a. Tổng hợp HPA-Chitosan
Hòa tan 1g chitosan trong 40mL H2O tại pH =1. Sau khi hòa tan thêm vào 0,24g HPA rồi tiếp tục khuấy, điều chỉnh pH=5. Cho 450mg EDC vào dung dịch phản ứng, điều chỉnh pH=5, khuấy trong 24h rồi thẩm tách dung dịch bằng màng Spectra Pork Cellulose Ester Membrane, MW 6000-8000 Da,
quá trình thẩm tách kéo dài khoảng 3 ngày. Dung dịch sau khi thẩm tách đƣợc đông sâu ở −80o
C và tiến hành đông khô trong 24 giờ thu đƣợc sản phẩm chitosan-HPA là chất rắn màu trắng (HPA-Chitosan).
Sử dụng phƣơng pháp 1
H-NMR xác định thành phần, cấu trúc của HPA-Chitosan.
Xác định lƣợng HPA trong HPA-Chitosan bằng phƣơng pháp UV-Vis. Đo độ hấp thu A của dung dịch HPA-Chitosan ở nồng độ 1mg/mL và dùng đƣờng chuẩn của nồng độ HPA và độ hấp thu A tại bƣớc sóng 270nm [phụ lục 15] để xác định lƣợng HPA trong HPA-Chitosan.
b. Tổng hợp in situ hydrogel HPA-Chitosan
Hydrogel HPA-Chitosan đƣợc điều chế trong sự hiện diện của HRP và H2O2 ở nhiệt độ phòng. Hòa tan 10 mg HPA-Chitosan với 150μl dung dịch đệm muối phosphate pH = 7,4. Sau khi hòa tan, chia dung dịch làm hai phần bằng nhau. Dung dịch A chứa 75 µL HPA-Chitosan đƣợc cho thêm 15μl H2O2. Dung dịch B chứa75 µL HPA-Chitosan đƣợc cho thêm 15 μl HRP. Trộn lẫn hai dung dịch A và B vào nhau. Gel sẽ đƣợc hình thành nhanh chóng ở nhiệt độ phòng.
c. Tổng hợp in situ hydrogel composit HPA-Chitosan/BCP
Hydrogel composit HPA-Chitosan/BCP đƣợc điều chế trong sự hiện diện của HRP và H2O2 ở nhiệt độ phòng. Hòa tan 10 mg HPA-Chitosan với 150μl dung dịch đệm muối phosphate pH = 7,4. Sau khi hòa tan, BCP đƣợc phân tán đều trong dung dịch HPA-Chitosan bằng phƣơng pháp khuấy trộn, chia dung dịch làm hai phần bằng nhau. Dung dịch A chứa 75 µL HPA-Chitosan/BCP đƣợc cho thêm 15μl H2O2. Dung dịch B chứa75 µL HPA-ChitosanBCP đƣợc cho thêm 15 μl HRP. Trộn lẫn hai dung dịch A và B vào nhau. Gel sẽ đƣợc hình thành nhanh chóng ở nhiệt độ phòng.