VI NẤM HOẠI SINH
2. MÔI TRƯỜNG
2.1. Thạch Sabouraud (Sabouraud dextrose agar)
+ Dextrose 40g + Peptone 10g + Thạch 20g + Nước cất 1000ml
Hòa tan tất cả trong nước đun sôi, chỉnh pH sau cùng của môi trường đến 5,6. Phân phối môi trường vào các ống nghiệm có nắp vặn, hấp khử trùng 118OC trong 10 phút. Lưu giữ môi trường ở 4OC – 6OC.
2.2. Sabouraud Cycloheximide Chloramphenicol agar (Mycobiotic agar)
+ Glucose 20g + Peptone 10g + Thạch 20g
+ Chloramphenicol 50mg
+ Cycloheximide (Actidione) 500mg + Nước cất 1000ml
Đun nóng để hòa tan môi trýờng trong nước, cho thêm Chloramphenicol, Cycloheximide, hấp khử trùng 118OC trong 10 phút.
– Chloramphenicol
+ Chloramphenicol 50mg + Cồn ethylic 95o 10ml
Số lượng này dùng cho 1 lít môi trường (0,05mg/ml) có thể thay cho Chloramphenicol bằng: * Streptomycine 40 đơn vị/ml môi trường
* Penicilline 20 đơn vị/ml môi trường
– Cycloheximide
+ Cycloheximide 500mg + Acetone 10ml
Số lượng trên dùng cho 1000ml môi trường.
2.3. Thạch khoai đường (Potato Dextrose Agar)
+ Khoai tây tươi hoặc bột 200g + Dextrose 10 – 20g
+ Nước cất 1000ml
Hầm khoai tây khoảng 1 giờ, nghiền nát lọc lấy nước, thêm nước cất cho đủ 1000ml, thêm đường và 20g thạch, đun sôi trở lại cho tan thạch, phân phối ra ống nghiệm có nắp vặn, hấp khử trùng 120OC trong 10 phút, chỉnh pH sau cùng bằng 5,6.
2.4. Thạch bột bắp (Corn Meal Agar)
+ Bột bắp 50g + Thạch 15g + Nước cất 1000ml
Hòa tan bột bắp, thạch trong nước cất đun sôi, thêm 1% Tween 80 rồi phân phối ra ống nghiệm, đem hấp khử trùng 120OC trong 10 phút.
Ghi chú:Để phân biệt Trichophyton rubrum và Trichophyton mentagrophytes dựa vào sự thành lập sắc tố (Trichophyton rubrum sinh sắc tố đỏ), người ta dùng môi trường này nhưng thay thế 1% Tween 80 bằng 1% Glucose.
2.5. Thạch tim óc hầm (Brain Heart Infusion = BHI)
+ BHI 40g + Thạch 15g + Nước cất 1000ml
Hòa tan tất cả trong nước, đun sôi, hấp khử trùng 120OC trong 15 phút, để nguội 40 – 50OC, cho thêm 50ml máu "O", sau đó phân phối ra ống nghiệm hoặc đĩa.
2.6. BHI có Chloramphenicol và Cycloheximide
+ BHI 37g
+ Cycloheximide 500mg + Chloramphenicol 50mg + Thạch 20g
+ Nước cất 1000ml
Đun nóng để hòa tan BHI, thạch, thêm Chloramphenicol và Cycloheximide, hấp khử trùng 118oC trong 10 phút.
2.7. Môi trường cơm (môi trường cháo hoa)
+ Gạo trắng 8g + Nước cất 25ml
Cho gạo trắng và nước cất vào trong ống nghiệm lớn hoặc trong bình Erlenmeyer – đậy nắp. Nấu chín. Hấp khử trùng 15 – 18 phút. Để nguội. Lưu giữ ở tủ lạnh 4 – 6OC. Khi cấy, cho mảng nấm cần định danh vào môi trường để ở nhiệt độ phòng.