Quy trình thực hiện
Mẫu huyết tương sau ủ và toàn bộ hóa chất được để ở nhiệt độ phòng 1 giờ trước khi sử dụng.
Các giếng nhựa cũng được lấy ra để ở nhiệt độ phòng trước khi sử dụng, số lượng tương ứng với số mẫu.
Hòa tan các sinh phẩm đông khô với dung dịch hồi chỉnh theo đúng hướng dẫn của bộ hóa chất.
Pha các dung dịch chuẩn bằng dung dịch pha loãng GD (green diluent) gồm 4 nồng độ được ký hiệu như sau: S1: 4 IU/mL, S2: 1 IU/mL, S3: 0.25 IU/mL, và S4: 0 IU/m. Mỗi mẫu chứng nên dùng 2 giếng.
Sơ đồ 2.2. Pha các dung dịch chuẩn bằng dung dịch pha loãng [45] Hồi chỉnh cộng hợp với 0.3ml nước cất. Trộn đều cho đến khi tan hoàn
toàn. Khi dùng pha loãng dung dịch cộng hợp 100 lần trong dung dịch pha loãng. Dung dịch cộng hợp đậm đặc phải giữ ngay vào nhiệt độ 2-8
Huyết tương sau nuôi cấy cần được trộn đều, trước khi dùng. Cho vào mỗi giếng thử 50ul dung dịch cộng hợp đã pha loãng 100 lần và 50 µl huyết tương thử nghiệm.
Trộn đều các giếng trong 1 phút. Ủ ở nhiệt độ phòng (22 ±5) oC trong 2 giờ. Tránh ánh sáng.
Trong thời gian chờ ủ, pha loảng dung dịch rửa 20 lần. Thể tích nước rửa tương ứng với số giếng thử nghiệm. Mỗi giếng cần 400µl cho mỗi lần rửa và rửa 6 lần.
Chú ý: cần quan sát để chắc chắn rằng tất cả các giếng đều được rửa, thời gian ngâm giữa các chu kỳ là 5 giây.
Loại bỏ tất cả nước rửa bằng cách đập nhẹ đĩa lên giấy thấm ở vị trí úp giếng.
Thêm 100µl cơ chất vào mỗi giếng, lắc đều và ủ ở nhiệt độ phòng (22±5) oC trong 30 phút. Ủ trong tối.
Thêm vào mỗi giếng 50 µl dung dịch hãm phản ứng, trình tự thêm dung dịch dừng phản ứng vào các giếng nên làm theo trình tự ban đầu để bảo đảm thời gian phản ứng là giống nhau.
Đo độ hấp phụ ở bước sóng () 450nm và 620nm. Giá trị OD được sử
dụng để tính kết quả.