Khỉ loài Macaca mulatta.
ảnh 1 : Đàn khỉ nuôi tại đảo Rều – Quảng ninh - Khỉ tr−ởng thành từ 2 đến 2,5kg
- Khỉ bào thai từ 4 đến 5 tháng tuổi
Khỉ đ−ợc lựa chọn theo tiêu chuẩn của TCYTTG giống nh− sản xuất OPV: Khỉ đ−ợc chọn khi các thử nghiệm d−ới đây âm tính (-)
- Kiểm tra kháng thể SV40 : Ph−ơng pháp trung hoà trên nuôi cấy tế bào JVKT - Kiểm tra kháng thể SIV bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán HIV của ng−ời
- Kiểm tra kháng thể Foamy virut bằng bộ sinh phẩm chẩn đoán miễn dịch huỳnh quang - Kiểm tra M.tuberculosis bằng thử nghiệm trong da khỉ (test bì)
- Kiểm tra kháng thể bại liệt bằng ph−ơng pháp trung hoà vi l−ợng trên nuôi cấy tế bào Hep2C
* Tách và nuôi tế bào thận khỉ tiên phát :
Mục đích của ph−ơng pháp là lựa chọn tách đ−ợc nhiều tế bào sống nhất, lựa chọn đ−ợc môi tr−ờng nuôi thích hợp nhất cho tế bào phát triển và phù hợp với môi tr−ờng gây nhiễm cho hiệu giá văcxin đơn typ cao. Sử dụng các ph−ơng pháp và kỹ thuật nuôi cấy tế bào thận khỉ 1 lớp nh− sản xuất văcxin bại liệt. Tế bào đ−ợc tách từ cặp thận pha vào môi tr−ờng nuôi để có hỗn dịch tế bào. Hỗn dịch tế bào đạt 7.104 tế bào/ml. Dùng chai Roux 1,2 lít có diện tích bề mặt 250 cm2 cho 170 ml hỗn dịch tế bào (có 10% huyết thanh bê) và ủ ở 370C. Thay môi tr−ờng vào ngày thứ 6-7, theo dõi 1-2 ngày chọn các chai tế bào kín 1 lớp đạt yêu cầu để gây nhiễm với virut bại liệt chủng Sabin.
*Tách tế bào thận bào thai khỉ Macaca Mulatta
Khỉ mẹ có thai khoảng 4 đến 5 tháng tuổi, mổ lấy thai, khỉ mẹ đ−ợc khâu nh− mổ đẻ. Bào thai đ−ợc xử lý tuần tự nh− khỉ tr−ởng thành. Lấy thận, truyền dung dịch trypsin 0,25% trong đệm có citrat (TCD). Bóc màng thận, cắt nhỏ trong chai chứa dung dịch dispase. Sau 10 đến 15 phút lại chắt dung dịch dispase (có chứa tế bào đ−ợc tách ra), cho tiếp dung dịch dispase quay cho tới khi thận đ−ợc tách hết. Ly tâm. Chắt bỏ n−ớc nổi. Dùng dung dịch Hanks ly tâm lại 1 lần nữa. Lọc tế bào. Đếm tế bào giống nh− thận khỉ tr−ởng thành. Khi tế bào kín 1 lớp có thể cấy truyền 3 đời liên tiếp dùng để sản xuất.