Nghiên cứu sử dụng bộ kit “The Gold QuantiFERON ®-TB” chia làm 2 bước:
Bước 1
Ủ tế bào đơn nhân máu ngoại vi (mẫu máu toàn phần) trong ống nghiệm có sẵn môi trường nuôi tế bào và kháng nguyên đặc hiệu vi khuẩn lao ESAT-6 và CFP-10. Thời gian ủ kéo dài từ 16 – 24 giờ, quá trình này làm cho các tế bào đơn nhân máu ngoại vi (chủ yếu là các lympho T) tiếp xúc với kháng nguyên đặc hiệu. Nếu cơ thể đã nhiễm vi khuẩn lao, các tế bào này sẽ nhận diện được các kháng nguyên và bị hoạt hóa làm tiết ra IFN-γ và một số cytokin khác.
Sơ đồ 2.1. Ủ tế bào đơn nhân [45]
nguyên ở đại thực bào
Bước 2
Sử dụng kỹ thuật ELISA để phát hiện và định lượng lượng IFN-γ có trong phần nước nổi nuôi tế bào. Nồng độ IFN-γ là bằng chứng cho thấy có đáp ứng miễn dịch trung gian tế bào in vitro đối với các kháng nguyên vi khuẩn lao; cho thấy chính cơ thể đó đã nhiễm vi khuẩn lao.
Quy trình thực hiện có kèm mẫu chứng âm và chứng dương cho mỗi mẫu máu.
2.3.1.2.Quy trình kỹ thuật
Lấy mẫu, nuôi tế bào
Lấy 3 ml máu tĩnh mạch (như quy trình lấy máu tĩnh mạch thường quy) Bơm mỗi 1ml máu vào 3 ống nghiệm:
Ống 1: Ống N (Chứng âm), không chứa kháng nguyên, chỉ có chất chống đông, môi trường nuôi cấy và lớp gel phân cách (màu xám, ký hiệu Nil)
Ống 2: Ống M (Chứng dương) có chất phân bào, môi trường nuôi cấy và lớp gel phân cách (màu đỏ, ký hiệu M) và chất chống đông.
Ống 3: Ống A (Mẫu thử), chứa kháng nguyên đặc hiệu vi khuẩn lao ESAT-6, CFP-10, TB7.7, môi trường nuôi cấy và lớp gel phân cách (màu xanh, ký hiệu A) và chất chống đông.
Sau khi bơm và mỗi ống 1 ml máu toàn phần, lắc nhẹ nhàng 10 lần, để hòa trộn chất chống đông và các vật chất trong ống nghiệm. Để ống nghiệm tư thế thẳng đứng vào giá ống nghiệm.
Ủ mẫu
- Chuyển các ống nghiệm để trên giá ở tư thế thẳng đứng, ủ trong tủ ấm 37oC. Giữ nguyên từ 16-24 giờ.
- Lấy phần nước nổi huyết tương cho vào ống nghiệm có ghi mã số bệnh phẩm, thực hiện kỹ thuật ELISA ngay hoặc có thể giữ -20oC trong vòng 3 tháng.