1.2.1.1. IgA
1.2.1.2. IgG
1.2.1.3. IgM
+ ELISA trực tiếp (direct ELISA): Phương pháp này thường sử dụng trong ELISA định tính, ít dùng trong định lượng. Phương pháp này có ưu điểm là chỉ cần một lần ủ do đó tiết kiệm thời gian và tối thiểu được việc kiểm soát các điều kiện trong quá trình thực hiện (thay đổi nhiệt độ và buffer cho mỗi lần ủ, tính thời gian…). Tuy nhiên, nhược điểm của nó là nhuộm màu nền (background staining) cao do sự liên kết không đặc hiệu của kháng thể với bề mặt rắn và các protein cố định trên bề mặt rắn. Việc đánh dấu từng loại kháng thể sử dụng cho mỗi kháng nguyên cũng khá tốn kém, nhất là khi phải chẩn đoán một số lượng lớn các loại kháng nguyên khác nhau.
+ ELISA gián tiếp (indirect ELISA): Ưu điểm của phương pháp này là độ nhạy cao chỉ cần tạo một loại kháng kháng thể mang enzyme để nhận biết cho nhiều kháng nguyên khác nhau. Tuy nhiên nhược điểm của nó là tăng số bước thực hiện do đó làm tăng việc kiểm soát các điều kiện, quá trình thực hiện xét nghiệm và kéo dài thời gian chẩn đoán.
+ ELISA sandwich: Phương pháp này có khá nhiều ưu điểm vượt trội, thứ nhất là độ nhạy cao giảm được nhuộm màu nền và các phản ứng không đặc hiệu do đã loại bỏ được hầu hết các thành phần tạp, phản ứng được thực hiện dễ dàng hơn.
+ ELISA cạnh tranh (competitive ELISA): ELISA cạnh tranh là phương pháp ELISA rất hiệu quả cho định lượng các yếu tố hiện diện trong mẫu với lượng nhỏ. ELISA cạnh tranh sử dụng một lượng kháng nguyên cùng loại với kháng nguyên mà ta muốn định lượng trong mẫu (kháng nguyên cạnh tranh) cho phản ứng miễn dịch với cùng một loại kháng thể đặc hiệu cố định trên mặt rắn, sau đó đo lượng kháng nguyên cạnh tranh này thông qua hoạt tính enzyme được liên kết với nó. Kháng nguyên cạnh tranh càng hiện diện nhiều cho biết loại kháng nguyên đó trong mẫu càng ít và ngược lại.
Chaves M.M.S. và cộng sự năm 2018 [79] nghiên cứu nồng độ Angiopoietin-2 ở 65 bệnh nhân HCTH. Đánh giá đặc điểm bệnh nhân và lâm sàng cho thấy: tuổi trung bình là 38,1 tuổi, tỷ lệ nam/nữ là 28/37, tổn thương mô bệnh học có 32 bệnh nhân xơ cứng cầu thận ổ đoạn và HCTH thay đổi tối thiểu, 18 bệnh nhân viêm cầu thận màng, 9 bệnh nhân bệnh thận IgA và 4 bệnh nhân viêm cầu thận màng tăng sinh. Nồng độ ure trung bình là 43,4 mg/dl, creatinine là 1,1 mg/dl, MLCT trung bình là 87,3 ml/phút, cholesterol toàn phần là 297,6 mg/dl, LDL-c là 181,4 mg/dl, HDL-c là 56,2 mg/dl, triglycerid là 261,3 mg/dl, protein niệu 24 giờ là 5,9 g.
Nghiên cứu của Iwabuchi Y. và cộng sự năm 2018 trên đối tượng bệnh nhân HCTH phụ thuộc corticosteroid [80]. Mẫu nghiên cứu gồm 51 bệnh nhân trong đó có 32 trẻ em tuổi phát bệnh trung bình là 8,6 tuổi và 19 người lớn tuổi trung bình phát bệnh là 30,6 tuổi, tất cả đều là HCTH thay đổi tối thiểu. Nhóm trẻ em có BMI trung bình là 22,5, albumin máu trung bình là 3,84 g/dl, creatinine 0,69 mg/dl, MLCT là 117 ml/phút, LDL-c là 121 mg/dl, HDL-c là 95,5 mg/dl, Triglycerid là 121 mg/dl, BC là 9,4 G/l, lympho 1,4 G/l, nồng độ IgA trung bình là 227 mg/dl, IgG là 777 mg/dl, IgM là 131 mg/dl. Nhóm bệnh nhân người lớn có BMI 21,9, albumin máu trung bình là 3,6 g/dl, creatinine 0,80 mg/dl, MLCT là 85,2 ml/phút, LDL-c là 142 mg/dl, HDL-c là 84,7 mg/dl, Triglycerid là 165 mg/dl, BC là 9,8 G/l, lympho 1,2 G/l, nồng độ IgA trung bình là 159 mg/dl, IgG là 649 mg/dl, IgM là 124 mg/dl. Chỉ thấy sự khác biệt có ý nghĩa thống kê về MLCT giữa 2 nhóm bệnh nhi và người lớn.
Zhu H. và cộng sự 2018 [81] đã thực hiện nghiên cứu trên 798 bệnh nhân HCTH trong đó có 47 bệnh nhân HCTH thay đổi tối thiểu và 751 bệnh nhân HCTH do các loại viêm cầu thận khác. Ở nhóm bệnh nhân HCTH thay đổi tối thiểu 22/47 bệnh nhân có tuổi từ 40 trở lên, 30/47 là nam, 7 BN có tăng huyết áp, BMI trung bình là 25, nồng độ albumin trung bình là 22,68 g/l, protein toàn phần là 43,32 g/l, creatinine là 82,25 µmol/l, cholesterol toàn phần là 8,81 mmol/l, TG là 2,35 mmol/l, HDL-c là 1,74 mmol/l, LDL-c là 6,31 mmol/l, IgA là 220,47 mg/dl, IgM là 142,22 mg/dl. Trong khi nhóm bệnh nhân HCTH do viêm cầu thận khác có các chỉ số là 394/751 bệnh nhân có tuổi từ 40 trở lên, 457/751 là nam, 363 BN có tăng huyết áp, BMI trung bình là 25,45, nồng độ albumin trung bình là 33,94 g/l, protein toàn phần là 58,33 g/l, creatinine là 104,31 µmol/l, cholesterol toàn phần là 5,72 mmol/l, TG là 2,22 mmol/l, HDL-c là 1,26 mmol/l, LDL-c là 3,81 mmol/l, IgA là 259,46 mg/dl, IgM là 111,43 mg/dl. Khi so sánh nhận thấy nhóm HCTH do viêm cầu thận có tỷ lệ THA, nồng độ protein toàn phần, albumin, creatinine máu và IgA cao hơn, tuy nhiên nồng độ cholesterol toàn phần, HDL và LDL thấp hơn nhóm bệnh nhân HCTH do thay đổi tối thiểu có ý nghĩa, p< 0,01.
Năm 2018, Dumas De La Roque C. và cộng sự [82] đã nghiên cứu trên các bệnh nhân HCTH do bệnh cầu thận xơ cứng ổ đoạn và do bệnh cầu thận thay đổi tối thiểu với số lượng bệnh nhân là 68 và 97 để tìm các yếu tố tiên lượng bệnh. Nhóm HCTH thay đổi tối thiểu có tuổi trung bình là 47 tuổi, trong đó 34% bệnh nhân tuổi từ 60 trở lên, 26,8% bệnh nhân tuổi < 30, tỷ lệ nam/nữ 55/42, chỉ số BMI là 27, tỷ lệ BN THA chiếm 48,8% trong đó: 35,5% bệnh nhân từ 60 tuổi trở lên, 21,7% bệnh nhân < 30 tuổi THA và 53,3% BN THA ở tuổi 30 -59, MLCT trung bình là 79 ml/phút, phân bố theo BTMT như sau: giai đoạn 1: 36,8%, giai đoạn 2: 28,7%, giai đoạn 3: 26,5%, giai đoạn 4: 3,4% và 4,6% là giai đoạn 5, protein niệu trung bình là 6,5 g/24 giờ, albumin máu trung bình là 21 g/l trong đó < 30 g/l là 88,2% và có tới 42,3% bệnh nhân có albumin máu < 20 g/l, cholesterone trung bình là 3,7 mg/dl, TG trung bình là 1,9 g/l. Các chỉ số này ở nhóm bệnh nhân HCTH do xơ cứng cầu thận ổ đoạn lần lượt là: tuổi trung bình là 57 tuổi, trong đó 38,2% bệnh nhân tuổi từ 60 trở lên, 13,2% bệnh nhân tuổi < 30, tỷ lệ nam/nữ: 48/20, chỉ số BMI là 29, tỷ lệ THA là 46,3% trong đó: 80% bệnh nhân từ 60 tuổi trở lên, 33,3% bệnh nhân < 30 tuổi THA và 25% BN THA ở tuổi 30 -59, MLCT trung bình là 42,5 ml/phút, phân bố theo BTMT như sau: giai đoạn 1: 6,2%, giai đoạn 2: 12,5%, giai đoạn 3: 51,6%, giai đoạn 4: 28,1% và 1,6% là giai đoạn 5, protein niệu trung bình là 6,0 g/24 giờ, albumin máu trung bình là 29 g/l trong đó < 30 g/l là 51,2% và có 13,9% bệnh nhân có albumin máu < 20 g/l, cholesterone trung bình là 2,6 mg/dl, TG trung bình là 2,0 g/l. Nhóm bệnh nhân HCTH do xơ cứng cầu thận ổ đoạn có tuổi trung bình cao hơn, MLCT thấp hơn, albumin máu cao hơn nhóm bệnh nhân HCTH thay đổi tối thiểu có ý nghĩa, p< 0,01.
Nghiên cứu của Youssef D.M. và cộng sự (2011) trên 2 nhóm: 27 bệnh nhi HCTH trong đó có 16 bệnh nhi kháng corticosteroids tuổi trung bình là 12,3 tuổi, 11 bệnh nhi nhạy với corticosteroids tuổi trung bình là 11,6 tuổi, so với 20 trẻ em khoẻ mạnh tuổi trung bình là 12,1 tuổi. Kết quả thấy nồng độ IgA, IgG và IgM huyết tương nhóm khoẻ mạnh lần lượt là 2,4; 11,8 và 1,5 g/l còn nhóm bệnh nồng độ IgA, IgG thấp hơn có ý nghĩa, nồng độ IgM cao hơn chưa thấy có ý nghĩa thống kê [83].
Anis S. và cộng sự năm 2017 [84] cũng đã thực hiện một nghiên cứu và trả lời cho câu hỏi có thể sử dụng các globulin miễn dịch để chẩn đoán viêm cầu thận. Nghiên cứu thực hiện trên 38 đối tượng gồm 25 bệnh nhân viêm cầu thận mạn tính tuổi trung bình là 31,6 tuổi có 60% bệnh nhân suy chức năng thận, so với 13 người khoẻ mạnh làm chứng tương đương tuổi và giới. Nồng độ IgA trung bình nhóm bệnh là 2,7 ± 1,14 g/l cao hơn nhóm chứng là 1,9 ± 0,6 g/l có ý nghĩa thống kê, p< 0,01. Nồng độ IgG nhóm bệnh là 13,2 ± 5,6 g/l, thấp hơn nhóm chứng là 14,8 ± 2,1 g/l không có ý nghĩa thống kê. Nồng độ IgM nhóm bệnh là 2,0 ± 2,1 g/l cao hơn nhóm chứng là 1,2 ± 0,5 g/l có ý nghĩa thống kê với p< 0,05. Tuy nhiên, nồng độ IgA, IgG và IgM không liên quan đến tình trạng suy thận, mức thải protein niệu và dạng tổn thương thận cấp và mạn tính.
2.2.2.1. Nhóm chứng thường
SƠ ĐỒ THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU
Biểu đồ 3.1. Tỷ lệ bệnh nhi và người lớn trong nghiên cứu
Biểu đồ 3.2. Tương quan giữa IgM và IgG ở bệnh nhi
Biểu đồ 3.3. Tương quan giữa IgG và IgA ở bệnh nhi
Biểu đồ 3.4. Tương quan giữa IgM và IgA ở bệnh nhân người lớn
Biểu đồ 3.5. Tương quan giữa IgM và IgG ở bệnh nhân người lớn
Biểu đồ 3.6. Tương quan giữa IgG và IgA ở bệnh nhân người lớn
Biểu đồ 3.7. Mối tương quan giữa nồng độ IgG với Protein niệu 24h
Biểu đồ 3.8. Đường cong ROC của một số yếu tố dự báo giảm nồng độ IgG huyết tương ở bệnh nhi mắc HCTH (n=61)
Biểu đồ 3.9. Tương quan giữa nồng độ IgA với Protein niệu 24 giờ
Biểu đồ 3.10. Mối tương quan giữa nồng độ IgG với Protein niệu 24 giờ
Biểu đồ 3.11. Tương quan giữa nồng độ IgM với Protein niệu 24 giờ
Biểu đồ 3.12. Đường cong ROC của một số yếu tố dự báo giảm nồng độ IgA huyết tương ở người lớn mắc HCTH (n=87)
Biểu đồ 3.13. Đường cong ROC của một số yếu tố dự báo giảm IgG
huyết tương ở người lớn mắc HCTH (n=87)
Biểu đồ 3.14. Đường cong ROC của một số yếu tố dự báo tăng nồng độ IgM huyết tương ở người lớn mắc HCTH (n=87)
Biểu đồ 3.15. Tỷ lệ bệnh nhi được đánh giá kết quả trước và sau đợt điều trị (n=61)
Biểu đồ 3.16. Phân bố bệnh nhi theo tình trạng đáp ứng với điều trị Corticosteroid (n=33)
Biểu đồ 3.17. Giá trị của IgA, IgG, IgM trong dự báo bệnh nhi không đáp ứng điều trị Corticosteroid (n=33)
Biểu đồ 3.18. Tỷ lệ người lớn mắc HCTH được đánh giá kết quả đợt điều trị (n=87)
Biểu đồ 3.19. Phân bố bệnh nhân người lớn theo tình trạng có hay không đáp ứng điều trị corticosteroid (n=57)
Bình thường lỗ lọc cầu thận chỉ cho những chất có phân tử lượng < 60000 kDal đi qua như ure, creatinine, acid uric và những chất tan trong nước như glucose. Các chất có phân tử lượng lớn không thể đi qua màng lọc cầu thận. Với ánh sáng của siêu cấu trúc và sinh học phân tử, những vấn đề về đột biến gen liên quan đến tổn thương rộng lỗ lọc đã được minh chứng [116],[117],[118]. Một số khiếm khuyết di truyền được xác định sớm nhất dẫn đến hội chứng thận hư là những gen trong gen mã hóa protein màng thận nephrin (NPHS1) và podocin (NPHS2), một protein màng nguyên phân có liên quan đến NPHS1. Protein NPHS1 của lỗ lọc là một protein vận chuyển qua màng thuộc họ globulin miễn dịchcủa các phân tử kết dính tế bào. Phần ngoại bào lớn của NPHS1 có tám miền giống như globulin miễn dịchG và một mô-đun sợi đơn loại 3. Nó tạo thành các chất đồng nhất và dị chất với các protein như NEPH1, 2 và 3 được biểu thị trên hệ thống chân tế bào podocyte để tạo ra các phức hợp đa protein giống như dây kéo của lỗ lọc [118]. Như vậy, vai trò của các protein như nephrin hay podocin được xác nhận trong cơ chế bệnh sinh thay đổi kích thước và điện tích lỗ lọc ở bệnh nhi HCTH nguyên phát. Với những bệnh nhi có viêm cầu thận, tổn thương màng lọc là yếu tố gây thoát các protein bao gồm cả IgA và IgG ra nước tiểu. Các tổn thương trên màng lọc cầu thận với các cơ chế tác động làm protein ra nước tiểu ồ ạt, với 80% là albumin, bệnh nhi xuất hiện triệu chứng của HCTH, việc đánh giá mối liên quan giữa IgA, IgG và IgM với protein niệu có thể gợi ý cho các nhà lâm sàng sử dụng các globulin miễn dịch này tiên lượng được đáp ứng điều trị và tiến triển bệnh thận của bệnh nhi.
1. Đặc điểm nồng độ IgA, IgG và IgM huyết tương ở người bệnh mắc hội chứng thận hư
2. Liên quan giữa nồng độ IgA, IgG, IgM với một số đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng và vai trò của chúng trong tiên lượng đáp ứng điều trị corticosteroid liều tấn công