- Xác định hàm lượng polyphenol tổng số Đánh giá khả năng chống oxy hóa:
Dịch Chiết
3.1. Ảnh hưởng của nồng độ ethanol đến hàm lượng polyphenol tổng số và hoạt tính chống oxy hóa của dịch chiết từ lá giang.
Dung môi chiết là một trong những nhân tố quan trọng ảnh hưởng tới quá trình chiết. Thí nghiệm này đã tiến hành xác định ảnh hưởng của của nồng độ dung môi chiết (ethanol) đến hàm lượng polyphenol tổng số và khả năng chống oxy hóa (Hình 3.1; 3.2 và 3.3).
Hình 3.1 cho thấy nồng độ ethanol ảnh hưởng mạnh đến hàm lượng polyphenol tổng số trong dịch chiết lá giang. Sipgno và cộng sự (2007) [89] chỉ ra rằng hiệu quả chiết các hợp chất polyphenol của hỗn hợp dung môi nước - ethanol cao hơn so với dung môi nước và ethanol đơn lẻ. Kết quả nghiên cứu của đã cho thấy phù hợp với nhận định này. Ở nồng độ 0 và 100% ethanol thì dịch chiết cho hàm lượng polyphenol thấp hơn so với nồng độ 50 và 75% ethanol. Khi tăng nồng độ ethanol từ 0 đến 75% thì hàm lượng polyphenol tăng lên từ 50,2-80,2 mg GAE/g chất khô. Tuy nhiên, khi tăng nồng độ ethanol từ 75 lên 100% thì hàm lượng polyphenol lại giảm xuống từ 80,2-47.9 mg GAE/g chất khô. Theo kết quả thu được, trong dải nồng độ nghiên cứu, 50% ethanol cho hiệu quả chiết polyphenol là cao nhất. Dung môi chiết là một thông số quan trọng trong quá trình chiết các hợp chất từ nguyên liệu thực vật và động vật. Từ kết quả của nghiên cứu này cho thấy rằng nồng độ dung môi chiết (ethanol) có ảnh hưởng lớn đến hàm lượng polyphenol tổng số của dịch chiết lá giang. Kết quả này tương tự với nhiều nghiên cứu trước đây trên đối tượng rong biển và các loài thực vật trên cạn. Chew và cộng sự (2011) [41] nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ ethanol (0-100%) đến hàm lượng polyphenol tổng số của rau má Centella asiatica. Kết quả cho thấy nồng độ ethanol có ảnh hưởng đáng kể đến hàm lượng polyphenol của dịch chiết thu được. Nồng độ ethanol ở 40% được xác định là nồng độ cho hàm lượng polyphenol tổng số là cao nhất. tương tự thì Nghiên cứu của Baraniak và cộng sự (2002) [29] khi nghiên cứu trên súp lơ đã chọn nồng độ Ethanol là 80%, Emanul và cộng sự (2011) [49] nghiên
cứu trên đối tượng trà Atiso (Cynarae folium), đã lựa chon 75% Ethanol là nồng độ tối ưu để chiết dịch.
Hình 3.1. Ảnh hưởng của nồng độ ethanol đến hàm lượng polyphenol tổng số của dịch chiết từ lá giang (chữ cái trên cột khác nhau chỉ ra sự khác nhau có
nghĩa thống kê p< 0,05)
Từ hình 3.2 nhận thấy tổng năng lực khử của dịch chiết lá giang chịu ảnh hưởng bởi nồng độ ethanol. Cụ thể, khi tăng nồng độ ethanol từ 0-100% tổng năng lực khử của dịch chiết được xác định bằng độ hấp thụ tại bước sóng 700 nm, tăng từ 0.53 đến 1.06. Do đó trong dải nồng độ đã nghiên cứu thì ở 100% ethanol là nồng độ tối ưu nhất. Kết quả này tương tự với nghiên cứu của In Du.H, Seenivasan.R (2013) [57] khi nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ ethanol (20; 60; 80 và 100%) tới tổng năng lực khử của dịch chiết rong biển thì kết quả cho thấy ở nồng độ 100% ethanol là mạnh nhất.
Như vậy, nồng độ 100% ethanol là nồng độ dung môi cho tổng năng lực khử là cao nhất. Điều này được giải thích rằng: ngoài hợp chất polyphenol là những chất có khả năng chống oxy hóa thì trong lá giang còn tồn tại một loại chất mà sẽ được trích ly tốt trong môi trường 100% ethanol, loại chất này có khả năng cho năng lực khử tốt, do đó mà tại nồng độ dung dịch 50% ethanol cho hàm lượng polyphenol tổng số cao nhất, cong ở 100% ethanol lại cho năng lực khử cao nhất.
Hình 3.2. Ảnh hưởng của nồng độ ethanol đến tổng năng lực khử của dịch chiết từ lá giang (chữ cái trên cột khác nhau chỉ ra sự khác nhau có nghĩa
thống kê p < 0,05)
Từ hình 3.3 ta có thể thấy nồng độ ethanol cũng ảnh hưởng tới khả năng khử gốc tự do DPPH theo xu hướng tương tự như hàm lượng polyphenol tổng số. Cụ
thể, trong khoảng nồng độ ethanol từ 0-50% thì khả năng khử gốc tự do tăng từ 62,98 đến 97,88%. Tại nồng độ ethanol 100% thì khả năng khử gốc tự do DPPH của dịch chiết lá giang chỉ là 96,05%. Kết quả nghiên cứu của Chew và cộng sự (2011) [41] cho thấy khả năng khử gốc tự do DPPH của dịch chiết rau má tăng lên theo mức độ tăng của nồng độ ethanol từ 0-50%. Khi tiếp tục tăng nồng độ ethanol thì khả năng khử gốc tự do DPPH không tăng. Kết quả này tương tự với kết quả nghiên cứu trong đề tài trên đối tượng lá giang. Tương tự, nghiên cứu của Hisamoto và cộng sự (2011) [55] khi nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ ethanol (30; 50; 70 và 100%) tới khả năng khử gốc tự do DPPH của dịch chiết quả nho, kết quả cho thấy chiết xuất ethanol 50 và 70% cho khả năng khử DPPH cao nhất và nghiên cứu gần đây của Samuagam và cộng sự (2013) [82] khi nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ ethanol đến khả năng khử gốc tự do DPPH của một số loại trái cây nhiệt đới, cho thấy 80% ethanol cho khả năng khử lớn nhất đối với chôm chôm (Nepheliumlappaceum), 60% ethanol đối với măng cụt (Garciniamangostana) và 80% ethanol đối với vỏ bòn bon (Lansiumdomesticum).
Hình 3.3. Ảnh hưởng của nồng độ ethanol đến khả năng khử gốc tự do DPPH của dịch chiết từ lá giang (chữ cái trên cột khác nhau chỉ ra sự khác nhau có
nghĩa thống kê p < 0,05)
Như vậy, từ kết quả nghiên cứu có thể kết luận rằng nồng độ ethanol có ảnh hưởng rất lớn đến hàm lượng polyphenol tổng số và khả năng chống oxy hóa của dịch chiết lá giang. Điều này có thể được giải thích như sau: ethanol phá hủy nguyên sinh chất của tế lá, thấm sâu vào bên trong, làm tăng khả năng khuếch tán chất tan ra môi trường bên ngoài. Nồng độ ethanol thấp sẽ làm giảm khả năng phá hủy tế bào lá giang, do đó diện tích tiếp xúc với dung môi sẽ nhỏ đi, khả năng chiết giảm. Ngoài ra, nồng độ càng thấp thì nước trong dung môi càng nhiều. Nước sẽ thấm vào tế bào làm nó trương nở đồng thời làm chậm quá trình khuếch tán còn chất tan. Do đó lượng chất chiết thu được càng ít. Tuy nhiên, nếu tăng nồng độ lên quá cao sẽ làm các tạp chất cũng tan ra môi trường trích ly do đó sẽ làm giảm hàm lượng polyphenol khả
năng chống oxy hóa [22], [41], [42]. Như vậy, để thu được dịch chiết từ lá giang có hàm lượng các chất polyphenol cao và khả năng chống oxy hóa mạnh, thì nồng độ ethanol ở 50% ethanol là dung môi chiết thích hợp.
3.2. Ảnh hưởng của thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số và hoạt tính chống oxy hóa của dịch chiết từ lá giang.