BÀI 1: PHA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY BÀI 2: CẤY BÀI 3: PHA DUNG DỊCH DINH DƯỠNG HOAGLAND BÀI 4: ƯƠM HẠT VỚI DUNG DỊCH HOAGLANDBÀI 1: PHA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY BÀI 2: CẤY BÀI 3: PHA DUNG DỊCH DINH DƯỠNG HOAGLAND BÀI 4: ƯƠM HẠT VỚI DUNG DỊCH HOAGLAND
KỸ THUẬT BẢO QUẢN HOA MỤC LỤC BÀI 1: PHA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY 1 Dụng cụ: Chuẩn bị túi môi trường: Chuẩn bị hoá chất: Pha môi trường: Kết nhận xét: BÀI 2: CẤY Chuẩn bị hạt: Tiền hành cấy: Kết nhận xét: BÀI 3: PHA DUNG DỊCH DINH DƯỠNG HOAGLAND 11 Dụng cụ: 11 Hoá chất: 11 Tiến hành: 11 Kết nhận xét: 11 BÀI 4: ƯƠM HẠT VỚI DUNG DỊCH HOAGLAND 13 BÀI 1: PHA MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Dụng cụ: - Cân điện tử - Nồi - Túi nilon - Máy khuấy từ - Pipet - Cốc đong, ống đong - Nồi hấp - Bình thuỷ tinh Cân điện tử Pipet Máy khuấy từ Nồi hấp Chuẩn bị túi mơi trường: Kích thước: 20x15 (cm) Tiến hành: gấp túi, chồng lại với chuẩn bị hấp Hấp 30p 121oC Chuẩn bị hoá chất: * Thành phần Đa lượng: Thành phần Khối lượng lít Khối lượng 5lit NH4NO3 1650 mg 8250 mg KNO3 1900 mg 9500 mg KH2PO4 170 mg 850 mg MgSO4.7H2O 370 mg 1850 mg 440 mg 2200 mg Thành phần Khối lượng lít Khối lượng 5lit MnSO4.4H2O 22.3 mg 111.5 mg H3BO3 6.2 mg 32.7 mg ZnSO4.7H2O 8.6 mg 43 mg KI 0.83 mg/1 ml 4.15 mg Na2MoO4.2H2O 0.25 mg/1 ml 1.25 mg CoCl2.6H 0.2525 mg/1 ml 0.12625 mg CaCl2.2H2O *Thành phần Vi lượng: *Vitamin: Thành phần Khối lượng lít Khối lượng 5lit Meso-inosito 100 mg 500 mg Pirydoxine HCl (B6) 0.5 mg 2.5 mg Nicotinic acid(P.P) 0.5 mg 2.5 mg Thiamin –HCl(B1) 0.1 mg 0.5 mg Glycine mg 10 mg BA 0.5 mg 2.5 mg Thành phần Khối lượng lít Khối lượng 5lit Na2EDTA 0,18625 g 186.25 mg FeSO4.7H2O 0,13925 g 139.25 mg *NaFe- EDTA - Đường: 30 g/l = 150 g/5l - Agar : 8.5 g/l = 42.5 g/5l Pha môi trường: - Cân hoá chất - Pha stock đa lương Stock vi lượng stock vitamin NaFe – EDTA Đường Agar - Sử dụng máy khuấy từ khuấy tan chất - Dùng nước cất ống đong lít định mức thành lít - Kiểm tra pH mơi trường nằm khoảng 5.8-6 - Rót mơi trường sau pha vào bình thuỷ tinh, đậy kỹ miệng bình - Cho vào nồi hấp tiến hành hấp với thời gian 30phút nhiệt độ 121oC - Chuẩn bị bình nước cất hấp với mơi trường - Sau hấp xong chuyển tủ cấy mà để tiến hành rót mơi trường vào túi đựng mối trường hấp Cân hóa chất * Tiến hành rót mơi trường Pha môi trường - Mặc áo blue trước vào phòng cấy - Khởi động tủ cấy lau tủ cấy dung dịch khử trùng - Di chuyển môi trường, nước cất túi đựng môi trường sau hấp xong vào tủ cấy để tiến hành rót - Khử trùng tay trước thực việc rót mơi trường Rót mơi trường Ghim túi sau rót Kết nhận xét: - Trong trình cân hóa chất cần ý đảm bảo lượng hóa chất tránh việc cân nhầm hóa chất - Túi môi trường gấp phải đảm bảo nếp gấp tránh không bị bung đổ môi trường - Khi hấp môi trường, nước cất túi dựng môi trường phải đảm bảo môi trường nước cất đậy kín miệng bình, thời gian hấp nhiệt độ hấp đảm bảo 121oC 30 phút - Trước tiến hành rót mơi trường tủ cấy phải khỏi động tủ vệ sinh tủ dung dịch khử trùng để đảm bảo vơ trùng q trình rót môi trường tránh gây nhiểm khuẩn cho môi trường - Mơi trường sau kho rót vào túi phải ghim lại đánh dấu - Trong q trình rót tránh việc chạm tay vào bên túi để tránh gây nhiễm khuẩn cho môi trường Môi trường sau hấp Nước cất BÀI 2: CẤY Chuẩn bị hạt: Giống: Đậu nành, đậu đen, chè: Tiền hành: - Chọn hạt có chất lượng tốt Ngâm hạt nước Javen 10p rửa nước Ngâm hạt nước cất tiệt trùng chuyển vào tủ cấy Chọn hạt Ngâm hạt Javen Tiền hành cấy: * Cách thực hiện: - Mặc áo blue trước vào phòng cấy - Khởi động tủ cấy lau tủ cấy dung dịch khử trùng - Chuẩn bị dụng cụ cấy (kẹp, dao, đĩa, thùng chứa ), khử trùng dụng cụ cấy trước cấy - Khử trùng tay trước cấy - Bắt đầu tiền hành cấy theo hướng dẫn GV - Nghi rõ ngày tháng cấy giống Lắp dao cấy Khử trùng dụng cụ cấy Xử lý lại hạt giống trước tiến hành cấy Quá trình cấy giống vào môi trường Kết nhận xét: * Nhận xét: - Chú ý khử trùng thật kỉ trước tiến hành cấy - Trong trình cấy cần khử trùng lại dụng cụng cấy để đảm bảo tránh gây nhiểm khuẩn - Hạt giống phải xử lý tốt trước cấy nhằm loại bỏ nấm, mốc gây nhiểm bệnh q trình cấy - Các thao tác cần phải có độ xác cao, tránh tiếp xúc trực tiếp với vật dụng khử trùng, miệng túi, - Trong q trình cấy khơng cho tay hay dụng cụ cấy khỏi tủ cấy, có cần phải khử trùng lại trước đưa vào tủ cấy - Các túi môi trường trước đưa vào tủ cấy phải khử trùng cẩn thận - Sau cấy xong túi môi trường cần đánh dấu sau mang tới phịng nuôi cấy theo dõi * Kết quả: Sau cấy ni phịng ni cấy tuần tỉ lệ phát triển 70% tất hạt chè sau cấy khơng phát triển chiếm 20% cịn lại 10% hạt đậu nành đậu đen bị nhiễm bệnh không phát triển Một số lý dẫn đến hạt không nảy mầm nhiễm bệnh do: - Chất lượng hạt khơng tốt - Hóa chất khơng xác, đinh dưỡng môi trường không dẫn đến phát triển khơng - Thao tác q trình cấy khơng đảm vô trùng gây nhiễm trùng đến môi trường hạt Mầm phát triển tốt (5cm) Mầm phát triển yếu (1cm) Mầm phát triển chậm (3cm) Mầm bị nhiễm khuẩn 10 BÀI 3: PHA DUNG DỊCH DINH DƯỠNG HOAGLAND Dụng cụ: - Cân - Pipe - Máy khuấy từ - Cốc đơng - Bình định mức Hố chất: Bình Hoá chất 2M KNO3 1M KH2PO4 2M Ca(NO3)2.4H2O 2M MgSO4.7H2O 1M NH4NO3 Iron (Sprint 138 iron chelate) H3BO3 MnCl2.4H2O ZnSO4.7H2O CuSO4.5H2O H2MoO4.H2O Na2MoO4.2H2O dd gốc (g/l) 202 136 472 493 80 (mg/l) Trong 50lit 505 136 1180 493 80 25250 6800 59000 24650 4000 15 22.5 1125 2.86 1.81 0.22 0.051 0.09 0.12 2.86 1.81 0.22 0.051 0.09 0.12 143 90.5 11 2.55 4.5 Tiến hành: - Hoá chất pha cho bình sau định mức lên bình 500ml sau dán nhãn cho bình - Lấy bình 10ml sau định mức lên 1lit thu dd dinh dưỡng Hoagland tưới cho Kết nhận xét: - Sau pha thu bình chứa dung dịch dùng cho 50lit nước - Cần ý q trình pha hóa chất tránh nhầm lẫn bình với - Kiểm tra pH sau pha đạt từ 6.5-7 11 Dung dịch pha xong mãng phòng đèn led để lưu trữ 12 BÀI 4: ƯƠM HẠT VỚI DUNG DỊCH HOAGLAND - Chọn hạt đậu nành đậu đen có chất lượng tốt mang xử lý nước Javen - Ngâm nước Javen 10p sau rửa nước máy - Chuẩn bị đất: sử dụng đất tơi xốp lấy trời A11 - Sử dụng hộp nhựa đục lổ đáy, cho đất chuẩn bị vào tiến hành gieo hạt - Mỗi hộp 10 hạt (5 đậu đen đậu nành) - hộp cho nghiệm thức a) Theo dõi điều kiện tự nhiên: sử dụng dd Hoagland, đối chứng Có chứa dd Hoagland Khơng chứa dd Hoagland Theo dõi điều kiện bình thường 13 b) Theo dõi phịng ni cấy có đèn led: sử dụng dd Hoagland, đối chứng Có chứa dd Hoagland Khơng chứa dd Hoagland Theo dõi mơi trường có đèn led chiếu sáng 14 * Kết nhận xét: Sau tuần Đối với nghiệm thức điều kiện tự nhiên Hộp có chứa dd Hoagland hạt bắt đầu nảy mầm, số hạt bị nhiễm khuẩn không nảy mầm Hộp không chứa dd Hoagland hạt bắt đầu nhú mầm 15 Đối với nghiệm thức chiếu sáng đèn led Hộp không chứa dung dịch Hoagland hạt có tượng nảy mầm Hộp có chứa dung dịch Hoagland hạt bắt đầu nảy mầm, mầm nhú khỏi vỏ hạt Nhận xét: - Sau tuần tỉ lệ nảy mầm hạt hai điều kiện thấp khoảng 20% - Sau tuần điều kiện hộp sử dụng dinh dưỡng Hoagland phát triển tốt Hộp khơng có dung dịch hoagland có bắt đầu nảy mầm 16 - Sau tuần điều kiện chiếu sáng đèn led hộp sử dụng dinh dưỡng Hoagland phát triển tốt Hộp khơng có dung dịch hoagland bắt đầu nảy mầm - Một số lý khiến tỉ lệ nảy mầm thấp là: + Quá trình xử lý hạt khơng tốt + Hạt để q lâu nên chất lượng nảy mầm + Quá trình gieo hạt sau làm giảm khả nảy mầm hạt 17 ... dụng dd Hoagland, đối chứng Có chứa dd Hoagland Không chứa dd Hoagland Theo dõi điều kiện bình thường 13 b) Theo dõi phịng ni cấy có đèn led: sử dụng dd Hoagland, đối chứng Có chứa dd Hoagland... dưỡng Hoagland phát triển tốt Hộp dung dịch hoagland có bắt đầu nảy mầm 16 - Sau tuần điều kiện chiếu sáng đèn led hộp sử dụng dinh dưỡng Hoagland phát triển tốt Hộp khơng có dung dịch hoagland... mầm Hộp không chứa dd Hoagland hạt bắt đầu nhú mầm 15 Đối với nghiệm thức chiếu sáng đèn led Hộp khơng chứa dung dịch Hoagland hạt có tượng nảy mầm Hộp có chứa dung dịch Hoagland hạt bắt đầu