Phương pháp theo dõi thời gian tái phát dục, đẻ trứng, lột xác và sự phát triển của buồng trứng tôm mẹ:
Mỗi bể đặt 3 giỏ nhựa có thả 2 con tôm cái vừa ấp nở hết trứng và chưa tái phát triển tuyến sinh dục. Các chế độ chăm sóc quản lý giống như tôm thả nuôi thí nghiệm trong bể. Định kỳ 3 ngày/lần kéo giỏ nhựa lên quan sát theo dõi sự phát triển của tuyến sinh dục ở giáp đầu ngực của tôm cái theo phương
pháp của Nguyễn Thanh Phương (2003) [8]. Khi thấy bắt đầu có tuyến sinh dục thì ghi ngày để tính thời gian tái phát dục. Sau đó, tiếp tục theo dõi đo kích thước buồng trứng và tính thời gian phát triển tương ứng với từng giai đoạn. Chiều dài buồng được đo từ điểm cuối khoang giáp đầu ngực ngược trở lên hướng chủy (thước đặt song song và đọc theo chiều mũi tên AB hình 13). Khi
tôm lột xác thì ghi thời gian để tính thời gian lột xác và khi tôm mẹ đẻ trứng thì cũng ghi thời gian đẻ trứng.
Phương pháp xác định tỷ lệ tái phát dục, tỷ lệ đẻ:
Định kỳ 14 ngày/lần rút cạn nước trong bể vệ sinh chà bể và kiểm tra số lượng tôm mang trứng và tôm tái phát dục. Tôm tái phát dục được tính bằng tổng số tôm cái mang trứng, vừa chớm hoặc đang có tuyến sinh dục ở giáp đầu ngực.
Tỷ lệ tái phát dục (%) = (số tôm tái phát dục/số tôm thí nghiệm) x100. Tỷ lệ đẻ (%)=(số tôm mang trứng/ số tôm thí nghiệm)x100.
Phương pháp đánh dấu mắt tôm:
Tôm cái đẻ ở lần đầu trong thí nghiệm sẽ cột dây nylon màu ở cuống mắt để đánh dấu lần đẻ này và màu dây ứng với các nghiệm thức là: 2 mL-dây xanh, 4 mL-dây đỏ, 6 mL-dây đen, đối chứng-dây vàng. Sau đó, ở những lần sinh sản tiếp theo, nếu tôm đã cột dây tiếp tục đẻ thì sẽ tiếp tục đánh dấu bằng sợi nylon cùng màu với lần trước. Dựa vào số dây để tính số lần đẻ/con tôm cái.
Phương pháp xác định sức sinh sản tôm mẹ:
Chọn 3 con tôm cái mang trứng màu vàng cam (hình 14) cùng màu, bụng đầy trứng ở mỗi lô đem cân khối lượng cơ thể (m1) rồi đưa vào bể ấp riêng theo từng nghiệm thức.
Đồng thời lấy 0,03 g trứng (lấy 3 mẫu ở 3 vị trí khác nhau của buồng trứng, mỗi mẫu 0,01 g) sử dụng cân có độ chính xác 0,01 g để lấy mẫu cho vào đĩa petri, dùng pipet
A B
Hình 13: Cách đo chiều dài buồng trứng tôm cái.
đư
ờng kính
B
A
Hình 15: Phương pháp đo đường kính trứng.
nhỏ vài giọt nước vào mẫu trứng đếm số trứng, lấy kết quả trung bình (N1 trứng). Sử dụng 3 cá thể cho mỗi nghiệm thức.
Sau khi trứng nở hết, đem 3 tôm mẹ trên cân lại để biết khối lượng tôm mẹ (m2) và đếm số ấu trùng (M) tương ứng. Các chỉ tiêu sức sinh sản cụ thể như sau:
♠ Sức sinh sản tuyệt đối tính bằng tổng số trứng trên một con tôm cái một lần đẻ.
♠ Sức sinh sản tương đối tính bằng số trứng trên một gam khối lượng cơ thể tôm mẹ.
♠ Sức sinh sản thực tế tính bằng số ấu trùng trên một gam khối lượng cơ thể tôm mẹ. Phương pháp đo đường kính trứng:
Lấy ngẫu nhiên 10 trứng trên 1 buồng trứng rồi đo đường kính từng trứng bằng kính hiển vi soi nổi ở độ phóng đại 20, lặp lại 3 lần và tính kết quả trung bình (hình 15).
Phương pháp xác định khối lượng ướt của trứng:
-Chọn tôm cái mang trứng đầy, trứng màu vàng cam (mới đẻ), chọn 3 con/nghiệm thức.
-Dùng kim mũi giáo tách và kéo cắt lấy 3 mẫu trứng/buồng trứng ở các vị trí khác nhau và lấy 0,01 g/mẫu trứng (dùng cân điện tử cân mẫu trứng).
-Đặt các mẫu trứng trên đĩa petri, nhỏ lên một ít nước sạch cho trứng rời nhau dùng kim tách nhẹ trứng và đếm tổng số lượng trứng ở mỗi mẫu.
-Lặp lại ba lần cách lấy mẫu và đếm trứng như trên, lấy kết quả để tính giá trị trung bình khối lượng ướt của mỗi trứng ở từng nghiệm thức.
Hình 14: Tôm cái mang trứng vàng cam (mới đẻ).
Phương pháp ấp nở và định lượng ấu trùng:
Tôm mẹ mang trứng được chuyển vào bể ấp nở riêng biệt ứng với các nghiệm thức khác nhau và được thuần hoá độ mặn dần đến 12‰. Hàng ngày kiểm tra thấy trứng tôm chuyển sang màu xám đậm (hình 16) đưa tôm ra thau nhựa 60 L tắm formalin 20-25 ppm sau 30 phút chuyển vào thùng nhựa 160 L sục khí liên tục, độ mặn 12‰,pH=7.5-8.0, nhiệt độ: 29-30oC (hình 17).
Sau 2 ngày trứng đã nở hết thành ấu trùng thì dùng vợt thu hết ấu trùng cho vào 1 lít nước lợ sạch, trộn nhẹ cho ấu trùng phân tán đều, dùng cốc thuỷ tinh 120 mL lấy mẫu 3 lần ở những vị trí khác nhau rồi đếm số ấu trùng trong mỗi mẫu, lấy kết quả trung bình và tính số ấu trùng tổng số đã thu được.
Phương pháp kiểm tra chất lượng ấu trùng [28] (trao đổi riêng):
Ấu trùng một ngày tuổi được đánh giá chất lượng bằng cách xác định nồng độ ammonia gây chết 50% số ấu trùng thí nghiệm sau 24 giờ thử (24h-LC50) (phương pháp Trimmed Spearman Karber).
Cách pha dung dịch sốc ấu trùng:
-Lấy 300 mg NaHCO3 hoà tan vào 1 L nước cất được dung dịch A.
-Lấy 2,93 g NH4Cl hoà tan vào 1 L dung dịch A được dung dịch NH4+-N 1000 ppm (dung dịch B) (coi như bằng nồng độ ammonia tổng số, kí hiệu: TAN).
Khi cần sốc ấu trùng kiểm tra chất lượng trong dung dịch ammonia nồng độ x ppm thì chỉ cần lấy x mL dung dịch B pha vào 1 L nước lợ sạch độ mặn 12‰ là được dung dịch thử có nồng độ như mong muốn.Với ấu trùng 1 ngày tuổi nồng độ TAN test là 0, 5, 10, 15, 20 ppm.
Hình 16: Tôm cái mang trứng
Cách bố trí thí nghiệm:
Các tô nhựa dung tích 600 mL được đổ 500 mL dung dịch test theo các nồng độ thử với ba lần lặp lại. Sau đó khoảng 30 phút thì bố trí vào mỗi tô 30 ấu trùng và dùng máy đo pH để ghi lại pH ban đầu. Các tô để nơi thoáng mát, nhiệt độ 29-30oC.
Sau 24 giờ kể từ khi bố trí thí nghiệm ấu trùng vào tô thì tiến hành lấy kết quả thí nghiệm bằng cách đo pH và đếm số ấu trùng chết. Ấu trùng chết là ấu trùng không còn phản ứng trước những kích thích cơ học và các phụ bộ [28]. Nếu tỷ lệ chết của ấu trùng ở nghiệm thức đối chứng (0 ppm) lớn hơn 10% thì không lấy kết quả của lần thí nghiệm đó.