 5) kít SurePlex – WGA Các mẫu ADN cắt nhỏ gắn Index để phân biệt mẫu (24 mẫu) Có thể đọc tới 24 mẫu lần chạy Mỗi đoạn ADN đọc hàng nghìn lần Kết trình tự đọc từ máy Miseq đưa phần mềm BlueFuse để phân tích • Tổng 4.5 • Tổng 4.5 • Tổng - 5.5 • Tổng 10 phút * Thơng tin từ Trung tâm xét nghiệm di truyền GENTIS SỬ DỤNG PGT-A  PGT-A phù hợp với đại đa số trường hợp IVF  Tất phụ nữ có nguy tạo phôi bất thường nhiễm sắc thể: Khi phụ nữ có tuổi, khả phơi bất thường nhiễm sắc thể tăng  PGT-A giúp TĂNG hội mang thai thành công PGT-A – PHÁT HIỆN BẤT THƢỜNG NST Bất thường lệch bội phôi ngày Phát khảm lệch bội phôi ngày PGT - A (PGS)  PGT - A (PGS) đƣợc chứng minh giúp tăng tỷ lệ làm tổ thành công, giảm tỷ lệ sảy thai tăng tỉ lệ trẻ đƣợc sinh bình thƣờng 50% IVF có làm PGS 60% 50% 37.9% 40% 13.6% 35 -37 38 - 40 17.2% 13.0% 16.8% 10% 11.2% 20% 16.3% 25.0% 30% TỶ LỆ TRẺ SINH RA IVF không làm PGS PGS tăng tỷ lệ trẻ sinh sống 58.8% 60% 12.0% TỶ LỆ SẢY THAI PGS giảm tỷ lệ sảy thai 40% 30% 20% 10% < 35 41- 42 > 42 < 35 TUỔI MẸ  PGT - A (PGS) cho phép chuyển phơi xác hơn, giảm tỉ lệ đa thai 35 -37 38 - 40 41- 42 >42 TUỔI MẸ SỐ LƢỢNG MẪU (SỐ LẦN CHUYỂN PHÔI) Tuổi mẹ < 35 35 -37 38 - 40 41- 42 > 42 IVF không làm PGS 29.989 13.144 10.497 4.678 3.009 IVF có làm PGS 5.326 3.366 2.941 973 243 - SART.Org data (2015) - TỈ LỆ BÌNH THƢỜNG, BẤT THƢỜNG THEO ĐỘ TUỔI*  Tất bệnh nhân IVF có nguy tạo phơi mang bất thường NST  Khi tuổi mẹ cao, tỷ lệ phôi mang bất thường NST tăng 0.582949 0.359081 0.2 0.417051 0.45777 0.4 0.54223 0.6 0.640919 0.8 Tỷ lệ bình thường Tỷ lệ bất thường < 35 tuổi (N=2368) 35 - 40 tuổi (N=2604) * Dữ liệu từ GENTIS (2017-2018) >41 tuổi (N=1437) PGT - M (PGD) Là xét nghiệm phát đột biến di truyền gây bệnh phôi đƣợc di truyền từ bố mẹ bố mẹ Mục đích:  Giúp chọn lựa phôi không mắc bệnh di truyền cho trình chuyển phơi QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM PGT-M Mẹ IVF Bố Mẫu tham chiếu Xét nghiệm PGT-M Xác định đột biến gây bệnh Bước 1: Phát đột biến bố, mẹ, (nếu có) Bước 2: Thực chẩn đốn gen bệnh phơi Phơi khơng mang bệnh Đặc điểm xét nghiệm PGT - M • Lượng DNA ban đầu nhỏ (một vài tế bào phôi)  Địi hỏi q trình khuếch đại tồn hệ gen (Whole genome amplification – WGA) • Sản phẩm WGA có giới hạn: - Kích thước ngắn (dưới 2kb) - Hiện tượng allen-drop out cao => đưa kết luận sai  Không thể sử dung kỹ thuật phương pháp thông thường mẫu gDNA  Cần mẫu tham chiếu để loại trừ khả kết luận sai allen-dropout Các cách tiếp cận cho PGT - M STT Kỹ thuật Ưu điểm Sử dụng STR - Karyomapping - Sử dụng SNP - - Nhược điểm Dễ tối ưu quy trình, độ đa hình cao Kết hợp với xét nghiệm PGT-A Chi phí thấp - Phụ thuộc vào độ phân bố STR hệ gen - Khả xảy đột biến cao - Stutter - Cần tối ưu panel riêng cho bệnh - Bị ảnh hưởng bới allen drop-out Sử dụng chung cho nhiều bệnh Lượng SNP sử dụng lớn nên bị ảnh hưởng allen drop-out - Dễ tối ưu quy trình, độ đa hình cao Kết hợp với xét nghiệm PGT-A SNP phân bố đồng phổ biến hệ gen nên dễ chọn lựa sử dụng Chi phí thấp - - - Không kết hợp với xét nghiệm PGT-A Chi phí cao Cần tối ưu panel riêng cho bệnh Bị ảnh hưởng lớn allen dropout Kết hợp xét nghiệm PGT - A PGT - M Là xét nghiệm kết hợp PGT - A /PGT - M phát phôi không mang đột biến di truyền gây bệnh (di truyền từ bố mẹ bố mẹ) không mang bất thƣờng lệch bội nhiễm sắc thể Kết hợp xét nghiệm PGT - A (PGS) PGT - M (PGD) Bố Mẹ IVF Xét nghiệm PGT-A Xét nghiệm PGT-M Xét nghiệm Xét nghiệm Phôi mang bất thường Phôi không mang bất thường Phôi không mắc bệnh Phôi chuyển Phôi mắc bệnh Một số xét nghiệm PGT-M phổ biến Alpha-thalassemia • Đột biến gây bệnh alpha-thalassemia bao gồm đột biến đoạn đột biến điểm • Phương pháp: GAP-PCR/giải trình tự Sanger kết hợp phân tích di truyền liên kết sử dụng STR => Xác định đột biến đích đồng thời phát allele drop-out Một số xét nghiệm PGT-M phổ biến Beta-thalassemia • • Đột biến gât bệnh betathalassemia chủ yếu đột biến điểm Phương pháp: Giải trình tự vùng mã hóa gen HBB kết hợp phân tích di truyền liên kết sử dụng SNP => Xác định đột biến đích đồng thời phát allele drop-out Một số xét nghiệm PGT-M phổ biến Máu khó đơng (Hemophilia) • Máu khó đơng bệnh liên kết với NST giới tính X đột biến gây bệnh chủ yếu đột biến gen F8 gen F9 nằm NST X => Kích thước gen đích lớn, sơ lượng đột biến gây bệnh lớn => Phương pháp: phân tích di truyền liên kết sử dụng SNP NÂNG CAO CHẤT LƯỢNG PHÔI CHUYỂN VÀ SINH RA NHỮNG EM BÉ KHỎE MẠNH XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN!