Các số liệu thu thập dạng số liệu sơ cấp thông qua cân, đo, đếm hoặc theo dõi, quan sát trực tiếp trên mẫu thu từ các nghiệm thức thí nghiệm và lập sổ nhật ký ghi lại, lưu giữ các số liệu này.
Các công thức tính toán các chỉ tiêu: oKhối lượng trứng
mm1 m2(mg)
oSức sinh sản tuyệt đối (tổng số trứng mà tôm cái mang)
03 , 0 1 m N N (số trứng/tôm mẹ)
oSức sinh sản tương đối (số trứng trên gam tôm mẹ)
2
m N
n (số trứng/gam tôm mẹ)
oSức sinh sản thức tế (số ấu trùng/g tôm mẹ)
oKhối lượng trứng ướt (mg)= 0,01*1000/N1
oNồng độ ammonia không phân li của Amstrong và cộng sự (1978): [NH3] (ppm) = [TAN]/(1-10(pK-pH)).
Trong đó: [NH3]: nồng độ ammonia không phân li (ppm).
[TAN]: nồng độ ammonia tổng số (ppm).
m2
M SSTT =
pK: hệ số phân li (bằng 9,31 ở độ mặn 12‰, 28oC). pH: giá trị pH trung bình, được tính như sau: pH trung bình= -lg [½ *(10-pH đầu+10-pH cuối)].
oCách xác định 24h-LC50 (Trần Thế Hoanh, 1995):
Gọi x (ppm) là nồng độ thuốc và y là tỷ lệ ấu trùng chết trung bình của 3 lần lặp lại ở thời điểm cố định là 24 giờ. Tương quan nồng độ thuốc thử và tỷ lệ chết là tương quan theo kiêu đường thẳng Y=bX+a. Trong đó, Y = Arcsin y , X = lgy. Giá trị x và y được thu thập từ thức nghiệm để tính giá trị X và Y, hệ số b và giá trị a của phương trình hồi qui được xác định thông qua mối tương quan giữa Y và X bằng phần mềm Microsolf Excel 2003.
Kết thúc thí nghiệm các số liệu sẽ được xử lý trên máy tính bằng phần mềm Microsoft Excel, tính giá trị trung bình phân tích ANOVA, tìm sự khác biệt giữa các giá trị trung bình nghiệm thức theo phép thử LSD và Paired-Samples T-test với độ tin cậy 95% bằng phần mềm SPSS (phiên bản 11,0). Các số liệu trình bày dưới dạng: giá trị trung bình sai số chuẩn (SE).
Khi y=50% Y = Arcsin 0,5 x = LC50 = 10X
Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN.
4.1. Tỷ lệ sống của tôm bố mẹ nuôi vỗ tái phát dục
Qua biểu đồ hình 18 cho thấy tôm đực có sự biến động đáng kể về tỷ lệ sống so với tôm cái. Trong đó, nghiệm thức bổ sung 6 mL HUFA có tỷ lệ sống tôm đực thấp nhất (74,046,7%), nghiệm thức đối chứng cao nhất (84,44,6%). Tỷ lệ sống tôm cái tương đối cao ở tất cả các nghiệm thức, trung bình từ 89,6-94,0% với nghiệm thức bổ sung 6 mL HUFA đạt tỷ lệ sống cao nhất (94,51,8%), nghiệm thức đối chứng có tỷ lệ sống thấp nhất (89,63,6%) nhưng khác biệt không có ý nghĩa (p>0,05). Tuy nhiên, tỷ lệ sống tôm đực có liên quan với tỷ lệ tái phát dục của tôm cái có thể thấy rõ nhất ở nghiệm thức bổ sung 6 mL HUFA/kg thức ăn. Tỷ lệ tôm cái tái phát dục cao nhất (81,0%) do đó hoạt động bắt cặp giao vỹ giữa tôm đực với tôm cái diễn ra nhiều hơn các nghiệm thức có tỷ lệ tôm cái tái phát dục thấp hơn (71,9-76,2%). Và đó là nguyên nhân chủ yếu khiến tôm đực phải tăng mức độ hoạt động, tiêu hao nhiều năng lượng cho quá trình tái tạo sản phẩm sinh dục sau mỗi lần giao vỹ. Vì vậy, tôm đực có tuổi thọ và sức khỏe suy giảm, tỷ lệ chết cao nhất ứng ở các nghiệm thức có tôm cái thành thục nhiều nhất là tất yếu. Theo Nguyễn Thanh Phương (2003) cho thấy trong quần đàn tôm càng xanh nuôi trong ao thương phẩm tỷ lệ tôm đực thấp hơn tôm cái và tỷ lệ hao hụt khá cao trong giai đoạn thành thục vì đặc tính tranh giành nơi sống, ăn thịt lẫn nhau và tăng cường tham gia hoạt động sinh sản [8]. Trong thí nghiệm này cho thấy tôm đực đang ở tuổi thành thục cao (càng xanh) cũng xảy ra hiện tượng tương tự.
Hình18: Sự biến động tỷ lệ sống tôm bố mẹ trong thời gian nuôi vỗ.
0 20 40 60 80 100 2 mL 4 mL 6 mL ĐC nghiệm thức tỷ lệ sống (%) tôm cái tôm đực
4.2. Thời gian tái phát dục, thời gian đẻ trứng tần suất lột xác và sự phát triển của buồng trứng tôm cái
4.2.1. Thời gian tái phát dục
Tôm cái giả ở nghiệm thức bổ sung 6 mL HUFA có thời gian tái phát dục ngắn nhất (từ 20,4 ngày), dài nhất ở nghiệm thức đối chứng (ĐC) (5,11,5 ngày) và 2 nghiệm thức bổ sung 2 và 4 mL HUFA cũng có thời gian tái dục ngắn hơn nhưng sự khác biệt không có ý nghĩa (p>0,05) (hình 19). Các nghiệm thức được bổ sung HUFA trong thức ăn đã giúp tôm cái hấp thu đủ những chất cần thiết bù đắp vật chất đã cạn kiệt sau khi đẻ trứng và tích lũy lại vật chất mới dảm bảo cho sự tái phát triển buồng trứng. Trong quá trình nuôi vỗ tôm mẹ tái phát dục, thức ăn không chỉ có ảnh hưởng đến khả năng tích lũy noãn hoàng, sự phát triển buồng trứng mà còn ảnh hưởng đến cả chất lượng ấu trùng ở thế hệ đàn con. Dinh dưỡng kém sẽ ức chế sự tái phát triển của buồng trứng và tạo nên một thế hệ sức sống thấp, vì vậy thức ăn thích hợp cung cấp đầy đủ các chất dinh dưỡng và dễ tiêu hóa cho tôm mẹ là rất cần thiết. Do đó, việc bổ sung HUFA đã có tác động nhất định trong việc rút ngắn thời gian tái phát dục của tôm cái giả. Thí nghiệm cho kết quả tương tự như kết quả nghiên cứu của Rodaldo (2003) đã thực nghiệm thành công trên tôm mẹ càng xanh bình thường khi bổ sung HUFA [22].
4.2.2. Thời gian đẻ trứng của tôm cái
Hình 19:Thời gian tái phát dục (TPD) của tôm cái. 3,2 2,2 2 5,1 0 1 2 3 4 5 6 2 mL 4 mL 6 mL ĐC nghiệm thức
Thời gian tái phát dục (ngà
y)
Hình 20: Thời gian đẻ trứng của tôm cái. 23,4 17,6 24 17 0 5 10 15 20 25 30 2 mL 4 mL 6 mL ĐC nghiệm thức
Thời gian một lần đẻ trứng của tôm cái ở nghiệm thức đối chứng ngắn nhất (173,1 ngày) và dài nhất là các bể cho ăn bổ sung 6 mL HUFA (244,6 ngày/lần) nhưng khác biệt không có ý nghĩa (p>0,05). Đồ thị hình 20 cho thấy thời gian đẻ trứng của tôm cái ở các nghiệm thức. Nghiệm thức bổ sung 4 mL HUFA/kg thức ăn có thời gian đẻ trứng trung bình 17,6 ngày và lột xác là 17,2 ngày, gần trùng nhau chứng tỏ hoạt động lột xác của tôm cái nghiệm thức này chủ yếu là lột xác tiền giao vỹ, rất ít xảy ra lột xác sinh trưởng. Với nồng độ bổ sung 6 mL HUFA/kg thức ăn đã cung cấp một lượng chất dinh dưỡng dồi dào làm cho sự tăng trưởng diễn ra mạnh mẽ, tôm mẹ lột xác tăng trưởng trước thời điểm buồng trứng phát triển chín muồi, làm kéo dài thời gian đẻ trứng. Khi cung cấp thức ăn đủ chất dinh dưỡng trong thời gian nuôi vỗ sẽ giúp tôm mẹ bổ sung vật chất cần thiết đã cạn kiệt sau khi đẻ trứng và tái phát triển buồng trứng, đồng thời cơ thể cũng có thể hồi phục và phát triển bình thường sau mỗi lần đẻ trứng, đảm bảo cho sự phát triển buồng trứng tốt để quá trình lột xác tiền giao vỹ diễn ra và sau đó sẽ đẻ trứng. Tuy nhiên, nồng độ cao HUFA chứa DHA và EPA (6 mL) không ảnh hưởng đến thời gian đẻ trứng. Kết quả này cũng phù hợp với Rodaldo (2003) [22].
4.2.3. Thời gian lột xác của tôm cái
Qua hình 21, thời gian lột xác của tôm cái ở nghiệm thức đối chứng nhỏ nhất (15,32,7 ngày/lần) còn nghiệm thức bổ sung 2 mL HUFA có thời gian lột xác lớn nhất (20,22,9 ngày/lần) và sự khác biệt cũng không có ý nghĩa về mặt thống kê (p>0,05). Sự lột xác của tôm cái có thể thay đổi theo tuổi, điều kiện môi trường sống như nhiệt độ, chế độ dinmh dưỡng, ánh sáng, sinh sản,…Đối với tôm càng xanh cái, hiện tượng lột xác tiền giao vỹ khi buồng trứng đạt giai đoạn IV thường xảy ra. Vì vậy, quá trình lột xác sẽ chịu ảnh hưởng của hormone lột xác và sự phát triển của buồng trứng. Theo Damrongphol và cộng sự (1991) cho rằng tôm càng xanh cái đạt tuổi thành thục có xu hướng phát triển mạnh về buồng trứng tuy nhiên không phải tất cả lần lột xác của chúng đều dẫn đến sự đẻ trứng (tài liệu không công bố). Mặt khác, ở các thời điểm tôm cái lột xác thì buồng trứng
Hình 21: Thời gian lột xác của tôm cái 21,9 17,2 17,2 15,3 0 5 10 15 20 25 2 mL 4 mL 6 mL ĐC nghiệm thức Thời gian lột x ác (ngày)
của chúng có thể đang ở nhiều giai đoạn khác nhau theo phân loại của Nguyễn Thanh Phương (2003) [8]. Có thể khi đã tham gia sinh sản, tôm cái bị cạn kiệt các chất dinh dưỡng dự trữ, sau một khoảng thời gian ngắn sự hấp thu các chất bù đắp không đủ để tiếp tục tái phát dục (buồng trứng chưa phát triển đạt giai đoạn chín muồi) và tham gia sinh sản tiếp thì các chất hấp thu từ thức ăn sẽ ưu tiên cho sự sinh trưởng đảm bảo cho sự sống của cơ thể. Và khi đó tôm lột xác tăng trưởng thay vì lột xác tiền giao vỹ. Do đó, Turbo-HUFA bổ sung trong thức ăn ở nồng độ cao (4 và 6 mL) đã giúp bổ sung đầy đủ DHA và EPA bị cạn kiệt sau mỗi lần đẻ trứng ở tôm cái đảm bảo đủ thời gian cho buồng trứng đạt giai đoạn IV để xảy ra sự lột xác tiền giao vỹ và đẻ trứng.
Như vậy, có thể thấy rằng sự bổ sung nồng độ HUFA khác nhau trong khẩu phần thức ăn (2 mL, 4 mL, 6 mL) tác động không rõ rệt lên thời gian tái phát dục, đẻ trứng và lột xác của tôm cái giả tái phát dục.
4.2.4. Sự phát triển của buồng trứng ►Sự biến động chiều dài buồng trứng
Qua các đồ thị hình 22 (a,b,c,d) cho thấy sự biến động chiều dài buồng trứng tôm cái xảy ra rất lớn ở tất cả các nghiệm thức bổ sung HUFA trong khẩu phần thức ăn và qua các lần tái phát dục khác nhau trong cùng nghiệm thức thí nghiệm. Trong đó, chiều dài buồng trứng phát triển nhanh từ ngày thứ 1 đến ngày thứ 7 và giảm có dấu hiệu suy thoái ngày 11-14 và tiếp tục tăng ở ngày thứ 17- 20 và đẻ trứng ở các nghiệm thức 6mL HUFA
Hình 22: Sự phát triển buồng trứng của tôm cái qua các lần tái dục ở các nghiệm thức bổ sung nồng độ 2 mL (a), 4 mL (b), 6 mL (c) HUFA và đối chứng (d).
(a) 0 1 2 3 4 5 1 3 5 7 9 11 12 14 17 20 23 26 ngày chiều dài bu ồng tr ứng (c m) lần 4 lần 5 lần 6 (b) 0 1 2 3 4 1 3 5 7 9 11 14 18 20 23 26 ngày chiều dài b uồng trứng (cm) lần 4 lần 5 Lần 6 (c) 0 1 2 3 4 1 3 5 7 9 11 14 17 21 23 26 29 ngày chiều dài b uồng trứn g (cm ) lần 4 lần 5 lần 6 (d) 0 1 2 3 4 1 3 5 7 11 14 18 21 23 26 29 32 ngày chiều d ài buồn g trứng (cm) lần 4 lần 5 lần 6
và đối chứng (hình 10c và 10d) với liều HUFA cao nhất và không bổ sung HUFA. Số lần tái dục của tôm càng xanh cái giả cũng cho thấy sự biến động chiều dài buồn trứng rõ rệt. Trong đó tôm sinh sản lần thứ 4 ( bắt đầu bổ sung HUFA) biến động cao có thời điểm bị suy thoái trong các nghiệm thức bổ sung thức ăn khác nhau như hình 10a,10b,10c. Song song với các lần sinh sản lần thứ 5 – 6 sự biến động buồng trứng giảm có xu thế tăng dần theo thời gian (10a,10b,10c). Điều này có thể giải thích rằng sự can thiệp HUFA vào khẩu phần thức ăn có liên quan đến sự phát triển buồng trứng, bằng chứng cho thấy mức độ biến động chiều dài buồng trứng ở nghiệm thức bổ sung 4 mL HUFA ít nhất khi so sánh với nghiệm thức đối chứng (p<0,05). Bên cạnh đó khi bổ sung hàm lượng HUFA cao nhất cũng gây biến động lớn đến sự phát triển buồng trứng.
Các nghiệm thức có bổ sung HUFA đều thể hiện rõ sự phát triển buồng trứng ở lần sau tốt hơn lần trước trong khi ở nghiệm thức đối chứng chiều dài buồng trứng có xu hướng giảm và biến động chiều dài nhiều hơn ở các lần tái phát dục sau. Điều đó chứng tỏ DHA và EPA trong HUFA bổ sung vào thức ăn đã cung cấp cho cơ thể các chất cần thiết để tích lũy và phát triển tuyến sinh dục tốt. Quá trình sinh sản có ảnh hưởng nhất định lên thành phần sinh hóa của tôm cái, nhất là hàm lượng lipid luôn bị giảm đáng kể sau khi sinh sản [3]. Những nghiên cứu khác cũng cho thấy DHA và một số acid béo khác có thể đã được sử dụng như một nguồn năng lượng trao đổi chất, cụ thể trong suốt quá trình thành thục sinh dục, 62,5% lượng DHA đã sử dụng như nguồn năng lượng cho hoạt động của cơ thể (Clarke và ctv.,1990). Đó cũng là lí do khiến cho hàm lượng các acid béo này giảm mạnh sau khi sinh sản [33]. Vì vậy thức ăn tôm mẹ tái phát dục có bổ sung DHA và EPA sẽ bù đắp lại phần DHA và EPA đã bị cạn kiệt đảm bảo sự phát triển liên tục của buồng trứng đồng thời tăng cường sức chống chịu của cơ thể, giảm thiểu những tác động bên ngoài đến sự hình thành và tăng trưởng chiều dài buồng trứng của tôm mẹ. Kết quả thí nghiệm cho thấy bổ sung HUFA có chứa DHA và EPA với nồng độ 4 mL HUFA/kg thức ăn giúp buồng trứng hình thành và phát triển tốt nhất ở tôm cái giả tái phát dục.
►Tốc độ phát triển của chiều dài buồng trứng tôm cái qua các giai đoạn Bảng 9: Tốc độ phát triển các giai đoạn buồng trứng tôm cái ở các nghiệm thức.
Tốc độ phát triển chiều dài buồng trứng tôm mẹ ở các nghiệm thức (cm/ngày) Giai đoạn 2 mL 4 mL 6 mL Đối chứng I-II 0,20b 0,28a 0,14b 0,19b III 0,21ab 0,21ab 0,16b 0,25a IV 0,15a 0,15a 0,04b 0,06b
Ở bảng 9 cho thấy sự ảnh hưởng khác biệt của nồng độ HUFA bổ sung trong thức ăn đối với tốc độ phát triển chiều dài của buồng trứng tôm cái. Giai đoạn đầu (I-II), nghiệm thức bổ sung 4 mL HUFA có tốc độ phát triển chiều dài của tôm cái nhanh nhất (0,28 cm/ngày) và nghiệm thức đối chứng thấp nhất (0,19 cm/ngày) và sự khác biệt có ý nghĩa (p<0,05). Tuy nhiên, sang giai đoạn III, tốc độ phát triển của buồng trứng trung bình từ 0,16-0,25 cm/ngày, tương đương giữa nghiệm thức bổ sung 2 và 4 mLHUFA (0,21 cm/ngày) và có sự khác biệt có ý nghĩa (p<0,05) giữa nghiệm thức bổ sung 6 mL HUFA (0,16 cm/ngày) và nghiệm thức đối chứng (0,25 cm/ngày). Đến giai đoạn IV, tôm cái ở tất cả các nghiệm thức đều có sự suy giảm tốc độ phát triển chiều dài buồng trứng, rõ nhất là ở nghiệm thức bổ sung 6 mL HUFA và đối chứng (chỉ còn 0,04 và 0,06 cm/ngày trong khi hai nghiẹm thức còn lại vẫn còn ở mức 0,15 cm/ngày) và sự khác biệt có ý nghĩa (p<0,05) Theo Cacalli và cộng sự (1999), tôm bố mẹ ăn thức ăn có bổ sung HUFA thì sẽ làm ảnh hưởng đến hàm lượng HUFA của trứng [21]. Teshima và ctv. (1994) cho biết sự phát triển và thành thục của buồng trứng ở tôm Penaeus seitferus và Penaeus japonicus phụ thuộc vào lượng acid béo trong thức ăn. Hơn nữa, các acid béo là thành phần cấu tạo nên màng của tế bào và đóng vai trò quan trọng chủ yếu trong việc tích lũy năng lượng cho quá trình phát triển buồng trứng. Ở tôm Penaeus japonicus, hàm lượng lipid tích lũy trong buồng
trứng tăng từ lúc chưa thành thục và đạt cực đại khi buồng trứng chín muồi rồi giảm nhanh sau khi đẻ [21]. Như vậy, có thể thấy dinh dưỡng kém (đối chứng) sẽ ức chế sự tái phát triển của buồng trứng hoặc không đảm bảo tốc độ phát triển của buồng trứng tôm cái khi tái phát dục. Tuy nhiên, khi bổ sung nồng độ các chất dinh dưỡng quá cao (6 mL HUFA) cũng có tác động làm giảm sự phát triển buồng trứng so với các nồng độ thấp hơn. Với kết quả này khá giống các kết quả nghiên cứu trước đó. Nồng độ cao HUFA bổ sung trong thức ăn đã cung cấp dinh dưỡng cần thiết đủ cho quá trình phát triển của buồng trứng, đảm bảo sự tái phát dục tốt hơn sau mỗi lần đẻ trứng cũng như hạn chế những tác động bất lợi bên ngoài (môi tr ường biến động, stress,…). Bên cạnh, sự chi phối điều khiển của cơ quan đặc biệt ở cuống mắt tôm có thể dẫn đến sự lột xác trước khi buồng trứng phát triển đến giai doạn IV và buồng trứng cũng xuống giai I-II. Đây là một điểm cần quan tâm để có thể rút ngắn thời gian tái phát dục của tôm mẹ và đảm bảo cho sự phát triển buồng trứng ổn định liên tục trong thời gian nuôi vỗ.
Sự phát triển của buồng trứng tôm cái khi nuôi vỗ tái phát dục về chiều dài có thể theo dõi qua hình 23, tương tự như Nguyễn Thanh Ph ương (2003) đã mô tả [8]:
giai đoạn IV
giai đoạn I
giai đoạn I- II
giai đoạn II giai đoạn II-III
giai đoạn III giai đoạn III-IV
giai đoạn IV-lột xác
4.3. Tỷ lệ tái phát dục và đẻ trứng