Chương 2 đỊA đIỂM, THỜI GIAN, đỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.6.3. Phương pháp chẩn ựoán
Mẫu xét nghiệm ựược tiến hành chẩn ựoán tại Phòng chẩn ựoán xét nghiệm Bộ môn Ký sinh trùng Ờ Khoa Thú Y Ờ đại học Nông nghiệp Hà Nội và tại ựịa ựiểm nghiên cứu bằng các phương pháp sau:
2.6.3.1 Phương pháp ngưng kết SAT (Slide agglutination test)
đây là phương pháp chẩn ựoán dễ tiến hành và nhanh chóng cho kết quả.
- Nguyên lý: trong máu trâu bị bệnh tiên mao trùng sinh ra ngưng kết tố, có thể là ngưng kết tiên mao trùng thành cụm như hình hoa cúc.
- Các bước tiến hành phản ứng ngưng kết SAT:
* Bước 1 Chuẩn bị:
+ Chuẩn bị kháng nguyên là tiên mao trùng sống ựược lấy từ chuột gây nhiễm tiên mao trùng. Giết chuột có lượng tiên mao trùng tối ựa, máu chuột ựược xử lý bằng Natricitrat 10% (1 ml máu chuột + 0,1 ml Natricitrat).
- Pha loãng kháng nguyên với dung dịch ựệm PSG thành nồng ựộ pha loãng 1/4-1/8.
- Kháng nguyên bảo quản ở 4 ựộ C có thể làm phản ứng trong 8 ựến10 giờ. + Huyết thanh chẩn ựoán cũng pha loãng ở nồng ựộ1/8.
* Bước 2: Tiến hành phản ứng:
- Nhỏ một giọt huyết thanh cần chẩn ựoán lên phiến kắnh sạch với một giọt tương ựương kháng nguyên. Trộn ựều, ựậy lá kắnh trong 5-10 phút, sau ựó ựọc phản ứng ngưng kết giữa kháng nguyên và kháng thể trên kắnh hiển vi có ựộ phóng từ ựại 200-400 lần và ựánh giá kết quả phản ứng.
- Phản ứng dương tắnh: nếu tiên mao trùng chụm lại thành hình hoa cúc (hầu hết tiên mao trùng bị chụm lại thành nhiều cụm hình hoa cúc khắp vi trường kắnh hiển vi).
- Phản ứng âm tắnh: tiên mao trùng tản mạn khắp nơi. Nếu một nửa phân tán, một nửa tập trung là phản ứng nghi ngờ.
2.6.3.2 Phương pháp soi tươi
- Lấy máu tĩnh mạch trâu kiểm tra: cho một giọt máu trâu trộn với một giọt Citrat Natri 3,8% lên phiến kắnh, ựậy la men, kiểm tra dưới kắnh hiển vi có ựộ phóng ựại x 400 (10x40).
- Kết quả: (+) Dương tắnh: thấy tiên mao trùng di ựộng bơi trong huyết tương. (-) Âm tắnh: Không tìm thấy Tiên mao trùng.