a. Định tính saponin
- Phản ứng tạo bọt
Pha mẫu thử trong cồn với một lƣợng thích hợp. Lấy 2 ống nghiệm: ống 1 cho vào 5 ml dung dịch NaOH 0,5N (pH 13), ống 2 cho 5 ml dung dịch HCl 0,1N (pH 1). Sau đó cho vào mỗi ống 5 ml dịch chiết mẫu thử. Lắc mạnh hai ống, nếu thấy có nhiều bọt và bền vững trong môi trƣờng kiềm là có mặt saponin steroid, còn nếu thấy có nhiều bọt và bền vững trong môi trƣờng acid là saponin triterpenoid.
- Phản ứng màu
Lấy vài mg mẫu cho vào ống nghiệm. Sau đó thêm 1 ml anhydric acetic và 1 giọt H2SO4 đặc. Kết quả nếu ống nghiệm có màu xanh có chứa saponin steroid, ống có màu đỏ có chứa saponin triterpenoid.
b. Định tính flavonoid
Mẫu thử đƣợc pha trong ethanol với một lƣợng thích hợp để làm các phản ứng: - Phản ứng Shinoda: Cho mẫu vào 2 ống nghiệm: ống 1 làm đối chứng, ống 2 nhỏ từ từ vài giọt HCl, thêm một chút bột Mg vào, để 1- 2 phút rồi đun nóng. Phản ứng dƣơng tính khi trong ống nghiệm xuất hiện màu đỏ tƣơi hay màu đỏ cam.
mutarotase
GOD
50
- Phản ứng với dung dịch kiềm NaOH 10%: cho mẫu vào 2 ống nghiệm: một ống làm đối chứng, ống kia cho thêm vài giọt NaOH 10%. Phản ứng cho màu vàng đậm là có mặt flavonoid.
- Phản ứng với dung dịch H2SO4 : tƣơng tự nhƣ đối với phản ứng NaOH 10%, phản ứng dƣơng tính khi cho màu vàng, đỏ, nâu đỏ.
c. Định tính alkaloid
Mẫu thử đƣợc pha trong dung dịch H2SO4 2-5% để làm các phản ứng:
- Phản ứng với thuốc thử Vans-Mayer (HgCl2 và KI trong nƣớc): alkaloid cho kết tủa trắng hay vàng nhạt.
- Phản ứng với thuốc thử Dragendorff (hỗn hợp Bi(NO3)3 và KI trong dung dịch acetic acid): alkaloid cho kết quả màu vàng cam cho đến đỏ.
d. Định tính tanin
- Phản ứng với vanillin: cho dung dịch mẫu vào 2 ống nghiệm, một ống đối chứng còn ống kia thêm vài giọt thuốc thử vanillin/H2SO4. Phản ứng dƣơng tính khi có màu đỏ đậm.
- Phản ứng với FeCl3: mẫu pha cồn nhỏ dung dịch FeCl3 1% nếu ống nghiệm có màu lục tía, xanh lam đen là dƣơng tính.
e. Định tính steroid: phản ứng Lieberman-Burchard
Hòa tan một lƣợng mẫu nhất định trong dung dịch chloroform chia làm 2 ống: + Ống 1: đối chứng
+ Ống 2: cho 1 ml dung dịch anhydric acetic và 1 ml dung dịch chloroform đã đƣợc làm lạnh ở 00C. Thêm một giọt H2SO4, kết quả dƣơng tính khi xuất hiện màu xanh, lục, hồng, da cam, đỏ bền.
f. Định tính glycoside: phản ứng Keller-Killian
Dung dịch A: 50 ml dung dịch acetic acid 10% và 0,5 ml dung dịch FeCl3 5% Dung dịch B: H2SO4 đặc và 0,5 ml dung dịch FeCl3 5%.
Lấy 0,01 g cắn mẫu thử đã cô cạn cho vào mỗi ống nghiệm. Thêm 1 ml dung dịch A cho hòa tan hết mẫu ống nghiệm và cho từ từ dung dịch B vào. Phản ứng dƣơng tính khi xuất hiện màu nâu đỏ giữa hai lớp chất lỏng [21].
51