Phương pháp cục thạch
Chủng xạ khuẩn S. orientalis 4912 đƣợc nuôi trên MT thạch trong đĩa Petri ở 28-30oC. Sau 4-5 ngày dùng khoan nút chai đục các thỏi thạch chuyển sang đĩa khác có MT MPA thạch đã cấy vi sinh vật kiểm định. Đặt đĩa Petri ở 4-5o
37
6 giờ cho chất kháng sinh khuếch tán vào MT, sau đó đem nuôi ở tủ ấm 37oC trong 24 giờ để vi sinh vật kiểm định phát triển. Hoạt tính kháng sinh đƣợc xác định bằng đƣờng kính vòng vô khuẩn (mm) xung quanh cục thạch, vòng càng lớn thì hoạt tính kháng sinh càng mạnh [2].
Phương pháp đục lỗthạch
Phƣơng pháp đục lỗ đƣợc sử dụng để xác định hoạt tính kháng sinh có chứa trong MT lỏng. Dùng thiết bị đục lỗ, đục trên MT thạch đã cấy vi sinh vật kiểm định, nhỏ vào lỗ dung dịch cần thử. Các bƣớc tiếp theo làm nhƣ phƣơng pháp cục thạch. Hoạt tính kháng sinh đƣợc xác định bằng đƣờng kính vòng vô khuẩn (mm) xuất hiện xung quanh lỗ đã nhỏ dịch [2].
Phương pháp khoanh giấy lọc
Phƣơng pháp này đƣợc sử dụng để xác định hoạt tính kháng sinh trong dung môi. Các khoanh giấy lọc có đƣờng kính 6 mm đƣợc tẩm một lƣợng dịch kháng sinh (thƣờng là 1ml/10 khoanh giấy lọc). Sau đó sấy khô ở 40oC. Đặt khoanh giấy lọc đã tẩm dịch kháng sinh trên MT thạch đã cấy vi sinh vật kiểm định, các bƣớc tiếp theo giống phƣơng pháp cục thạch [2].
Phương pháp định lượng kháng sinh
Định lƣợng chất kháng sinh bằng phƣơng pháp vi sinh vật học theo Dmitrieva [2]. Nồng độ dung dịch chất kháng sinh chuẩn và chất kháng sinh nghiên cứu đƣợc định lƣợng theo phƣơng pháp đục lỗ, vòng vô khuẩn càng gần 17 mm càng chính xác, chất kháng sinh chuẩn đƣợc pha loãng theo hệ số 2. Tính hiệu số vòng vô khuẩn giữa hai nồng độ liền kề và tra bảng của Dmitrieva tìm hiệu số chỉnh, sau đó nhân với hiệu số pha loãng và nồng độ kháng sinh chuẩn sẽ đƣợc nồng độ chất kháng sinh nghiên cứu (mcg/ml).