miễn dịch trong máu bệnh nhân lao phổi
Nguyên lý của kỹ thuật đếm dòng chảy tế bào với máy flow cytometry dựa trên nguyên lý sử dụng các thành phần kháng thể có trong bộ thuốc thử có khả năng gắn kết đặc hiệu với các dấu ấn kháng nguyên đặc hiệu tế bào: Khi cho thuốc thử vào máu toàn phần thì các kháng thể đã gắn sẵn chất màu huỳnh quang trong thuốc thử sẽ gắn kết đặc hiệu với các kháng nguyên đặc hiệu tế bào trên bề mặt tế bào bạch cầu. Trong quá trình tiếp nhận, các tế bào này đi qua nguồn sáng phát ra và phân tán các tia laser. Các tế bào đã đƣợc gắn kết đặc hiệu sẽ phát quang, những tín hiệu phân tán và phát huỳnh quang đƣợc phát hiện bởi một bộ phận đọc nhận biết thông tin về kích thƣớc của các tế bào, tính phức tạp trong tế bào và cƣờng độ huỳnh quang phát ra tƣơng ứng.
a) Kháng thể kháng CD3 phản ứng với chuỗi ɛ của kháng nguyên CD3/phức
hợp thụ thể kháng nguyên của tế bào T (TCR). Kháng nguyên CD3 có ở các tế bào lympho T (chiếm từ 61%-85% các tế bào lympho trong máu ngoại vi bình thƣờng).
39
b) Kháng nguyên CD16 và CD56 đều là những dấu ấn xác định của quần thể
tế bào diệt tự nhiên (Natural killer – NK). Kháng thể kháng CD16 nhận diện một kháng nguyên của tế bào NK ngƣời, có trọng lƣợng phân tử từ 50-70 kDa, đó là một thụ thể Fc dành cho IgG. Kháng thể kháng CD56 nhận diện một chuỗi domain giống Ig (Immunoglobulin) ngoại bào (mà phổ biến có 3 thể với trọng lƣợng phân tử là Mr 120, 140 và 180 kDa) của phân tử kết dính thuộc tế bào thần kinh (NCAM).
c) Kháng nguyên CD4 có trọng lƣợng phân tử là Mr 55 kDa, có ở quần thể tế
bào lympho T giúp đỡ (T helper – Th), một dƣới nhóm của tế bào lympho
T (CD3+CD4+), chiếm từ 28-58% tổng số bạch cầu lympho trong máu
ngoại vi, kháng nguyên này có mật độ thấp trên bề mặt và trong bào tƣơng tế bào bạch cầu đơn nhân.
d) Kháng thể kháng CD19 nhận diện một kháng nguyên có trọng lƣợng là 90
kDa trên tế bào lympho B ngƣời. Kháng nguyên CD19 có khoảng 7-23% tổng số lympho bào trong máu ngoại vi và ở tế bào lách. Chúng hiện diện ở các tế bào lympho B trong tất cả các giai đoạn trƣởng thành của nó. Kháng thể kháng CD19 không phản ứng với các tế bào lympho T đang hoạt hóa hay nghỉ ngơi, bạch cầu hạt và bạch cầu đơn nhân.
e) Kháng nguyên CD8 đƣợc biểu lộ là một tiểu đơn vị α, có trọng lƣợng phân
tử 32 kDa của phức hợp hai phân tử đƣợc gắn kết bằng cầu nối disulfide, kháng nguyên này có trên tế bào lympho T gây độc (cytotoxic T cell – Tc), một dƣới nhóm thứ 2 của tế bào lympho T. Cũng nhƣ trên tế bào NK. Kháng nguyên CD8 đƣợc thấy có từ 19-48% tổng số tế bào lympho trong máu ngoại vi bình thƣờng và từ 60-85% tổng tế bào tuyến ức bình thƣờng. Các kháng thể kháng CD3, CD16, CD45, CD19, CD4 và CD8 gồm có những chuỗi nặng γ1 và những chuỗi nhẹ κ của chuột, riêng kháng thể kháng CD56 gồm có những chuỗi nặng là γ2b và những chuỗi nhẹ κ của chuột (User manual Becton, Dickinson and company, bdbiosciences.com)
40
Chƣơng 3: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU