được ở chĩ nuơi tại thành phố Buơn Ma Thuột.
Mẫu sau khi nuơi cấy trên mơi trường chuyên biệt được tiến hành giám định Salmonella bằng các phản ứng sinh hố, chọn những chủng cĩ các phản ứng sinh hố đặc trưng trong mơi trường KIA, tiến hành xác định serotype của các chủng Salmonella bằng hệ thống định danh vi khuẩn Vitek-2. Kết quả định danh được chúng tơi thống kê tại bảng 3.7
Bảng 3.7. Kết quả xác định serotype các chủng Salmonella
S T T Serotype Salmonella (Xếp theo a,b,c..) Nguồn gốc
Chĩ khoẻ mạnh (n= 30) Chĩ bị tiêu chảy (n= 30)
Số mẫu (+) Tỷ lệ (%) Số mẫu (+) Tỷ lệ (%) 1 S. adelaide 1 33,33 0 0,00 2 S. agona 2 6,67 0 0,00 3 S. anatum 3 10,00 1 3,33 4 S. derby 1 3,33 2 6,67 5 S. dublin 3 10,00 5 16,67 6 S. enteritidis 5 16,67 7 23,33 7 S. give 1 3,33 0 0,00 8 S. infantis 1 3,33 1 3,33 9 S. manhattan 2 6,67 1 3,33 10 S. saintpaul 1 3,33 0 0,00 11 S. tallahassee 1 3,33 1 3,33 12 S. thomson 2 6,67 0 0,00 13 S. typhymurium 7 23,33 12 40,00
Hình 3.3. Hệ thống định danh vi khuẩn Vitek-2
Bộ card định danh vi khuẩn Gram (-) sử dụng cho hệ thống Vitek-2
Máy xác định nồng độ vi khuẩn McFarland và hệ thống Vitek-2
Với 30 chủng phân lập được từ chĩ khoẻ mạnh; qua kết quả định danh thấy cĩ 13 serotype salmonella gồm: S. adelaide, S. agona, S. anatum, S. derby, S. dublin, S. enteritidis, S. give, S. infantis, S. manhattan, S. saintpaul, S. tallahassee, S. thomson, S. typhymurium xuất hiện với các tỷ lệ khác nhau.
Trong đĩ S. typhymurium xuất hiện với tỷ lệ cao nhất (7/30 chủng) chiếm 23,33%; tiếp đến S. enteritidis (5/30 chủng) chiếm tỷ lệ 16,67%; với (3/30 chủng) chiếm tỷ lệ 10% là tỷ lệ xuất hiện của S. anatum và S. dublin; tương tự, chiếm tỷ lệ 6,67% (2/30 chủng) là tỷ lệ xuất hiện của S. agona và S. manhattan; các chủng S. adelaide, S. derby, S. give, S. infantis, S. saintpaul, S. tallahassee cĩ tỷ lệ xuất hiện thấp với (1/30 chủng) chiếm tỷ lệ 3,33%.
Ở chĩ mắc hội chứng tiêu chảy, với 30 chủng phân lập được, tiến hành định danh cũng cho thấy cĩ sự xuất hiện với các tỷ lệ khác nhau của các serotype Salmonella; 8 serotype Salmonella được tìm thấy là: S. anatum, S. derby, S. dublin, S. enteritidis, S. infantis, S. manhattan, S. tallahassee, S. typhymurium. Xuất hiện cao nhất là S. typhymurium với (12/30 chủng) chiếm
tỷ lệ 40,00%; tiếp đến S. enteritidis với (7/30 chủng) chiếm tỷ lệ 23,33%; S. dublin với (5/30 chủng) chiếm tỷ lệ 16,67%; Salmonella derby cĩ tỷ lệ xuất
hiện thấp (2/30 chủng) với tỷ lệ 6,67%; thấp hơn cả là sự cĩ mặt của S. anatum,
S. infantis, S. manhattan, S. tallahassee với (1/30 chủng), chiếm tỷ lệ 3,33%.
Các chủng Salmonella như: S. adelaide, S. agona, S. give, S. saintpaul,
S. thomson, được tìm thấy ở chĩ khoẻ mạnh nhưng khơng tìm thấy ở chĩ mắc
hội chứng tiêu chảy. Kết quả tại bảng 3.7 cịn cho thấy, ở chĩ mắc hội chứng tiêu chảy các serotype Salmonella: S. typhymurium, S. enteritidis và S. dublin
xuất hiện với tỷ lệ cao, điều này cĩ thể khẳng định chúng cĩ một vai trị nhất định trong hội chứng tiêu chảy ở chĩ nuơi trên địa bàn và trong thời điểm chúng tơi nghiên cứu.
Những nghiên cứu tại một số nước trên thế giới được chúng tơi trích dẫn dưới dạng phụ bảng trong phần phụ lục để chứng minh cho sự phong phú của các chủng Salmonella phân lập được ở chĩ nuơi: Tại Đức số chủng Salmonella được tìm thấy ở chĩ là 19 chủng (Fưrster et al, 1974) [49]; tại Iran 20 chủng (Shimi et al, 1976)[70]; tại Ireland 11 chủng (Quinn et al, 1986 – 1996)[67]; tại Nam Mỹ 09 chủng (Venter, 1988)[76]; tại Ukraina 22 chủng (Neil et al, 1981)[63] và 60 chủng được tìm thấy ở chĩ nuơi tại Mỹ (Bruner and Moran, 1949 [43]; Adler et al, 1951 [38]; Ball M. R., 1951 [39]; Gorham and Garner, 1951 [52]; Galton et al, 1952 [51]; Uhaa et al, 1988 [75]).
Nhiều tác giả trong nước khi nghiên cứu trên các lồi vật nuơi khác cho rằng: Salmonella typhymurium xuất hiện nhiều trên bị và lợn. Theo Đỗ Trung Cứ, (2004)[3] khi nghiên cứu ở lợn nuơi tại một số tỉnh phía Bắc đã xác định
100% lợn bị nhiễm bệnh do Salmonella typhymurium gây ra.
Trần Xuân Hạnh (1995)[9], khi phân lập vi khuẩn từ lợn 2-4 tháng tuổi đã xác định: cĩ 6 serotype Salmonella được tìm thấy ở các tỷ lệ khác nhau là
S. choleraesuis, S. derby, S. typhymurium, S. london và S. newport.
Nguyễn Quang Tuyên, (1996)[34] nghiên cứu trên trâu, bị, bê, nghé nuơi tại một số tỉnh phía Bắc đã xác định các serotype Salmonella được tìm thấy ở đàn vật nuơi này bao gồm: S. dublin, S. enteritidis, S. typhymurium và
S. choleraesuis.
Kết quả của Nguyễn Thị Oanh (2003)[25], trong nghiên cứu tình hình nhiễm và một số yếu tố gây bệnh của vi khuẩn Salmonella ở vật nuơi tại
DakLak cho biết các serotype Salmonella được tìm thấy: ở lợn gồm S. choleraesuis, S. typhymurium và S. enteritidis; ở trâu và bị gồm S. dublin, S. enteritidis; ở nai gồm cĩ S. enteritidis, S. typhymurium và 1 chủng S. enteritidis được tìm thấy ở voi.
Hiện tại, trong nước chúng tơi chưa tham khảo được tài liệu nào nghiên cứu về sự xuất hiện các serotype Salmonella phân lập được ở chĩ nuơi; theo chúng tơi cĩ lẽ, tuy chĩ là lồi vật nuơi trung thành, luơn gần gũi với con người nhưng khi điều kiện đời sống kinh tế của người dân cịn cĩ những khĩ khăn nhất định, sự quan tâm chăm sĩc nuơi dưỡng đối với lồi vật nuơi này cũng chưa được chú trọng; hơn nữa chúng khơng phải là một lồi vật nuơi mang giá trị hàng hố …. Tuy nhiên việc nghiên cứu các serotype Salmonella cĩ mặt trong đường tiêu hố của lồi vật nuơi này là cần thiết bởi chĩ là lồi vật nuơi thường xuyên tiếp xúc với con người và các loại vật nuơi khác; để từ đĩ chúng ta cĩ một cách nhìn đúng đắn hơn trong vấn đề nuơi dưỡng và phịng chống bệnh do Salmonella gây ra cho lồi vật nuơi này.
Điều đáng quan tâm ở đây, ngồi S. typhymurium và S. enteritidis thì
S. dublin là một serotype cũng chiếm tỷ lệ cao trong các chủng Salmonella
nhận tại bảng 3.7 cũng đã cho thấy S. enteritidis chiếm tỷ lệ khá cao trong các chủng Salmonella phân lập được ở chĩ khoẻ mạnh và chĩ mắc hội chứng tiêu chảy. Salmonella enteritidis là một trong những serotype gây chứng ngộ độc thức ăn; do vậy, theo chúng tơi cần đặc biệt chú ý hơn nữa trong vấn đề vệ sinh an tồn thực phẩm khi mà thịt và một số sản phẩm khác của lồi vật nuơi này lại được một số người dân của nước ta ưa chuộng nhằm hạn chế sự gieo rắc mầm bệnh, giảm thiểu ơ nhiễm mơi trường, bảo vệ sức khoẻ cộng đồng.
Như chúng ta đã biết, vi khuẩn Salmonella cĩ rất nhiều serotype, độc
lực của các serotype lại phụ thuộc vào các yếu tố gây bệnh. Ở mỗi serotype, các yếu tố gây bệnh quyết định thể bệnh cấp tính hay mãn tính ở các lồi động vật cảm nhiễm; song vai trị gây bệnh của một chủng nào đĩ chỉ được cơng nhận sau khi tiến hành thử độc lực.
3.6. Kiểm tra độc lực của vi khuẩn Salmonella phân lập được
Kết quả được trình bày tại bảng 3.8.
Bảng 3.8. Kết quả xác định độc lực các chủng Salmonella
Các serotype
Samonella
thí nghiệm
Số chuột chết qua các thời gian theo dõi
(tính theo tỷ lệ cộng dồn) Tổng số chuột chết (con) Đến 12h Đến 24h Đến 36h Đến 48h n (%) n (%) n (%) n (%) S. typhymurium 2 50,00 3 75,00 3 75,00 4 100,00 12 S. enteritidis 2 50,00 4 100,00 4 100,00 4 100,00 14 S. dublin 1 25,00 2 50,00 3 75,00 4 100,00 10
Trong số các chủng Salmonella được tìm thấy ở chĩ mắc hội chứng
tiêu chảy, chúng tơi chọn 3 chủng xuất hiện với tỷ lệ cao là: S. typhymurium,
S. enteritidis và S. dublin để tiến hành thử độc lực bằng phương pháp tiêm
Hình 3.4. Kiểm tra độc lực các chủng Salmonella trên chuột nhắt trắng
Chuột ủ rũ, chụm lại với nhau Bệnh tích mổ khám
Các chủng lựa chọn được bồi dưỡng trong mơi trường BHI ở 370C, sau 24 giờ. Mỗi chủng tiến hành tiêm cho 4 chuột, mỗi chuột tiêm 0,5 ml canh trùng ở nồng độ 5x105 vi khuẩn/1ml vào xoang bụng, theo dõi các biểu hiện ở chuột thí nghiệm, xác định số chuột chết ở các thời điểm 0-12giờ, sau 12-24 giờ, sau 24-36 giờ và sau 36-48 giờ; tiến hành mổ khám, mơ tả bệnh tích và phân lập vi khuẩn.
Qua theo dõi, chúng tơi nhận thấy khả năng giết chết chuột của 3 chủng
Salmonella được tiến hành thí nghiệm khá cao, 100% chuột bị giết chết trong vịng 48 giờ sau khi tiêm; trong đĩ chủng Salmonella enteritidis giết chết 100% chuột thí nghiệm trong vịng 24 giờ; tiếp đến chủng Salmonella typhymurium giết chết 75% chuột và thấp nhất là Salmonella dublin, chỉ giết chết 50% chuột thí nghiệm trong 24 giờ sau khi tiêm canh trùng.
Như vậy, kết quả tại bảng 3.8 đã cho thấy trong các chủng tiến hành thí nghiệm, chủng cĩ độc lực cao nhất là Salmonellaenteritidis với tổng số chuột bị giết chết đến 48 giờ sau khi tiêm canh trùng là 14 chuột; tiếp đến
Salmonella typhymurium với 12 chuột bị giết chết, sau cùng là Salmonella dublin với 10 chuột bị giết chết.
theo dõi được những biểu hiện của chuột sau khi tiêm canh khuẩn: chuột ủ rũ, lơng xù, run rẩy, đi lại chậm chạp, bỏ ăn hoặc ăn kém, đau bụng, đứng tụm lại với nhau, tiêu chảy phân cĩ máu.
Ở những chuột chết, chúng tơi mổ khám và ghi nhận được bệnh tích như sau: Gan sưng, cĩ những điểm xuất huyết trên bề mặt; các hạch đều bị sưng và xuất huyết; ruột xuất huyết; thận sưng, nhão; xung quanh chỗ tiêm thuỷ thủng, nhầy; các bệnh tích đặc trưng do Salmonella gây ra.
Tiến hành phân lập vi khuẩn từ các mẫu bệnh phẩm chuột, chúng tơi đều tìm thấy Salmonella với các đặc trưng trên mơi trường nuơi cấy.
Như vậy, vi khuẩn Salmonella trong các mẫu xét nghiệm, đã được phân lập, giám định bước đầu đã xác nhận được vai trị của chúng trong hội chứng tiêu chảy ở chĩ nuơi tại thành phố Buơn Ma Thuột. Vi khuẩn Salmonella gây ra quá trình bệnh lý bằng các yếu tố gây bệnh là độc tố và các yếu tố gây bệnh khơng phải là độc tố. Bằng những cơ chế và phương thức tác động khác nhau, các yếu tố khơng phải là độc tố đã tạo điều kiện bất lợi cho cơ thể vật chủ, đồng thời tạo điều kiện thuận lợi để vi khuẩn phát triển, gây bệnh.