a. Tổng hợp TA- Gelatin
Hòa tan 2g gelatin trong 30mL H2O ở nhiệt độ 40oC. Sau khi gelatin tan hoàn toàn thêm 1g tyramin, khuấy đều trong 10 phút, điều chỉnh pH=6 bằng dung dịch HCl 5%.
Để dung dịch nguội đến nhiệt độ phòng, cho thêm 250mg EDC, khuấy 24h rồi thẩm tách dung dịch bằng màng Spectra Pork Cellulose Ester Membrane, MW 14.000 Da, quá trình thẩm tách kéo dài khoảng 3 ngày. Dung dịch sau khi thẩm tách đƣợc đông sâu ở −80oC và đông khô trong 24 giờ thu đƣợc chất rắn màu trắng là sản phẩm gelatin-tyramin (TA-Gelatin).
Sử dụng phƣơng pháp 1
H-NMR xác định thành phần, cấu trúc của TA- Gelatin.
Xác định lƣợng TA trong TA-Gelatin bằng phƣơng pháp UV-Vis. Đo độ hấp thu A của dung dịch TA- Gelatin ở nồng độ 1mg/mL và dùng đƣờng chuẩn của nồng độ TA và độ hấp thu A tại bƣớc sóng 270nm [phụ lục 14] để xác định lƣợng TA trong TA-Gelatin.
b. Tổng hợp in situ hydrogel TA-Gelatin
Hydrogel TA-Gelatin đƣợc điều chế trong sự hiện diện của HRP và H2O2 ở nhiệt độ phòng. Hòa tan 20 mg TA-Gelatin với 150μl dung dịch đệm muối phosphate pH = 7,4. Sau khi hòa tan, chia dung dịch làm hai phần bằng nhau. Dung dịch A chứa 75 µL TA-Gelatin đƣợc cho thêm 15μl H2O2. Dung dịch B chứa75 µL TA-Gelatin đƣợc cho thêm 15 μl HRP. Trộn lẫn hai dung dịch A và B vào nhau. Gel sẽ đƣợc hình thành nhanh chóng ở nhiệt độ phòng.
Hydrogel composit TA-Gelatin/BCP đƣợc điều chế trong sự hiện diện của HRP và H2O2 ở nhiệt độ phòng. Hòa tan 20 mg TA-Gelatin với 150μl dung dịch đệm muối phosphate pH = 7,4. Sau khi hòa tan, BCP đƣợc phân tán đều trong dung dịch TA-Gelatin bằng phƣơng pháp khuấy trộn, chia dung dịch làm hai phần bằng nhau. Dung dịch A chứa 75 µL TA-Gelatin/BCP đƣợc cho thêm 15μl H2O2. Dung dịch B chứa75 µL TA-Gelatin/BCP đƣợc cho thêm 15 μl HRP. Trộn lẫn hai dung dịch A và B vào nhau. Gel sẽ đƣợc hình thành nhanh chóng ở nhiệt độ phòng.